МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І
ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ
Красноярський державний університет
Біологічний факультет
Кафедра біохімії та фізіології людини і тварин
С.А. Костогорова студентка 4 курсу
вмісту аскорбінової, дегідроаскорбінової І ДІКЕТОГУЛОНОВОЙ КИСЛОТ У
ЕРИТРОЦИТАХ ЗДОРОВИХ ДІТЕЙ І страждають інсулінозалежний цукровий діабет
(курсова робота)
Науковий керівник : к.б.н., доц. Титова Н.М.
Красноярськ, 1999
зміст
Введення 2
Розділ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ 3
1.1.біохіміческіе процеси при дозріванні та старінні еритроцитів 3
1.1.1. Характеристика еритроцитів 3
1.1.2. Енергетичний обмін в еритроцитах 5
1.1.3. Антиоксидантна система еритроцитів 6
1.2. Аскорбат як компонент АОС еритроцитів 8
1.2.1. Будова і фізико-хімічні властивості аскорбату 8
1.3. Цукровий діабет як один з распространеенних патологічних процесів 9
Розділ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ 11
2.1. Підготовка еритроцитів 11
2.2. Метод роздільного визначення аскорбінової, дегідроаскорбінової і дікетогулоновой кислот в еритроцитах 11
2.3. СТАТИСТИЧНА ОБРОБКА РЕЗУЛЬТАТІВ 13
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ 14
ВИСНОВКИ 15література 16
SUMMARY 19
Додаток 20
Введення
Зрілі еритроцити ссавців - це високоспеціалізованібез'ядерні клітини. Основною функцією еритроцитів є транспорткисню від клітини до тканин і вуглекислоти в зворотному напрямку. Високіконцентрації кисню і процеси оксигенації - деоксігенаціі гемоглобінуобумовлюють освіта високореакціонних інтермедіатів кисню,що викликають порушення нормального функціонування клітини. Існуєантиоксидантна система захисту клітини від вільнорадикального окислення. Уїї склад входить ряд ферментів і небілкових речовин. Важливу роль уантиоксидантного системі відіграє речовина небілкової природи - аскорбат. Вінмає широкий спектр антиоксидантних властивостей, зокрема, тількиаскорбат досить реакціонноспособен для ефективного інгібуванняініціації перекисного окислення ліпідів. Аскорбат блокує поглинаннякисню та освіта перекису водню; присутність аскорбату в клітинахнадає захисну дію на гемоглобін, перешкоджаючи його окислення.
Аскорбат в ході виконання своїх біохімічних функцій оборотно переходить вокислених форму - ДАК і ДКГК. Основну роль у біохімічних процесахграє редокс-пара - АК/ДАК. За даними літератури, це співвідношення можезмінюватися при різних патологічних процесах, одним з найбільшпоширених з них є інсулінзалежний цукровий діабет.
Дослідження, спрямовані на вивчення зміни змісту АК, ДАК і ДКГКв клітинах можуть бути одним з критеріїв, що свідчать про наявність ворганізмі вищевказаних процесів.
Метою даної роботи було визначення вмісту АК, ДАК, ДКГК в загальнійеритроцитарної масі у дітей, які страждають на інсулінозалежний цукровийдіабет. Дана робота є частиною досліджень, що проводятьсяна кафедрі біохімії та фізіології людини і тварин КДУ з вивченняметаболізму еритроцитів.
Розділ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
1.1.біохіміческіе процеси при дозріванні та старінні еритроцитів
1.1.1. Характеристика еритроцитів
Зрілий еритроцит людини є спрощеною клітиною по біохімічної іструктурної організації. Це високоспеціалізована Без'ядерна клітина.
Еритроцити людини утворюються з ядерні клітин переважно вкістковому мозку. У цих попередниках еритроцитів містяться субклітинніструктури і ферментні системи, необхідні для поділу, дозрівання,диференціювання, процесів біосинтезу ДНК, РНК, білків, у тому числіглобіну, синтезу гему, ліпідів, вуглеводів, інших сполук. На ційстадії розвитку еритроцита здійснюються окислювальні процеси, тканиннедихання, анаеробне розщеплення вуглеводів (гліколіз), пряма окисленняглюкози через пентозофосфатного шлях (Черняк Н.Б., 1976).
