Білоруський державний університет

Біологічний факультет

Кафедра молекулярної біології

Бактеріальний СИСТЕМА Секреція БІЛКІВ

ПЕРШОГО ТИПУ < p> Курсова робота студента 3 курсу

Войціцький А. М.

Науковий керівник: к.х.н., викладач Русь О. Б.

Мінськ 2004

Зміст

Введення 5

Коротка характеристика бактеріальних систем секреції 6

Будова системи секреції першого типу 8

ABC-транспортери 14
Організація генів, що кодують компоненти системи секреції першого типу 16

Сигнальні послідовності субстратів 18

Висновок 20

Список літератури 21

Список скорочень

АТФ-зв'язує касета (ATP-binding cassette)

- ABC

Білок, що зв'язує мембрани (Membrane fusion protein)

- MFP

Білок зовнішньої мембрани (Outer membrane protein)

- OMP

Ядерний магнітний резонанс

- ЯМР

Введення

Процес секреції білків є важливим аспектом життєдіяльностібактерій, оскільки значна кількість білків бактеріальної клітинилокалізовані поза цитоплазми. Здатність до секреції білків єнайважливішої для вірулентних бактерій, оскільки в процесі інфекції багатобілкові продукти повинні розташовуватися на зовнішній поверхні бактеріальноїклітини, або секретуватися в зовнішнє середовище. Крім того, секреція білківмає найважливіше значення для біотехнології, оскільки очищення білків зкультуральной середовища простого складу значно простіше, ніж з лизати,які представляють собою складні суміші різних речовин. У зв'язку з цимвивчення процесу білкової секреції є досить актуальною проблемою.
Результатом проведених раніше досліджень стало виявлення декількохшляхів експорту білка. Згодом вони були розділені на групи, усерединіяких процес секреції ідентичний або дуже схожий. Зараз виділяють п'ятьосновних типів секреції білків. Одним з них є система секреціїпершого типу. За допомогою цієї системи бактеріальні клітини експортуютьшироке коло різних субстратів, що включає в себе ферменти, токсини,полісахариди, антибіотики та ін з'єднання. Незважаючи на відноснупростоту пристрої цього апарату секреції, залишається ще достатнякількість нез'ясованих питань у цій галузі. Недостатня вивченістьбудови і функціонування цієї системи секреції, а також незаперечнаважливість секретується нею білків є причиною, через яку вивченняцієї теми є досить актуальним.

Метою даної роботи є збір та узагальнення наявної на цей деньінформації про бактеріальної системі секреції першого типу.

Коротка характеристика бактеріальних систем секреції

Для секреції білків бактеріальні клітини використовують різні системисекреції в залежності від будови і кінцевою локалізації білка. Томує необхідним приведення невеликого огляду систем секреції всіхтипів.

Секреція першого типу. Апарат цієї системи секреції влаштований щодопросто. Він включає в себе три компоненти білкової природи. Ця системає Sec-незалежної і здійснює секрецію субстратів безпосередньоз цитоплазми в одну стадію без періплазматіческіх посередників. З цьогошляху секретуються токсини, протеази, ліпази, антибіотики та іншіз'єднання (D. Thanassi et al., 2000).

Секреція другого типу. Ця система секреції влаштована вже досить складно.
Характерною особливістю є її поділ на дві частини і секреціясубстратів у дві стадії. Перша частина, яка називається Sec-системою,експортує білки через цитоплазматичну мембрану, далі білки абозалишаються в периплазмі, або секретуються через зовнішню мембрануза допомогою термінальних компонентів системи секреції (S. Lory, 1998). ЗаЦим шляхом секретуються такі білки, як пектатліази, пектінметілестеразиі целюлази роду Erwinia, целюлазу, протеази і амілаза Xanthomonascampestris, ліпаза, фосфоліпаза, еластаза, ентеротоксин А у Pseudomonasaeruginosa, амілази і протеази Aeromonas hydrophila, Хітиназа, протеази іхолерний токсин Vibrio cholerae (J. Hacker at al., 2000). У зв'язку з великимкількістю і різноманітністю субстратів, секретується через цей апаратсекреції, його називають "загальним секреторний шляхом" (General Secretory
Pathway, GSP).

