Біотехнологія у відтворенні і селекції великої рогатої худоби

Введення.

Біотехнологія у відтворенні і селекції великої рогатої худоби має особливе значення. Велика рогата худоба належить до одноплідних видів ссавців. Тому від однієї корови можна отримати в кращому випадку одне теля на рік, у той час, як в її яєчнику містяться сотні тисяч незрілих статевих клітин (ооцитів), що представляють величезний генетичний резерв. Кардинальне вирішення проблеми прискореного відтворення худоби полягає в тому, щоб перейти до нетрадиційних способів збільшення плодючості. Для цього застосовується цілий ряд біотехнічних методів, розроблених на основі поглиблених досліджень репродуктивної функції, її регуляції, а також на вдосконалення прийомів маніпуляції з ембріонами, статевими і соматичними клітинами. У перспективі розглядається біотехнологія як основа прискореного відтворення високопродуктивних тварин і цілих популяцій.

Останнім часом набула практичне значення трансплантація ембріонів, яка розглядається як ефективний метод біотехнології прискореного розмноження високоцінних племінних тварин. Деякі питання трансплантації ембріонів великої рогатої худоби розглянуті в даній курсовій роботі.

Відбір донорів.

У більшості випадків в якості корів-донорів відбирають матерів потенційних племінних биків. Завдяки цьому забезпечується високий селекційний диференціал. Оцінка та відбір корів-донорів, виділених у групу матерів биків, проводять у два етапи. На першому етапі племінна цінність донора оцінюється за головними ознаками молочної худоби - за рівнем молочної продукції та жірномолочності. На другому етапі, коли відібрані донори з високою племінною цінністю за головними ознаками, число ознак залежно від мети селекції розширюється. До них відносять форму вимені і сосків, властивості молоковіддачі, резистентність, фортеця кістяка і копит, тип і відтворювальні якості.

Потрібно мати на увазі, що оцінка корови-донора по родоводом і власної продуктивності є не остаточною, оскільки в цьому випадку не враховується ефект розщеплення і рекомбінації генів. Тому остаточно оцінювати корову-донора можна тільки при одержанні та оцінки її потомства.

Високі витрати на отримання телят шляхом трансплантації ембріонів обумовлюють необхідність відбирати таких донорів, від яких регулярно можна отримувати велику кількість ембріонів. Перевага слід віддавати коровам, яка зберегла протягом трьох отелень стабільну відтворної здатності. Дослідженнями встановлено, що потенційні корови-донори з хорошими і стійкими відтворної здатності відрізняються схильністю до відтворення ембріонів, які можна регулярно одержувати через кожні два місяці.

Межотельний період є інтегральним показником відтворної здатності корів. Його складові частини: сервіс-період і період стельності.

Сервіс-період більш точно і набагато раніше, ніж інтервал між готелями, виявляє потенційні можливості репродуктивної функції у корів. Він тісно пов'язаний з межотельним періодом (коефіцієнт кореляції складає 0.9). Оптимальний сервіс-період не повинен перевищувати 80 днів. Однак аналіз сервіс-періоду, проведений у провідних племінних стадах чорно-рябої породи, показав, що даний показник відтворної функції корів має високий коефіцієнт мінливості, який склав 61%.

Сервіс-період в основному залежить від інтервалу між готелем і першим заплідненням, та інтервалу між першим і останнім, тобто ефективним заплідненням. Високопродуктивних корів слід осіменяти на другий місяці після нормального отелення. Це обумовлено тим, що перший статевий цикл проявляється слабо, статева охота клінічно погано визначається або зовсім не виявляється.

Перше осіменіння корів на другому місяці після готель не подовжує сервіс-і межотельний період. При оптимальному сервіс-періоді до 80 днів після першого і другого осіменіння середня запліднюваність корів складає 95-98%, а тривалість межотельного періоду не перевищує одного року.

Для оцінки відтворювальних здібностей корів, відібраних у якості потенційних донорів, необхідно аналізувати такі параметри як запліднюваність від першого осіменіння та індекс осіменіння. При правильній техніці осіменіння та своєчасному визначенні статевої полювання запліднюваність корів від першого осіменіння повинна становити в середньому 60%.