До цих пір немає достатньо чітких уявлень про те, як співвідносятьсяокремі стадії дозрівання ядерних клітин зі змінами хімічногоскладу та обміну речовин. Однак відомо, що в процесі розвитку клітинина стадії нормобластів зменшується кількість РНК, збільшується вмістгемоглобіну і втрачається здатність до синтезу ДНК, у зв'язку з чимпорушується здатність до мітотичного ділення.
Ретикулоцити - без'ядерні клітини, які утворюються на останньому етапідозрівання, що передує утворення еритроцитів, характеризуються схожоюморфологією, зокрема, містять мітохондрії, рибосоми, ЕПР. Уретикулоцитах здійснюється біосинтез глобіну, гему, пуринів,пірідіннуклеотідов, фосфатидів, ліпідів (Федоров Н.А., Черняк Н.Б., 1976).
РНК практично не синтезується. Відбувається фосфорилювання, зв'язанез окисленням, і гліколіз (Гінодман Л.М., 1968). В обміні речовинретикулоцитів беруть участь ендогенні та екзогенні субстрати, у тому числіамінокислоти, глюкоза.
Останній етап дозрівання - перетворення ретикулоцитах в еритроцит --протікає 1-3 дні. Відбуваються значні зміни в обміні речовин іморфології клітин (Федоров Н.А., 1976).
У зрілих без'ядерних еритроцитах порушені біологічний апарат дихання,системи синтезу білка, пуринів, порфіринів. Зберігається здатність догліколізу, утилізації невеликої кількості глюкози в пентозном циклі ісинтезу деяких з'єднань, наприклад, глутатіону.
У нормі тривалість життя еритроцитів підтримується протягом 120 днівспеціалізованими ферментними системами. Виведення еритроцитів зциркуляції пов'язані зі змінами (структурних компонентів, хімічногоскладу, джерел енергії), що характеризують старіння клітин. Найбільшхарактерними змінами при старінні еритроцитів є:
1) зменшення активності різних ферментів гліколізу і пентозного циклу, що знижує інтенсивність цих процесів (Мортенсен, Брайн,
1974); < p> 2) зменшення вмісту ліпідів, що призводить до зміни структури еритроцитів, збільшення чутливості до осмотичного лізису і механічних дій;
3) зміни у складі катіонів внаслідок зміни проникності мембрани;
4) зміна вмісту АТР, що в свою чергу зв'язується як з однією з причин порушення проникності, так і зі зменшенням приживлюваності еритроцитів в кров'яному руслі.
Однією з провідних гіпотез старіння є вільнорадикальних гіпотеза, запропонована Д. Хартманн. Вона пов'язує причини вікових змін з накопиченням молекулярних пошкоджень в мембранах і генетичному апараті клітини вільними радикалами і продуктами перекисного окислення ліпідів. Порушення нормального функціонування клітини обумовлене високими швидкостями освіти високореакціонних інтермедіатів кисню (супероксідрадікал, пероксид водню, гідроксильний радикал), що, у свою чергу, пов'язано з постійно протікають процесами оксигенації і деоксігенаціі гемоглобіну і наявністю високих концентрацій кисню в ході виконання основної функції еритроцитів - транспорту кисню від клітини до тканин і вуглекислого газу у зворотному напрямку.
1.1.2. Енергетичний обмін в еритроцитах
Для підтримки функціональної активності клітин організму необхіднавитрата енергії. Зрілі еритроцити, що циркулюють в кров'яному руслі,є метаболічно активними клітинами, незважаючи на відсутністьздатності до синтезу білків, аеробних розщеплення глюкози в лімоннокісломциклі Кребса (Владимиров Г.Е. по Рапопорт, 1970). Основним процесомобміну енергії в них є гліколіз. Процес, що протікає в еритроцитах,близький до процесів в інших клітинах і тканинах, і докладно описаний (Федоров
Н.А. по Райкера, 1976).