Секреція третього типу. Цей тип секреції, подібно до першого типу, єнезалежним від Sec-системи. Характерною особливістю його є доставкасубстратів (чинників вірулентності) безпосередньо в кліткуеукаріотичного господаря, також наявність великої кількості секреторнихшаперонів. Сам апарат включає в себе близько двадцяти білкових компонентів,більша частина яких розташована у внутрішній мембрані, і за структуроюдосить схожий з системою збирання джгутика. За допомогою системи секреціїтретього типу експортуються багато факторів вірулентності патогенівлюдини і тварин, а також Avr-білки, харпіни та інші факторивірулентності фітопатогенних бактерій (J. Hacker еt al., 2000).

Секреція четвертого типу. Апарат секреції четвертого типу складається здвох компонентів: кон'югаціонного каналу, через який відбуваєтьсятранслокація субстратів, і кон'югаціонного пілюса, необхідного дляконтакту з реціпіентной клітиною. Будова цієї системи секреції схожі набудовою апарату кон'югації деяких плазмід. Вона також володіє широкоюспецифічністю як субстратів (експортуються великі нуклеопротеїднікомплекси, складні білкові токсини, мономірні білки), так і реципієнтів,тому що ними можуть служити практично всі живі організми (S. Lory, 1998).

Секреція п'ятого типу. У деяких публікаціях іменується системою секреціїчетвертого типу. Ця система секреції включає в себе групу білків,званих Автотранспортер, до числа яких відносяться: протеази (IgA)
Neiseria gonorrhoeae, цитотоксинів (Vac) Helicobacter pylori.
Автотранспортер експортуються з цитоплазми через Sec-систему звідщеплення сигнальної аміноконцевой послідовності. Деякі з нихможуть залишатися заякореннимі в клітинній стінці, інші ж експортуютьсябезпосередньо під позаклітинне простір (J. Hacker еt al., 2000).

Будова системи секреції першого типу

У порівнянні з іншими системами секреції апарат секреції першого типувлаштований відносно просто. У всіх випадках він складається з трьох компонентівбілкової природи. Перший належить до класу АТФаз, званих ABC -транспортерами і забезпечує енергозалежні стадії процесу транспорту.
Цей білок є заякоренним у внутрішній мембрані і що асоціюється іздругий білком MFP, що забезпечує злиття цитоплазматичної і зовнішньоїмембрани, і фактично утворюють канал, через який транспортуєтьсясекретується білок. Третій білок OMP, так званий білок-Швейцарії
(gatekeeper), локалізована в зовнішній мембрані. Його функцією єстворення секреторного мембранного каналу і його закриття під час відсутностісубстрату (D. Thanassi еt al., 2000).

Рис. 1. Будова системи секреції I типу.

(по D. Thanassi еt al., 2000)

Перший тип секреції використовується широким колом грамнегативнихбактерій для експорту токсинів, протеаз, ліпаз. Крім того, ця системазберігається при переході від прокаріотів до еукаріотів і експортує великекількість токсинів і антибіотиків. Система секреції першого типу є Sec -незалежною і експортує білки в один етап безпосередньо з цитоплазмив зовнішнє середовище через зовнішню мембрану без періплазматіческіх посередників.
Субстрати цієї системи секреції позбавлені сигнальних аміно-кінцевихпослідовностей, сигнал до секреції у них розташований на карбокси-кінці вмежах останніх 60 амінокислотних залишків (D. Thanassi еt al., 2000).

Система секреції?-гемолізини Escherichia сoli являє собоюпрототип системи секреції першого типу, і на сьогоднішній день добревивчена. Вона складається з трьох компонентів: TolC, HlyD, HlyB. Білок TolCє аналогом OMP для експорту?-гемолізини, і представляє собоютрімерний комплекс, розташований у зовнішній мембрані. Передбачається, щовін складається з поріноподобного?-складчастої мембранного домену згідрофільній карбокси-кінцевий областю, розташованої в періплазматіческомпросторі. Однак, нещодавній аналіз послідовності вказує на те,що TolC та інші OMP не є порина. OMP функціонує як каналсекреції через зовнішню мембрану, що було доведено пороутворюючих дієюолігомерів TolC в експериментальних ліпідних бішару (D. Thanassi еt al.,
2000). Періплазматіческій MFP (HlyD) також є трімерним івзаємодіє і з OMP, і з ABC-транспортером (HlyB). HlyD міститькороткий гідрофільний аміно-кінцевий домен, заякоренний у внутрішніймембрані, що включає близько 150 амінокислотних залишків; великий гідрофобнийдомен, розташований в периплазмі, що включає 275 амінокислотних залишків,і карбокси-кінцевий домен, що має?-складчасту структуру, здатнийзв'язуватися із зовнішньою мембраною, що містить 275 амінокислотних залишків (M.
J. Fath еt al., 1993). Передбачається, що MFP полегшує секрецію субстратубез проміжного періплазматіческого ланки, формуючи закритий канал,з'єднує внутрішню і зовнішню мембрани, і здійснюючи прямий контактміж ABC-транспортером і OMP. Що стосується HlyB, то його точне будовапоки не встановлено, передбачається, що він складається з восьми доменів. Дваз них у аміно-кінцевий області та шість в центральній гідрофобною області.
Результати експериментального вивчення цього апарату призвели довиникнення двох моделей секреції першого типу (D. Thanassi еt al.,
2000).