Важливим показником відтворної здатності корів є індекс осіменіння, тобто кількість осіменіння на одне запліднення. Індекс осіменіння характеризується високим ступенем мінливості - Коефіцієнт варіабельності може досягати 70%. Істотний вплив на мінливість індексу осіменіння мають такі фактори, як тривалість періоду від отелення до першого осіменіння, своєчасне виявлення корів в статевий полюванні, запліднювати здатність сперми бика і ін Індекс осіменіння корів, виділених до групи потенційних донорів, не повинен перевищувати 1.5. В ідеальному випадку потенційна корова-донор повинна мати індекс осіменіння рівний 1. У корів-донорів при всіх готелях мають бути відсутні ускладнення (мертвонароджуваність, затримання посліду, післяпологові захворювання статевих органів).

Через 15-20 діб після отелення ветеринарний спеціаліст методом ректальної пальпації контролює у потенційної корови-донора стан статевих органів, щоб виключити такі порушення репродуктивної функції як кіста яєчника, гіпофункція, запалення яїчникової зв'язки, ендометрити.

суперовуляції.

Важливою ланкою в сучасній біотехнології трансплантації ембріонів великої рогатої худоби є гормональноевизиваніе суперовуляції у корів-донорів. До групи донорів переводять тільки тих корів, які позитивно реагують на введення гормонів. Для стимуляції множинної овуляції використовують гонадотропін СЖК в поєднанні з простагландинами та іншими біологічно активними речовинами [3]. Цей спосіб, як показує практика, дозволяє викликати суперовуляції приблизно у 70% корів.

Одним із суттєвих недоліків цього способу суперовуляції є вкрай високий ступінь варіабельності числа овуляцій, навіть при використанні однієї і тієї ж концентрації гонадотропіну СЖК. Вона становить від 0 до 50 овуляцій на одну корову-донора. Оптимальним результатом суперовуляції є вихід з яєчника в воронку яйцепроводів 10-20 яйцеклітин.

Shelton, J.N. [7], підсумовуючи результати досліджень, прийшов до висновку, що на ін'єкції гонадотропінів 25-35% корів-донорів не реагують, а у позитивно реагуючих корів (3 і більше овуляцій) варіабельність реакції яєчника настільки велика, що стає неможливим надійне планування програми пересадки ембріонів. Kenneth, L.W. [4] вважає, що з урахуванням наявної мінливості лише половина корів, що реагують на введення гонадотропінів, може дати 4-5 ембріонів, придатних для трансплантації. Отже, в основному ембріони можна отримати менш ніж від половини спочатку ретельно відібраних потенційних корів-донорів.

За сучасному поданням реакція корів на суперовуляції значною мірою визначається кількістю і якістю фолікулів яєчників під час їх стимуляції гонадотропінами. Експериментально було доведено, що під час суперовуляції для отримання хорошої реакції необхідно наявність певної кількості малих антральних фолікулів, чутливих до гонадотропної стимуляції. Недолік таких фолікулів, або навпаки, наявність великих за розміром фолікулів знижують рівень реакцій або вона взагалі відсутня. Це може свідчити про інтраоваріальном регулювання процесу суперовуляції. Оскільки фолікули ростуть асинхронно, то в кожен період ін'єкція гонадотропінів буде оптимальною лише для обмеженого числа фолікулів.

Крім розміру фолікула, на реакцію введення гонадотропінів істотний вплив має інтенсивність мітотичного індексу, яка у нормальної фолікула підвищується при формуванні порожнини. Встановлено що високий мітотичний індекс неатретіческіх фолікулів позитивно корелює з інтенсивністю суперовуляції.

Є дані, що свідчать про те, що на реакцію гонадотропінів відповідають тільки ті малі антральний фолікули, розміри яких не перевищують 2 мм. Встановлено що такі фолікули гормонально активні і швидко овуліруют.

Атретіческіе фолікули з високим мітотичним індексом, навпаки, не овуліруют, а після проходження фази лютеїнізації піддаються її впливу і імітують наявність жовтого тіла.

Отже, для ефективної суперовуляції вирішальним є фізіологічний стан фолікулів в лютеіальной фазі яєчника.

Аналіз роботи станцій з пересадки ембріонів показав, що хорошими донорами можна вважати корів, які після багаторазових суперовуляції мають хорошу реакцію яєчника і виробляють велику кількість придатних для пересадки ембріонів за одне вимивання. Проте лише невелика частина донорів виявляє повторну реакцію яєчників після викликання суперовуляції. У основному ж корови-донори нерегулярно відповідають на повторну гормональну обробку, тому кількість овуляцій і вихід ембріонів не є стабільними.