До особливостей гліколізу в еритроцитах можна віднести використання,крім глюкози, інших моносахаридів: фруктози, маннози, галактози, а такожінозину, сорбіту за наявності відповідних ферментів (Йошікава, 1968). Упроцесі гліколізу відбувається утворення АТР і NADH. Енергія гліколізувикористовується для активного транспорту катіонів через клітинну мембрану іпідтримання співвідношення між іонами калію і натрію в еритроцитах і плазмі,для збереження цілісності мембрани і двояковогнутой форми клітини.
Утворюється NADH використовується для відновлення піровиноградної кислоти вмолочну і для відновлення метгемоглобіну за участюметгемоглобінредуктази. У складі метгемоглобіну міститься тривалентнезалізо, внаслідок чого він не здатен до транспорту кисню. Характерноюособливістю гліколізу в еритроцитах є перетворення 1,3 --діфосфогліцерата не тільки в 3-фосфогліцерат, але і в 2,3 --діфосфогліцеріновую кислоту під дією діфосфогліцеромутази. 2,3 --діфосфогліцерат має, поряд з АТР, важливе значення в регуляції спорідненостігемоглобіну до кисню. У міру старіння еритроцита відбувається зменшенняздатності до відновлення метгемоглобіну в гемоглобін, тобто порушенняфункціональної активності еритроцита. Це пов'язано саме зі зменшеннямінтенсивності гліколізу, в результаті якого утворюється NADH, необхіднийдля дії метгемоглобінредуктази. Зменшення вмісту 2,3 --діфосфогліцерата призводить до зрушення діссоціаціонной кривої вліво, погіршеннявіддачі кисню тканинам.
Підсумком всіх реакцій гліколізу є перетворення 1 молекули глюкози в
2 молекули молочної кислоти з одночасним перетворенням 2 молекул ADP в 2молекули АТР.
Поряд з гліколізу - анаеробним розщепленням глюкози до молочноїкислоти - в еритроцитах існує додатковий шлях утилізації глюкози --пряме окислення до вуглекислого газу і води в ході пентозофосфатного циклу.
Цей шлях не відрізняється від подібних процесів, що протікають в інших клітинах ітканинах; сумарним результатом циклу є окислення однієї з 6 молекулглюкозо-6-фосфату до 6 молекул СО2 та відновлення 12 молекул NADPH. Рольпентозного циклу в зрілих еритроцитах полягає, з одного боку, восвіту пентозофосфатов. В реакції циклу утворюється 3 --гліцероальдегідфосфат, що піддається перетворенням в ланцюзі гліколітичніреакцій і, таким чином, є додатковим джерелом енергії.
Основне значення пентозофосфатного циклу укладено в освіті молекул
NADPH. Значення NADPH визначається його участю в ряді реакцій, необхіднихдля підтримання функціональної активності і цілісності еритроцитів. До них?. Різніфункціональні похідні по них позбавляють молекулу вітамінної активностімайже повністю, як і гідрування ненасиченої зв'язку лактонного кільця.
Тому L-ДАК має вітамінну активність, рівноцінну L-АК, тоді як 2,3 -
ДКГК повністю її позбавлена. Внаслідок легкої окислюваність L-АК - донор Н +,вона кількісно легко відновлює численні сполуки, як-то:йод, перманганат калію та інші. L-АК - переносник Н + в деякихферментативних реакціях живої клітини, вона легко окислюється пероксидазою,цитохромоксидази, каталази. L-АК відновлює окислені формиферментів, окислюючись в ДАК, оборотно легко регенеруються в АК піддією глутатіону за рахунок його сульфгідрильної групи:
Окислення АК каталізується міддю, меншою ступеня - катіонами сріблаі заліза. Є припущення, що специфічним каталізатором окислення
АК у тваринних організмах є білок, що синтезується в печінці,здійснює транспорт міді, що володіє оксігеназной активністю, --церулоплазмін. У меншій мірі окислення аскорбату каталізують іншікатіони, зокрема, срібла і заліза. Комплексон, флавоноїди гальмуютьокислювальний розпад АК. Деякі білки інгібують окислення АК,зв'язуючись з нею або шляхом утворення комплексу з міддю - сироватковіглобуліни (Борець, 1980). Окислення гальмується-SH містять сполуками:сірчиста кислота блокує фермент аскорбіназу; З-SH зв'язує іони Cu +,видаляючи т. з. каталізатор окислення АК з реакції (Ківерін, 1971).