Експерименти по секреції?-Гемолізини E. coli показують, що ABC -транспортер і MFP асоціюються ще до зв'язування з субстратом.
Прикріплення субстрату до цього комплексу викликає контакт MFP з OMP. Цез'єднання є оборотним, і руйнується відразу після експортусубстрату. Енергія гідролізу АТФ за допомогою ABC-транспортера витрачаєтьсятільки на транслокації субстрату і не потрібно для зв'язування субстратуабо для збирання комплексу (D. Thanassi еt al., 2000).

Експерименти по секреції гемопротеїни Serratia мarcescens іметалопротеаз Erwinia chrysanthemi вказують на трохи інший порядокподій. За цією моделлю, ABC-транспортер і MFP не зв'язуються передзакріпленням субстрату. Субстрат в першу чергу зв'язується з ABC -транспортером, потім утворився комплекс асоціюється з MFP, і тількипотім відбувається зв'язування з OMP, після чого відбувається секреціясубстрату. Для визначення правильної моделі, або для уточнення можливихіндивідуальних відмінностей у функціонуванні апарату секреції першого типунеобхідні подальші дослідження (D. Thanassi еt al., 2000).

Було встановлено, що ОМР системи секреції?-гемолізини (TolC),використовується також у системі секреції коліціна V і в деяких іншихсистемах, наприклад при сегрегації хромосом, а також він може формуватиканал в зовнішній мембрані, специфічний для медикаментів. ОМР системисекреції гемопротеїни S. marcescens, званий HasF, є у високіймірою ідентичним з TolC E. сoli. Для відтворення секреції HasА в E. сoliнеобхідна наявність як ОМР або TolC, або HasF, або PrtF. Такігібридні секреторні системи функціонують як для секреції HasA, так ідля секреції протеази. Це є типовим прикладом комплементаціі ОМР
(R. Binet et al., 1997). Зокрема, ступінь гомології між компонентамисистеми секреції ліпази S. marcescens, білками lipB, lipC, lipD ікомпонентами транспортера металопротеаз Er. chrysanthemi PrtD, PrtE, PrtFскладає 45-55%. А гомологія між LipB і LipC, і HasD, і HasE у S.marcescens становить 45-53%. Ці показники вважаються досить високими
(H. Akatsuka et al., 1998). Однак було виявлено, що не всі комбінаціїміж компонентами гібридних секреторних систем є активними. Так,
HasE формує активні експортери і з PrtF, і з TolC, тоді як PrtE можеформувати активний експортер тільки з PrtF, але не з TolC. Дослідженняцих мультібелкових комплексів in vitro підтвердили існування деякихфункціональних відмінностей між HasE і PrtE. Отримані результати можуть бутикорисними при визначенні сайтів, відповідальних за зв'язування MFP і OMP (H.
Akatsuka et aj., 1998).

З іншого боку, дослідження in vivo та in vitro показують, що HasD і
PrtD можуть утворювати активні секреторні системи з PrtE і HasE в будь-якихкомбінаціях (H. Akatsuka et al., 1998).

Також були проведені дослідження з вивчення секреції ліпази LipA S.marcescens за допомогою систем LipB-LipC-LipD і HasD-HasE-HasF. У результатідослідів було з'ясовано, що HasD-HasE-HasF-транспортер здійснює секрецію
LipA так само ефективно, як і LipB-LipC-LipD. LipB-HasE-HasF-система моглавиробляти секрецію LipA, але не була здатна секретувати HasA, система
HasD-Lip-CLipD не була здатна до секреції обох субстратів (H. Akatsuka etal., 1998).

