Функціональна активність лейкоцитів в умовах впливу на організм високої та низької температур

А. Д. Тяпкіна, В. Д. Горічева

На живі організми впливають різні фактори зовнішнього середовища. При екстремальних впливах, до яких належать перегрівання та переохолодження організму, відбуваються зміни гомеостатичних констант, і перш за все що відносяться до системи крові [1]. Лейкоцити, які мають високу реактивність, швидко включаються в реакції адаптації.

Метою проведеного дослідження було комплексне вивчення функціональних властивостей лейкоцитів при перегріванні та переохолодженні організму.

Матеріал і методи дослідження

Досліди проведені на лабораторних білих щурах (90 тварин) з початковою масою тіла 330-400 м. В експерименті було виділено 7 груп тварин: два інтактні, служили контролем, і 5 експериментальних: 1 група - легкий ступінь теплового ураження, 2 - середній ступінь теплового ураження, 3 група - важкий ступінь теплового ураження, 4 група - переохолодження організму, 5 група -- переохолодження організму в умовах алкогольної інтоксикації. Три перші групи тварин витримували в термокамері при t 400 С без доступу до води. Тварин 4-й і 5-ї груп піддавали охолодженню у воді температурою 15 ° С. Тваринам 5-й групи додатково вводили в стравохід через еластичний зонд етиловий спирт (30%) у кількості 1 мл на 100 г маси тіла.

Змішану кров для дослідження брали шляхом декапітаціі у попередньо наркотізірованних тварин. Для запобігання згортання використовували гепарин в кількості 10 од/мл. Отриману кров центріфугіровалі 10 хв. при 1500 об/хв. Збирали лейкоцити. Домішка еритроцитів руйнували 0,83% розчином хлориду амонію. Клітини двічі відмивали ізотонічним буфером (розчин Дюльбекко). Відмиті клітини ресуспендіровалі і підраховували їх концентрацію в камері Горяєва.

Фагоцитоз

Для дослідження поглинаючої спроможності нейтрофілів використовували частки латексу розміром 0,8 мкм. Суміш лейкоцитів з латексом у співвідношенні 1: 50 інкубувати в термостаті при 37 ° С протягом 30 хв., струшуючи пробірку з лейкоконцентратом через кожні 5 хв. Потім у фіксованих метанолом і забарвлених АЗУР-еозином мазках підраховували відсоток фагоцитуючих клітин (фагоцитарна активність, ФА) і середнє число поглинених часток (фагоцитарний індекс, ФИ) [2].

Міграційна активність

Для постановки міграції під агарози використовували класичний варіант, описаний в численних монографіях і статтях. Агарози з додаванням культуральній клітинної середовища 199 нашаровується на предметні скла. Для оцінки спонтанної міграції в агарових гелі за допомогою пробійника вирізали одну лунку, в яку поміщали суспензію лейкоцитів (7-10x105клеток). На другому склі ставили реакцію індукованої міграції. Для цього вирізали групу з двох розташованих на відстані, що дорівнює діаметру пробійника (2,5 мм), лунок: одну -- для клітинної суспензії, друга - для хемоаттрактанта. Як хемоаттрактанта використовувалася свіжа плазма крові. Скло поміщали у вологу камеру при 37 ° С в атмосфері повітря з 5% вмістом СО2 на 2 години, потім занурювали в 2% розчин глутарового альдегіду на 60 хв. Після фіксації і видалення агарози клітини фарбували АЗУР-еозином по Романовському. В обох випадках для оцінки локомоціонной активності вимірювали площу розповсюдження клітин і розраховували хемотоксичний диференціал - відношення змін площі індукованої міграції в порівнянні з спонтанною до площі клітинного ареалу при мимовільної міграції (%) [3].

адгезійна здатність

За основу проведених маніпуляцій була взята методика, описана Megе J.-L. з співавт. 40 мкл суспензії лейкоцитів поміщали в капіляр з внутрішнім діаметром 0,56 мм, попередньо оброблений аутоплазмой. Клітини інкубувати під вологій камері при 370с протягом 60 хв. Подальші процедури були наступними. Клітинну суспензію обережно видаляли з капіляра при напрузі зсуву близько 0,1 Н/м2. Капіляр повторно заповнювали розчином Дюльбекко і звільняли від вмісту при напрузі зсуву 30 Н/м2. Вважали число клітин у вихідній суспензії, а також перший (неадгезіровавшіе і з малою силою зчеплення) і друга (з середньою силою зчеплення) змиві. З отриманих даних розраховували число клітин, що залишилися в капілярі (з великою силою зчеплення) [4].

Результати досліджень та їх обговорення

В ході досліджень були отримані наступні результати.

Зміни поглинаючої спроможності нейтрофілів в умовах гіпертермії виявили поетапне збільшення фагоцитарної активності і числа зайнятих тільки частинок (табл. 1). Приріст вивчених показників у порівнянні з контролем склав: 20 хвилин перегрівання - ФА - 8%, ФІ - 7%; 75 хвилин - ФА - 16%, ФІ - 37%; 120 хвилин - ФА - 24%, ФІ - 52%. При охолодженні тварин до стану холодного наркозу фагоцитарна активність змінювалася незначно (1%), а число зайнятих тільки частинок зростала (збільшення ФИ - 19%). Охолодження в умовах алкогольної інтоксикації негативно позначалося на функціональної активності нейтрофілів: достовірно знижувалися обидва показники ФА - 10%, ФІ - 37% (табл. 2).

Таблиця 1

Показники фагоцитарної активності у тварин, що піддавалися перегрівання        

Група         

Фагоцитарна активність (%)         

фагоцитарний індекс (отн. од.)             

Контроль         

75 ± 1,7         

7,5 ± 0,4             

I група тварин         

81 ± 0,8 *         

8,0 ± 0,2 *             

II група тварин         

87 ± 1,1 *         

10,3 ± 0,3 *             

III група тварин         

93 ± 0,7 *         

11,4 ± 0,4 *     

Примітка: * - Достовірність відмінностей порівняно з контролем (p