1.2.2. Біосинтез АК у живому організмі
L-АК синтезується в рослинах і організмі деяких тварин з D -глюкози через лактон D-глюкуроновою кислоти і L-гулоно-?-лактон або їхпохідне. У процесі біосинтезу відбувається перетворення сполук D-рядуна посилання L-ряду (Березовський, 1993):
Біосинтез АК в організмі тварин відбувається в клітинах печінки, нирок,надниркових залоз, гіпофіза, стінки тонкого кишечника (Ківарін, 1973).
1.2.3. Фізіологічні властивості аскорбату
Вітамін С є постійною складовою частиною тканин і органівлюдини. Його надходження в організм має бути щоденним, тому щоаскорбат, граючи важливу роль в обмінних процесах організму, весь часвитрачається. Він відновлює окислені форми ферментів, активуєдеякі протеази, гальмує дію амілази і протеази підшлунковоїзалози, активує естераз печінки. L-АК бере участь в обміні деякихароматичних амінокислот, регулює рівень холестерину в крові,підсилює антитоксичні функції гепатоцитів (поряд з глюкозою),норамалізірует белковообразованіе. Вітамін С необхідний для нормальногофункціонування клітин, які продукують колаген, активує і регулюєзрітропоез (сприяючи засвоєнню заліза), нормалізує порушенепротромбінообразованіе, нормалізує процеси згортання (Андрєєв; 1996).
Аскорбат відіграє позитивну роль у розвитку імунних реакцій організму,володіє деякими детоксикуючих властивістю, є істотнимфактором профілактики та лікування інфекційних захворювань.
Вітамін С позитивно впливає на вуглеводний обмін.
Волинський З. М. зі співробітниками показали, що підвищує синтез глікогену впечінки, і що наростання вмісту глікогену в печінці, як правило, прямопропорційно підвищенню в цьому органі вітаміну С. До такого висновкудозволяють прийти численні клінічні спостереження останнього часу,підтверджують цінна властивість АК володіти нормалізує дією нарівень цукру в крові. Подібний ефект пов'язаний з дією синергічнийаскорбату і гормонів - інсуліну та адреналіну. Вітамін С може посилюватидію інсуліну або діяти аналогічно йому, сприяючи освітаглікогену в печінці. Синергізм виникає непрямим шляхом через впливінсуліну і вітаміну С на общегормональний фон організму.
Таким чином, АК надає різнобічну вплив на процеси обмінуречовин у здорових людей, а при різних патологічних станахсприяє нормальному обміну речовин та функціонуваннярізних органів і систем організму (Бременер; 1997).
5 Цукровий діабет як одна з поширених патологічних процесів
Діабет цукровий (diabetes mellitus; цукрова хвороба, цукровемочеізнуреніе) - ендокринне захворювання, обумовлене дефіцитом гормонуінсуліну в організмі або його низьку біологічну активність;характеризується хронічним перебігом, порушенням усіх видів обміну речовин,ангіопатії.
Цукровий діабет є найпоширенішою ендокриннупатологію. У його розвитку істотну роль грають спадковасхильність і несприятливий вплив навколишнього середовища, проте,характер спадкової схильності і так званих факторів ризикурізні при різних типах цукрового діабету. Факторами ризику розвиткуцукрового діабету є поява антитіл до (-клітин острівцівпідшлункової залози, часті вірусні інфекції, гіподинамія, ожиріння,нераціональне або недостатнє харчування, стреси, генетично обтяженийпо цукровому діабету анамнез та інші.