Для оцінки схильності, або потенційною мінливості корів на придатність в якості донорів, були розраховані варіанси ознак, на основі яких був визначений коефіцієнт повторюваності. Розраховані коефіцієнти повторюваності ознак схильності корів як донорів коливалися в межах 17.3-23.3%. Це свідчить про те, що за підсумками оцінки за перший вимивання ембріонів надійність повторного результату складе лише 20%. Отже, за оцінкою ознаки придатності за перший вимивання ембріона неможливо достовірно судити про придатність корови як донора.

Мінливість придатності корів як донорів включає спадкові і Неспадкові фактори. Причому внесок Неспадкові чинників значно вище внеску генетичних факторів.

Відзначено, що припинення годування донора після обробки гонадотропінами достовірно зменшує реакцію яєчників на введення гормонів. Для суперовуляції та отримання біологічно повноцінних ембріонів необхідно забезпечити повноцінне годування донора, збалансоване не тільки за основними поживними речовинами, але особливо з амінокислот і мікроелементів. Годування донорів має бути таким, щоб вони знаходилися в хорошому фізіологічному стані.

Для отримання суперовуляції найбільш широке поширення в багатьох країнах світу отримав ГСЖК з простагландинами.

Хороших результатів суперовуляції можна очікувати, коли до моменту ін'екчіі гонадотропіну в яєчниках корови функціонує жовте тіло діаметорм 1.5 см. За наявності в одному з яєчників розвиненого фолікула діаметром 10 мм поліовуляція знижується. Інтенсивність множинної овуляції також знижується коли окрім добре розвиненого жовтого тіла в яєчнику знаходиться розвинений фолікул, фолікулярна або лютеїнова кіста. Отже, ефективність суперовуляції великою мірою визначається фізіологічним станом яєчників.

На число овуляцій істотний вплив робить інтервал між часом введення ГСЖК і початком статевого полювання. Визначено оптимальний інтервал, під час якого можна отримати найбільшу кількість овуляцій, він складає 4-7 діб. При зменшенні цього терміну до 1-3 діб число овуляцій істотно знижується, а при збільшенні понад 7 діб, хоча число овуляцій зростає, але формуються біологічно неповноцінні яйцеклітини.

Найвищий ефект досягається при суперовуляції введення ГСЖК між 10-12 добу естрального циклу (середина лютеальной фази) та через 48 годин простагландину F2a (або його аналогу), що викликає регресію жовтого тіла, статеву охоту та овуляцію. Протягом 48 годин після ін'єкції простагландину у 95% корів-донорів відбувається поліовуляція з усіма ознаками Еструс. При цьому донори можуть бути цвів тільки в стислі терміни. Встановлено, що після такої технології гормональної обробки корів відбувається в середньому 10 овуляцій, а запліднюваність яйцеклітин досягає 80%.

Іншим гормональним препаратом з суперовуляціонним дією є фоллікулостімулірующий гормон ФСГ. Суперовуляції можна викликати введенням очищеного ФСГ або його комбінації з лютеїнізуючим гормоном ЛГ в співвідношенні 5:1. На відміну від гонадотропіну СЖК ФСГ вводять не одноразово, а багато разів.

Узагальнення численних робіт з використання гонадотропіну СЖК і ФСГ показало, що спостерігається або однакова реакція яєчників корів на обидва гонадотропіну, або відзначається найкраща реакція при введенні гонадотропіну ФСГ.

Як зазначалося, слід мати на увазі, що багаторазова суперовуляція схильна до більшої варіабельності. Тому не всі корови-донори мають однакову схильність до багаторазового суперовуляції. Для ефективної багаторазової суперовуляції необхідний ретельний відбір донорів по ряду показників цієї ознаки.

На закінчення слід відзначити, що гормональна стимуляція яєчників корів, що викликає поліовуляцію, пов'язана з активізацією метаболічних процесів у донорів. Тому для протікання нормальних процесів оогенезу, запліднення і біологічно повноцінного формування і розвитку зиготи корів-донорів необхідно забезпечити біологічно активними речовинами (вітаміни, незамінні амінокислоти). Крім того, для цієї мети використовують препарат селевих.

запліднення корів-донорів.