У разі експериментів з системами секреції ліпази LipA S. marcescens іметалопротеаз PrtC E. chrysanthemi були отримані подібні результати,наведені в таблиці:

Таблиця 1

Ефективність гібридних систем секреції (по H. Akatsuka et al., 1998).

Не всі комбінації компонентів привели до формування ефективних системсекреції. Отримані результати дозволили зробити деякі конкретнівисновки. Зокрема, що PrtD-PrtE-LipD-система не здатна експортуватині LipA, ні PrtC, у той час як, LipB-LipC-PrtF-система виявиласянастільки ж функціональної для LipA секреції в E. coli як і в S.marcescens. PrtE може взаємодіяти тільки з PrtF, тоді як HasE і
LipC показують більш широкі можливості зв'язування з різними білками.
Було також встановлено, що PrtD не може асоціюватися з LipC, а LipB-
PrtE-PrtF-система є дуже неефективною відносно експорту LipA і
PrtС (H. Akatsuka et al., 1998).

У ході досліджень було встановлено вплив шаперони SecB на процессекреції HasA у S. marcescens. Точне його значення на даний момент невстановлено, але було показано, що інактивація цього шаперони призводить доблокування секреції HasA (P. Delepelaire et al., 1998).

До теперішнього часу встановлено будову систем секреції першого типу убагатьох мікроорганізмів, деякі з них наведені в таблиці 2. Однакзалишається досить велика кількість секреторних систем неповного складу,для яких залишаються нез'ясованими або деякі компоненти, абосубстрати (MJ Fath еt al., 1993).

таблиця2
Деякі системи секреції першого типу (по MJ Fath еt al., 1993).

ABC-транспортери

Сімейство АВС-транспортерів включає в себе специфічні АТФ-що зв'язуютьбілки-транслокатори. У 1993 році M. J. Fath (M. Fath еt al., 1993)запропонував класифікувати їх на три групи: Еукаріотичні АВС -транспортери, бактеріальні АВС-іпортери і бактеріальні АВС-експортери, нарис.2 представлена будова деяких з них. Характерно, що ABC-білкиє консервативними і здійснюють трансмембранний перенесення великогокількості субстратів як у прокаріотів, так і в еукаріотичнихклітинах. Вони найбільш часто складаються з двох закріплених у мембранігідрофобних і двох консервативних гідрофільних АТФ-зв'язуючих доменів. Цідомени можуть бути як частинами одного поліпептиду, так і декількохокремих поліпептидів. У дослідах in vitro було показано, що в ряді випадківцих чотирьох доменів одного або декількох поліпептидів виявляєтьсядостатньо для здійснення трансмембранного переміщення розчинів. І всеж більшість бактеріальних ABC-транспортних систем включає в себерізні додаткові білки. Цими додатковими білками є MFPі OMP (R. Binet et al., 1997).

АВС-імпортери мають будову, схожу з усіма іншими представникамитранспортних АТФ-аз. Але при утворенні транспортної системи вониприєднують інші компоненти. У системах, що здійснюють імпорт,відсутні характерні для системи першого типу OMP і MFP. Замість нихприсутній особливий періплазматіческій білок, який зв'язується зімпортованим субстратом і надає його АТФ-азе для безпосередньогопереносу (M. Fath еt al., 1993).

Крім АВС-експортерів, які здійснюють транспорт білків, у бактеріальнихклітинах існує велика група АВС-експортерів, що виконують транспортнебілкових субстратів, наприклад, полісахаридів та іонів. Характерноюособливістю цих переносників є те, що вони самі утворюють активнутранспортну систему і не вимагають ніяких додаткових білків. Транспорту цьому випадку здійснюється не в позаклітинне простір, а впериплазмі (M. Saier, 2000).

Подібні АВС-транспортери виявлені як в клітинах грампозитивних іграмнегативних бактерій, так і в клітині (M. Fath еtal., 1993).

Рис. 2. Будова АВС-транспортерів (за M. Fath еt al., 1993).