Відповідно до класифікації ВООЗ, розрізняють два основних типи цукровогодіабету. Це інсулінзалежний (I тип) та інсуліннезалежний (II тип)цукровий діабет. Інсулінзалежний цукровий діабет, як правило, розвиваєтьсяв осіб молодого віку та дітей, що мають генетичну схильність доцукровому діабету саме даного типу. Інсуліннезалежний на цукровий діабетчастіше хворіють особи, старші 50 років (особливо жінки). Спадковасхильність відіграє більшу роль, ніж при цукровому діабеті I - типу.
Механізм розвитку цукрового діабету складний і багатогранний. Він залежитьяк від функції самої підшлункової залози, так і від внепанкреатіческіхфакторів. Перш за все, порушений обмін вуглеводів. Через нестачу інсулінуабо інших причин важко перехід глюкози в м'язову та жирову тканину,знижується синтез глікогену в печінці, посилюється утворення глюкози збілків і жирів (глюконеогенез). У розвитку цих процесів збільшуєтьсявміст глюкози в крові. Якщо в нормі воно досить стійко й натще уздорових людей коливається в межах 3,33 - 35,55 ммоль/л (70 - 100 мг%),то при цукровому діабеті в залежності від форми і тяжкості перебігу зазвичайперевищує 6,00 ммоль/л, досягаючи 20 -30 ммоль/л і більше.
Діабет у дітей та підлітків характеризується важким перебігом і, якправило, гострим початком захворювання. Від часу появи перших ознакзахворювання (спрага, схуднення, виділення великої кількості сечі, загальнаслабкість, сухість шкіри) до розвитку важкого стану і значнихпорушень обміну речовин, проходить звичайно 2 тижні. Діти, хворі на цукровийдіабет, вимагають обов'язкового лікування і постійного лікарського контролю.
Розділ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
Нами обстежено 41 дитина, яка страждає на інсулінозалежний цукровийдіабет, та 10 осіб контрольної групи. Об'єктом дослідження служилиеритроцити хворих і здорових дітей. Для отримання еритроцитів кров брализ ліктьової вени крапельним способом, як антикоагулянту використовувалигепарин.
Дослідження проводили в загальній масі еритроцитарної дітей, які страждаютьінсулінозалежний цукровий діабет, і дітей контрольної групи.
2.1. Підготовка еритроцитів
Свіжу гепаринизированную кров розливали в центріфужние пробірки по 5мл. Після п'ятнадцятихвилинної центрифугування при 3000 об/хв при 40 Свідбирали й відкидалися лейкоцитарний шар і плазма. Еритроцитисуспендованих у десятикратному обсязі 0.9% розчину NaCl іцентріфугіровалі протягом п'ятнадцяти хвилин при 3000 об/хв. Супернатантвідсмоктує, процедуру повторювали 3 рази. Це робилося для більш щільноїупаковки еритроцитів.
2.2. Метод роздільного визначення аскорбінової, дегідроаскорбінової і дікетогулоновой кислот в еритроцитах
Для кількісних визначень АК, ДАК і ДКГК використовували метод JH
Roe, C.A. Kuether (1943) в модифікації В.В. Соколовського, Л.В. Лебедєвої,
Т.Б. Ліелуп (1967). Метод заснований на взаємодії 2,4 --дінітрофенілгідразіна з ДАК з освітою в сірчаної кислотивідповідного озазона. ДАК і ДКГК дають червоне забарвлення, що використовуєтьсядля фотометричного визначення. Для обчислення суми всіх кислот їхокислюють 2,6 - діхлорфеноліндофенолятом натрію. Зміст АК визначають зарізниці. Для диференційованого визначення ДАК і ДКГК суміш піддаютьдії відновників, при цьому в АК відновлюється тільки ДАК. Уяк відновлювача використовували дімеркаптопропансульфонат натрію
(унітіол)
Реактиви:
1. 2.10 М унітіол (0.84 мл 5% розчину ампулірованного препарат в 100 мл
0.2 М фосфатного буфера рН 7.0. Зберігати не більше доби).
2. 5% трихлороцтової кислота (Тху). Зберігати в холодильнику не більше двох тижнів.
3. 85% розчин сірчаної кислоти (100 мл води + 900 мл концентрованої сірчаної кислоти).