Результати суперовуляції визначаються ефективним заплідненням корів-донорів. Проблема запліднення яйцеклітин і отримання біологічно повноцінних ембріонів все ще залишається відкритою. Як показують результати досліджень, лише 60-65% ембріонів придатні для трансплантації, інші яйцеклітини, що утворилися в результаті гормональної обробки гонадотропінами, виявляються або незапліднених, або після запліднення відстають у розвитку або дегенерують. Причина цих порушень залишається невідомою.

Для штучного осіменіння корів-донорів необхідно використовувати сперму тільки видатних биків-виробників, вірогідно оцінених за якістю потомства. Як зазначалося, надійним критерієм спадкових якостей бика служить коефіцієнт повторюваності, тобто коефіцієнт регресії майбутніх дочок бика на число фактично наявних дочок. Якщо генетичне перевагу дочок бика, виражена величиною відхилення від одноліток, помножити на коефіцієнт повторюваності, то отримана величина буде характеризувати генетичне перевагу майбутніх дочок бика, або передбачених різниця. Передбачений різниця є одним з найбільш об'єктивних якостей бика, розроблених у сучасній селекції молочної худоби.

Для штучного осіменіння корів-донорів слід використовувати, як правило, сперму виробників 1-й племінний категорії, тобто таких, племінна цінність яких перевищує середню популяційної величину на два стандартних відхилення. У цьому випадку істотно підвищуються темпи селекції і поліпшується племінна цінність нової генерації.

Племінний підбір биків-виробників і корів-донорів здійснюється по замовленому або цільовим спарювання батьків. У його основі повинен лежати принцип індивідуального підбору відповідно до селекційної програмою вдосконалення існуючих та створення нових порід, типів і ліній.

Вимоги до оцінки запліднюючої здібності сперми биків, призначеної для осіменіння корів-донорів, повинна бути значно вище, ніж при заплідненні інших корів. Для підвищення запліднюваність донорів і виходу ембріонів, поряд з використанням високоякісної сперми, необхідно визначити терміни статевої охоти для своєчасного проведення штучного осіменіння. Як правило, корів із гормонально викликаної статевої полюванням запліднюють двічі: перший раз при початку появи статевої полювання і друга - Через 12-24 години.

У нашій країні корів-донорів штучно запліднюють двічі на день з інтервалом 10-12 годин кожного разу двома-трема дозами замороженої сперми. Так як при суперовуляції підвищується число овуліровавшіх яйцеклітин, у кожній дозі сперми повинно бути не менше 50 млн рухомих сперміїв.

День, в який проводиться штучне запліднення корови-донора, вважається датою запліднення. З цього дня починається відлік розвитку ембріонів in vivo до їх вилучення.

Витяг і оцінка ембріонів.

Ефективність методу трансплантації багато в чому визначається способом вилучення ембріонів. Запліднені яйцеклітини від суперовулірованних корів-донорів можуть бути вилучені трьома способами: після забою корови-донора; хірургічним; нехірургічним.

Витяг ембріона після забою корови-донора. Найбільш простим і надійним способом вилучення ембріонів є забій корови-донора. Цей спосіб практикувався тільки на перших етапах освоєння методу трансплантації. В даний час через втрату генетично цінного корови-донора він не використовується.

Витяг ембріона хірургічним способом. Важливим моментом, що забезпечує ефективність вилучення ембріонів, є визначення стадії їх розвитку та місця знаходження у поових шляхах корови-донора. Для трансплантації рекомендується використовувати бластоцисти, тому ембріони витягують між 7-8-ми кілька діб після першого штучного осіменіння (до). Є декілька способів хірургічного вилучення ембріонів: розріз верхнього склепіння піхви, лапаротомія по білій лінії живота і лапаротомія в області голодної ямки.

Хірургічний спосіб отримання ембріонів є трудомістким, дорогим і, що особливо важливо, їм не можна користуватися багато разів. В даний час хірургічний спосіб вилучення застосовується в рідкісних випадках, головним чином у наукових цілях.

Витяг ембріонів нехірургічним способом. Основна перевага нехірургічного спосіб завантаження ембріонів полягає в простоті маніпуляцій. Для цього не потрібно спеціального операційного приміщення. Ембріони можна отримувати безпосередньо у виробничих умовах. З селекційної точки зору, при правильному застосуванні нехірургічного способу відтворна здатність донорів не порушується, що дозволяє багаторазово використовувати генетично цінних корів-донорів для отримання від них великого числа нащадків.