Організація генів, що кодують компоненти системи секреції першого типу

Як правило, гени, що кодують всі три компоненти системи, організовані водин Оперон, зазвичай разом з генами, що кодують секретується білок. ДоНаприклад, гени, що кодують чотири схожих за будовою металопротеаз E.chrysanthemi: PrtA (50кДа), PrtB (53 кДа), PrtC (55 кДа), PrtG (58 кДа)орга?? ізовани в один Оперон з генами, що кодують всі три компоненти системиїх секреції: PrtD (ABC-транспортер), PrtE (MFP), PrtF (OMP). У випадку з E.coli, ген hlyA, що кодує?-гемолізини, об'єднаний з генами hlyB і hlyD,кодують відповідно ABC-транспортер і MFP. Так само справа йде і у
S. marcescens. Ген hasA, що кодує позаклітинний гемопротеїни, організований уодин Оперон з генами hsaD (ABC-транспортер) і hasE (MFP). У цих двохвипадках ген, що кодує OMP, в єдиний Оперон не включається і утримуєтьсяокремо. Крім того, у S. marcescens виявлений Оперон, який містить лишегени, які детермінують компоненти системи секреції і ні одного гена,відповідального за синтез експортних білків. Він містить три гена: lipB (ABC -транспортер), lipC (MFP), lipD (OMP) (H. Akatsuka et al., 1998). Буввиявлено також ряд Оперон, які містять гени, які не відносяться ні досистемі секреції, ні що є генами секретується білків. Ці геникодують білки, які тим або іншим чином виконують регуляторну функцію
(M. Fath еt al., 1993).

Організація Hly-Оперон і деяких інших Оперон представлена на рис.
3. Ген кодує hlyA 1023 амінокислоти?-Гемолізини (HlyA), hlyB кодує
707 амінокислот ABC-транспортера (HlyB), hlyD кодує 477 амінокислот MFP
(HlyD), і hlyC кодує 170 амінокислот білка, який не маєсекреторної функції, але полегшує активацію HlyA. Ген tolC, що кодує 495амінокислот OMP (TolC) в цей Оперон не включається і міститься окремо.

На даний момент виявлено і розшифровані Оперон систем секреції першимтипу багатьох мікроорганізмів (M. Fath еt al., 1993).

Рис. 3. Оперон організація генів, що кодують компоненти системисекреції I типу деяких бактерій. Зверху вниз: система секреції? --гемолізини E. coli, протеаз E. chrysanthemi, коліціна V E. coli, субтіліна
B. subtilis, капсулярних полісахариду E. coli (за M. Fath еt al., 1993).

Сигнальні послідовності субстратів

Субстрати, секретуються за допомогою системи секреції першого типу, немають сигнальних аміно-кінцевих послідовностей. Замість них єкарбокси-кінцеві секреторні сигнали, розташовані в межах останніх
60 амінокислотних залишків, вперше виявлені на?-Гемолізини. Уекспериментах з протеази PrtG E. chrysanthemi було встановлено, щонайменша карбокси-концевая послідовність, що дозволяє початиефективну секрецію, містить останні 29 амінокислот PrtG, крім того,низька, але все-таки суттєва секреція може бути індукована останніми
15 амінокислотами PrtG (R. Binet et al., 1997). Крім того, було показано,що карбокси-концевая сигнальна послідовність, що складається знегативно заряджених амінокислотних залишків, є консервативноюдля гомологічних протеаз. Порівняння послідовностей показало, щопротеази і ліпази теж мають дуже подібні карбокси-кінцевіпослідовності. Однак важливим є той факт, що гомологіяпослідовностей цих сполук є неповною. А ось секреторнісигнали протеаз і різного роду токсинів є дуже різними іспецифічними, крім того, комплементація між компонентами системсекреції цих двох сімейств білків є дуже незначною. Тим неменше, кожен сигнал може індукувати секрецію чужорідного білказа допомогою свого специфічного транспортера (R. Binet et al., 1997).

Вивчення фрагменту карбокси-кінця очищеної протеази G за допомогою ЯМРпоказало, що він являє собою стабільну?-спіраль, розташовануперед 7 - 8 кінцевими амінокислотними залишками.

При вивченні процесів секреції білків була показана роль особливої області,розташованої вище карбокси-кінцевий сигнальної послідовності набільшості експортованих субстратів. Токсини, протеази і ліпази,секретуються системою секреції першого типу, мають таку область,що складається з багатої гліцином послідовності (GGXGXD), якаповторюється 4-36 разів, в залежності від білка.

При порівнянні процесів секреції різних білкових субстратів,що містять такі послідовності, було встановлено, що вони граютьнайважливішу роль при секреції деяких пептидів. Можливо, що багатігліцином повтори діють як внутрішні шаперони, сприяючи кращомурозділення секреторного сигналу і залишку білка (R. Binet et al., 1997).

