Сезонні коливання неспецифічної активності та опірності осмотичним і механічних дій лейкоцитів периферичної крові

М. З. Федорова, В. М. Левін, В. Д. Горічева, О. Н. Семенова

Згідно сучасними уявленнями сезонні ритми є однією з форм пристосувальних реакцій організму до циклічних змін навколишнього середовища і властиві всім рівням біологічної організації. Ціркануальние коливання виявлено та описано для багатьох показників системи крові та імунітету. Разом з тим, в хронобіологіческіх дослідженнях практично відсутні відомості про сезонних змін неспецифічної функціональної активності лейкоцитів, в Зокрема, взаємозв'язаних стадій фагоцитарного процесу (рух, адгезія, поглинальні здатність), і опірності дій навколишнього середовища. Метою проведеної роботи було вивчення фізіологічних реакцій лейкоцитів крові інтактних білих щурів в зимовий (січень-лютий) і літній (травень-червень) періоду.

Матеріал і методи дослідження

Досліди проведені на 24 безпородних щурах-самцях 300-400 р. Кров для досліджень брали шляхом декапітаціі у попередньо наркотізірованних тварин. В якості антикоагулянту використовували гепарин (10 од./мл). Кров центріфугітровалі, збирали лейкоцити. Домішка еритроцитів руйнували 0,83% розчином хлориду амонію. Клітини двічі відмивали Ізотонічний буфером (розчин Дюльбекко). Відмиті клітини ресуспензіровалі в цьому ж розчині.

Для вивчення локомоціонной активності використовували метод міграції під агарози [1]. У роботі застосовували два скла. На першому в агарових гелі вирізали одиночну лунку, куди поміщали суспензію лейкоцитів (7-10 х 105 клітин). За площею поширення клітин оцінювали спонтанну міграцію. Для оцінки індукованої міграції на другому склі вирізали групу з двох лунок - одну для клітинної суспензії, другий - для хемоаттрактанта. В якості останнього використовували свіжу аутоплазму.

адгезійну здатність оцінювали за методом, описаного [2]. Підраховували кількість клітин у вихідної суспензії. Після інкубації в термостаті, капіляр з лейкоцитами перфузіровалі розчином Дюльбекко при напрузі зсуву 30 Н/м2. Визначали число клітин в змиві. Розраховували кількість лейкоцитів, що залишилися в капілярі (клітини з великою силою зчеплення).

Для вивчення поглинаючої спроможності використовували частинки латексу (0,8 мкм) [3]. Визначали число (%) фагоцитуючих (фагоцитарна активність) і середнє число поглинених часток (фагоцитарний індекс).

Визначення осмотичній стійкості лейкоцитів проводили класичним способом за методом Storti [4]. Відсоток клітин, що збереглися після годинної інкубації в 0,2% розчині хлориду натрію служив показником осмотичній резистентності.

Ореолообразующую здатність оцінювали за способом, описаному в [5]. Відсоток ореолообразующіх клітин через 10 хв. інкубації характеризував швидкість ореолообразованія, а через 2-24 години - ореолообразующую активність.

Морфометричні характеристики і механічні властивості оцінювали в дослідах при переміщенні лейкоцитів у скляних капілярах зі звуженням (4 мкм) при постійному негативному тиску 60 мм вод. ст. [6]. Визначали об'єм і площа поверхні покояться (сферичних) і деформованих (еліпсоїдні) клітин, а також час відновлення до вихідної форми.

Всі отримані результати оброблені статистично. Достовірність відмінностей визначали за критерієм t Стьюдента. Наявність зв'язків між окремими ознаками оцінювали за коефіцієнтом лінійної кореляції.

Результати досліджень та їх обговорення

Порівняльний аналіз даних, отриманих при вивченні морфометричних характеристик, функціональних властивостей і реактивності лейкоцитів інтактних лабораторних щурів в зимовий та літній періоди показав наявність сезонних коливань неспецифічних фізіологічних реакцій білих клітин крові. У літні місяці встановлено істотне зниження загальної локомоціонной а фагоцитарної активності поліморфно-ядерних лейкоцитів (мал. 1 і 2): площа поширення клітин при спонтанної і стимульованої міграції в зимовий період становила 6,7 ± 0,6 мм2 і 7,7 ± 0,5 мм2, влітку - 3,5 ± 0,2 мм2 і 3,7 ± 0,2 мм2; число фагоцитуючих нейтрофілів, відповідно - 84 ± 1,6% і 75 ± 1,7%.

Меншими, в порівнянні із зимовим періодом, були також показники реактивності білих клітин крові. Зареєстровано значне зниження осмотичній стійкості і ореолообразованія (табл. 1).

Таблиця 1

Реакції лейкоцитів в середовищах з низькою і високою осмолярністю        

Сезон року         

Осмотічкеская резистентність   (%)         

Швидкість ореолообразованія (%)         

Ореолообразующая активність (%)             

Зима         

70 ± 7         

0,6 ± 0,05         

6,2 ± 1,90             

Літо         

47 ± 5 **         

0,3 ± 0,05 **         

1,0 ± 0,06 **     

Примітка: зірочка - достовірність відмінностей в порівнянні із зимовим періодом (р