4. 2% розчин 2,4-дінітрофенілгідразіна в 9Н сірчаної кислоти, яка містить
0.25% тіомочевіни (зберігати в холодильнику не більше 1 місяця).
5. 0.001 Н розчин 2,6 - діхлорфеноліндофенолята натрію (фарба
Тільманс). Зберігати в темряві не більше 1 тижня.
6. 0.9% розчин хлориду натрію (фізіологічний розчин).
Хід визначення.
У три пробірки поміщали по 0.5 мл упакованих та відмитих від плазмиеритроцитів з відомим гематокриту. У першу додавали 0.25 млфізіологічного розчину і 0.25 мл унітіолу. Після п'ятнадцятихвилинноїінкубації при періодичному помішуванні суспензії відбирали 0.5 млекстракту, до якого додавали 1.5 мл Тху.
У дві інші пробірки також додавали по 1.5 мл Тху.
У дві пробірки вносили по 0.75 мл супернатанта, отриманого прицентрифугування суміші упакованих еритроцитів з Тху. В одну з пробірокдодавали по краплях 0.001 Н розчин 2,6 - діхлорфеноліндофенолята натрію допояви слаборозового фарбування, стійкого протягом 30 секунд. Утретю пробірку поміщали 0.75 мл супернатанта, отриманого післяцентрифугирования суміші упакованих еритроцитів з фізіологічнимрозчином, унітіол і Тху. У всі пробірки додавали по 0.25 мл 2,4 --дінітрофенілгідразіна і доводили об'єм до 1.25 мл дистильованою водою,інкубувати при 100 0 С протягом 10 хвилин і охолоджували у крижаній лазні. Укожну пробірку додавали невеликими порціями 1.25 мл 85% розчину сірчаноїкислоти, охолоджуючи у крижаній лазні після кожної порції. Пофарбований розчинифотометріровалі за годину при довжині хвилі 540 нм.
Концентрацію кислот визначали за формулою:
С = (3 * А)/0.085; де
С - концентрація кислот, мг%
3 - концентрація стандартного розчину, мг%
А - оптична щільність проби
0.085 - оптична густина стандартного розчину
2.3. СТАТИСТИЧНА ОБРОБКА РЕЗУЛЬТАТІВ
Результати досліджень оброблялися статистично (Лакіна І.А., 1976).
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
Метою дослідження було визначення вмісту аскорбату і йогоокислених форм - ДАК і ДКГК в загальній масі еритроцитарної дорослих,страждають ІЗСД, зі стажем хвороби більше 10 років; порівняння та зіставленняотриманих результатів з даними, отриманими раніше, під час роботи зздоровими дітьми і страждають на ІЗСД. В експерименті брало участь 21 дорослийу віці від 25 до 40 років, 37 хворих дітей і група контролю, що включає
10 здорових дітей. Результати досліджень відображені на діаграмах.
Рис.1. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах здорових дітейі дітей, які страждають ІЗСД (мг%)
Рис. 2. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах дорослих,страждають ІЗСД (мг%)
Як випливає з отриманих результатів, в еритроцитах дітей і дорослих,страждають ІЗСД, спостерігається збільшення вмісту окисленої форма АК-ДАК,що може свідчити про порушення процесу відновлення АК у ДАК,більшому участю АК в метаболічних процесах, порушенні транспорту АК уклітці.
Процентний вміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК також демонструєпревалювання окислених форм АК над відновленої.
Рис. 3. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах здорових дітейі страждають ІЗСД (%).
Рис. 4. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах дорослих,страждають ІЗСД (%).
Всі отримані дані узгоджуються з даними літератури про змінузагальної кількості АК в організмі при патології (нормальний змістскладає 5 - 15 мг%) і співвідношення «окислена форма АК/відновленаформа АК »у бік збільшення перших.
ВИСНОВКИ
1. Зміст загальної АК в еритроцитах дітей і дорослих, які страждають ІЗСД, складає 19.52 мг% і 6,47 мг%, в еритроцитах здорових дітей -
12.48 мг%.