Висновок

За допомогою системи секреції першого типу секретується широке колосубстратів, що включає в себе ряд ферментів, токсинів, антибіотиків, іінших біологічно активних сполук. Ця система секреції характернаяк для прокаріотів, так і для еукаріотів. У всіхвипадках вона складається з трьох компонентів білкової природи: ABC-транспортера,який є АТФ-Азою, що здійснює енергозалежні стадіїтранслокації; білка, який формує періплазматіческій канал, який з'єднує ABC -транспортер з третім компонентом системи - білком-швейцаром, що утворитьсекреторний канал в зовнішній мембрані. Система секреції першого типує Sec-незалежної і здійснює секрецію субстрату в однустадію з цитоплазми безпосередньо під позаклітинне простір безприсутності будь-яких періплазматіческіх посередників. Сигналом до секреціїз цього типу є послідовність з 60 амінокислотних залишків,що знаходиться на карбокси-кінці поліпептиду. Виявлено також гібридні системисекреції першого типу, що складаються з компонентів притаманних різним системамцього типу. Незважаючи на відносно простий пристрій даної системисекреції у порівнянні з іншими апаратами секреції, існує доситьвелика кількість незрозумілих і спірних питань у цій галузі. Зокрема,недостатньо вивчена послідовність подій в процесі секреціїсубстратів, а також видова специфічність будови самої системи. У зв'язку зцим і важливим значенням секретується сполук, вивчення цьогопитання є дуже актуальним і перспективним.

Список літератури

1. H. Akatsuka, R. Binet, E. Kawai, C. Wandersman, and K. Omori. Lipase secretion by bacterial hybrid ATP-Binding Cassette Exporters: molecular recognition of the LipBCD, PrtDEF, and HasDEF exporters.//

Journal of bacteriology. - 1997. - Vol. 179. № 15 - Р. 4754-4760.

2. R. Binet, S. Leґtoffe, J. M. Ghigo, P. Delepelaire, C. Wandersman.

Protein secretion by Gram-negative bacterial ABC exporters - a review.

// Gene. - 1997. - Vol. 192. - Р. 7-11.

3. W. H. Bingle, J. F. Nomellini, and J. Smit. Secretion of the

Caulobacter crescentus S-Layer potein: further localization of the C-terminal secretion signal and its use for secretion of recombinant proteins.// Journal of bacteriology. - 2000. - Vol. 182. № 11. - Р.

3298-3301.

4. P. Delepelaire, C. Wandersman. The SecB chaperone is involved in the secretion of the Serratia marcescens HasA protein through an ABC transporter.// EMBO J. - 1998. - Vol. 17. № 4. - P. 936-944.

5. M. J. Fath, R. Kolter. ABC Transporters: Bacterial Exporters.//

Microbiological reviews. -1993. - Vol. 57. № 4. - Р. 995-1017.

6. J. Hacker, J. B. Kaper. Pathogenicty islands and the evolution of microbes.// Annu. Rev. Microbiol. - 2000. - Vol. 54. - Р. 641-79.

7. C. J. Hueck. Type III Protein Secretion Systems in Bacterial Pathogens of Animals and Plants.// Microbiology and molecular biology reviews.

- 1998. - Vol. 62. № 2. - Р. 379-433.

8. S. Letoffe and C. Wandersman. Secretion of CyaA-PrtB and HlyA-PrtB

Fusion Proteins in Escherichia coli: Involvement of the Glycine-rich repeat domain of Erwinia chrysanthemi protease B.// Journal of bacteriology. - 1992. - Vol. 174. № 15 - Р. 4920-4927.

9. S. Lory. Secretion of proteins and assembly of bacterial surface organelles: shared pathways of extracellular protein targeting.//

Current Opinion in Microbiology. - 1998. - Vol. 1. - Р. 27-35.
10. L. M. Moreira, J. D. Becker, A. P. and A. Becker. The Sinorhizobium meliloti ExpE1 protein secreted by a type I secretion system involving

ExpD1 and ExpD2 is required for biosynthesis or secretion of the exopolysaccharide galactoglucan.// Microbiology. - 2000. - Vol. 146.

- Р. 2237-2248.
11. M. H. Saier. Families of transmembrane sugar transport proteins.//

Molecular Microbiology. - 2000. - Vol. 35. № 4. - P. 699-710.
12. D. G. Thanassi, S. J Hultgren. Multiple pathways allow protein secretion across the bacterial outer membrane.// Current Opinion in

Cell Biology. - 2000. - Vol. 12. - Р. 420-430.