2. Зміст відновленої АК в еритроцитах хворих дітей і дорослих становить 4.1 і 2,01 мг% (20.5 і 31% від загальної АК), в еритроцитах здорових дітей - 4.28 мг% (33 %).
3. Зміст окислених форм АК - ДАК і ДКГК в еритроцитах хворих дітей і дорослих становить 15.5 і 4.46 мг% (79.5 і 69% від загальної
АК), в еритроцитах здорових дітей - 8.36 мг% (67%).
4. У загальній масі еритроцитарної хворих дітей співвідношення окислена форма АК/відновлена форма АК становить 4/1, що свідчить про превалювання окисленої форми АК над відновленої.
5. У загальній масі еритроцитарної здорових дітей це співвідношення рівне
2/1, тобто, в наявності тенденція до зростання вмісту відновленої АК.
Висновок
Вже давно довели той факт, що аскорбінова кислота єпостійною складовою частиною тканин і органів людини. Важливість виконуванихнею фізіологічних функцій не підлягає сумніву. Деякі з них давновідомі і добре вивчені. Наприклад, те, що вітамін С надаєсприятливий вплив на роботу імунної системи, нормалізуєеритропоез і продукцію колагену, є компонентом антиоксидантноїсистеми клітини. Однак численні дослідження недавнього часупоказали, що можливості цієї речовини набагато ширше, ніж уявлялосядо цих пір. Наприклад, було виявлено цінна властивість аскорбатунормалізувати рівень цукру в крові, роблячи позитивний вплив навуглеводний обмін. При виконанні цієї та інших біохімічних функційаскорбінова кислота оборотно окислюється в ДАК, при подальшому впливіокислювача необоротно переходить в ДКГК. За даними літератури, співвідношення
«Окислена форма АК/відновлена форма АК» може змінюватися прирізних патологіях, як і її загальний зміст в організмі. Однією зрозповсюджених патологій є інсулінзалежний цукровий діабет.
Оскільки ІЗСД є ендокринною патологією, що протікає з порушеннямвуглеводного обміну, у регуляції якого аскорбат грає важливу роль,було б логічно припустити, що його вміст в організмі хвороговиявиться іншим, ніж у здорової людини. Експериментальні даніпідтвердили це припущення. В організмі хворої дитини змістзагальної АК підвищено на 37% у порівнянні із загальною АК і становить 19,52 мг%,тоді як нормальним вважається наявність від 5 до 15 мг% аскорбату. Середнєзначення АК у здорової дитини - 12,48 мг%. У той час як зміст ДКГКв процентному співвідношенні практично не змінено і становить у хворих іздорових дітей 46 і 49,4% відповідно (6,16 мг% і 8,96 мг%),концентрація ДАК у хворих дітей підвищена проти здорових майже вдвічі іскладає 33,5% замість 17,6% (6,54 мг% і 2,2 мг%). Основні відмінностівиявляються в процентному вмісті відновленої форми АК. Її змісту здорових дітей становить 33% загальної АК (4,28 мг%), тоді як у хворихдітей воно нижче на 13% і становить 4,1 мг%. Таким чином, співвідношення
«Окислена форма АК/відновлена форма АК» у хворих дітей складає
4:1, на відміну від здорових дітей, у яких воно дорівнює 2:1.
На підставі цих даних можна припустити наступні причини подібнихзмін змісту загальної АК і її метаболічних форм в організмі хворих
ІЗСД дітей:
1) При ІЗСД порушені всі види обміну речовин в організмі - вуглеводний, білковий і жировий. В останньому випадку зростає кількість вільних радикалів, внаслідок чого АОС відчуває велике навантаження.
Зростає утримання одного з її компонентів - аскорбату, він більш активно включається в метаболічні процеси, можливо, тим самим в якійсь мірі компенсується зниження концентрації іншого її компонента - С-SH;
2) Майже двократне зростання рівня ДАК в організмі хворої дитини при практично незмінній кількості ДКГК може свідчити про порушення процесу відновлення ДАК в АК, можливо знижена активність ферменту ДАК - редуктази. При ІЗСД її активність знижена на 50%, що призводить до скорочення содержаніяС-SH, необ?? імого для процесу відновлення ДАК в АК. Одночасно знижується активність
ГБФДГ, в реакції якої утворюється необхідний для роботи З-R NADPH;
3) Порушення транспорту АК у клітці.
Дещо інша картина спостерігається щодо дорослих, які страждають
ІЗСД. Тут загальний зміст АК знаходиться близько до нижньої межі норми іскладає 6,47 мг%. Зміст ДКГК становить 11,4% (0,73 мг%), ДАК -
57,6% (3,73 мг%), АК - 31% (2,01 мг%). Порівнюючи ці показники зтакими у дітей, можна зробити висновок, що активну участь АК у роботі АОСвирішено не кількісним, а якісним шляхом. Так, частка неактивній ДКГКстановить 11%, тоді як на частку метаболічно активних АК і ДАКприпадає 89% від загальної кількості АК. Таке превалювання активних форм
АК особливо в поєднанні з підвищеним вмістом АК може вказувати насвоєрідну «адаптацію» ферменту ДАК-редуктази в ході багаторічного лікуванняхвороби (понад 10 років). Для підтвердження даних припущень і з'ясуваннямеханізму пристосованість (якщо така є) необхідні подальшідослідження.
В даний час можна з певністю сказати наступне: що страждають ІЗСД,особливо діти, в процесі лікування потребують проведення антиоксидантноїтерапії.
література
1. Абрамова Ж.І., Оксенгендлер Г.І. Людина і протівоокіслітельние речовини.-230 С.
2. Авраамового Т.В., Титова Н.М. Керівництво за великим біохімческому практикуму. -Красноярск: Изд-во КГУ, 1978, ч.1. -С.80-82.
3. Асатіані В.С. Ферментні методи аналізу. -М.: Наука, 1969. -С.26-40.
4. Ахромеева Г.І. Визначення дегідроаскорбінової кислоти в харчових продуктах// Про харчування. -1988. - № 3. -С.66-88.
5. Ашкіназі І.Я. Руйнування еритроцитів// Фізіологія системи крові.
Фізіологія еритропоезу. -Л.: Наука, 1979. -С.274-334.
6. Березовський В.М. Хімія вітамінів. -М.: Харчова промисловість, 1973.
-С.230-300.
7. Борець В.М. Вітаміни. -М.: Наука, 1980. -29 С.
8. Бохінскі Р. Сучасні погляди в біохімії. -М.: Світ, 1987. -С.120-
154.
9. Браунштейн А.Є. Процеси і ферменти клітинного метаболізму.
-М.: Наука, 1987. -44с.
10. Бременер С.М. Вітаміни. -М.: Медицина, 1974. -194с.
11. Бреслер В.М., Никифоров А.А. Транспорт органічних кислот через плазматичні мембрани диференційованих епітеліальних шарів у хребетних. -Л.: Наука, 1981. -С.52-111.
12.Біохімія вітамінів. -М.: Наука, 1982. -С.17-19.
13. Владимиров Г.Е. Про енергетичну функції АТФ у клітині. -Л.: Наука,
1980. -44с.
14. Гаврилов О.К., Козинець Т.І., Черняк Н.В. Клітини кісткового мозку і периферичної крові. -М.: Медицина, 1985. -288с.
15. Галактіон С.Г. Біологічно активні. -М.: Молода гвардія, 1988.
-С.4-84.
16. Григорьев Г.П. Цитохром Р-450 і вітамін С// Про харчування. -1983.
- № 4. -С.5-10.
17. Деглі С., Нікольсон Д. Метаболічні шляхи. -М.: Світ, 1973. -С.189-
196.
18. Домбровська Ю.В. Вітамінна недостатність у дітей. -М.: Медицина,
1983. -63С.
19. Єфімов А.С., Бездробна Ю.В. Структура та функції інсулінових рецепторів. -Київ.: Наукова думка, 1987. -С.4-104.
20. Канунго М. Біохімія старіння. -М.: Медицина, 1982. -194с.
21. Ківер