У загальному вигляді вилучення ембріонів нехірургічним методом відбувається за наступною схемою. Корів-донорів обстежують на наявність жовтих тіл, чистять і миють, обмежують раціон і кратність годування, а за добу припиняють годування та напування. Перед самим витягом ембріонів дезінфікують зовнішні статеві органи корів-донорів. Витягують ембріони під місцевою анестезією. У ріг матки вводять продезінфікований двоканальний гумовий або пластмасовий катетер з надувним балончиком, в який нагнітають 10-155 куб см повітря. Вихід з рогу матки закривають, надуваючи повітрям тонкостінний гумовий балончик. Потім в ріг вводять промивну рідину і обережно масажують, щоб відокремити ембріони від стінок матки. Як промивної середовища застосовують PBS до 500 мл. Цей склад використовується і для короткочасного культивування ембріонів.

Вимивання повторюють 5-8 разів. Основну частину ембріонів отримують в перших трьох-чотирьох змивах. Промивання в обох рогах матки, включаючи введення катетерів, триває 20-50 хвилин. За цей час можна отримати більше 50% ембріонів, що перебувають на стадії морули або бластоцисти.

Після вимивання ембріонів в матку вводять розчин антибіотика з метою антисептики.

У багатьох країнах розроблені різні пристрої для нехірургічного вилучення ембріонів. У нашій країні в ряді інститутів ВАСГНІЛ успішно освоєні нехірургічні методи добування, що дозволяють отримувати 60% від числа овуліровавшіх яйцеклітин. Треба мати на увазі, що в середньому з вимитих яйцеклітин до 25% виявляються незапліднених або дезінтегрірованнимі. Причини виходу біологічно неповноцінних зигот досі остаточно не з'ясовані.

Короткочасне культивування та зберігання ембріонів. Маніпуляції з ранніми ембріонами, що знаходяться на предімплантаціонних стадіях розвитку, тобто від моменту їх отримання до введення в роги матки реципієнта, займають від 1 до 5 годин. У цей період потрібно створити оптимальні умови, що забезпечують збереження їх біологічних якостей. Короткочасне зберігання ембріонів дає також можливість транспортувати їх у інші господарства.

Ембріони великої рогатої худоби можна зберегти шляхом пересадки їх в яйцепроводів самок інших видів ссавців. Найкраще забезпечується нормальне предімплантаціонное розвиток ембріонів корів у яйцепроводів кролиць. Встановлено, що ембріони корови в яйцепроводів кролиці можуть успішно розвиватися до стадій, придатних для трансплантації реципієнтам, тобто до морули і бластоцисти. Недоліком цього методу є його трудомісткість і можливі втрати зигот при їх перенесення. В даний час широке поширення набув метод короткострокового зберігання ембріонів in vitro.

Після вилучення та оцінки на життєздатність ембріони переносять на поживні середовища з температурою 37 градусів. Більшість середовищ, в яких культивують і зберігають ембріони, включають розчини солей, амінокислоти з двокарбонатний іоном як буферним агентом, що забезпечує pH в межах 7.2-7.6. Проведені дослідження показали, що тривалість культивування без втрати біологічних якостей ембріонів можлива до 95 годин.

В останні роки проводяться дослідження з короткострокового зберігання ембріонів in vitro при їх охолодженні нижче 37 градусів. Розробка цього методу має велике практичне значення, тому що дозволяє істотно спростити маніпуляції з ембріонами і надійніше забезпечує їх транспортування.

Оцінка ембріонів. Оцінка ембріонів великої рогатої худоби проводиться кількома методами. Найбільше поширення отримав морфологічний метод. Встановлено, що результати імплантації ембріонів залежать від того, наскільки повно оцінена здатність запліднених яйцеклітин до розвитку.

За морфологічними ознаками і ембріональної стадії розвитку, ембріони можна класифікувати на придатні та непридатні до трансплантації. При морфологічної оцінки ембріонів основну увагу звертають на фрмулу зиготи, стан її зони пеллюціда, число бластомерів, рівномірність дроблення, вираженість ембріобласта і трофобласта.

Крім морфологічної, дається оцінка ембріонів за адсорбційні властивості оболонок і цитоплазми бластомерів до різних барвників. Для поліпшення морфологічної оцінки використовують флюоресцентна забарвлення, що дозволяє відрізнити живі ембріони від загиблих. Зокрема, цей метод найбільш придатний для оцінки життєздатності ембріонів великої рогатої худоби після їх культивування та заморожування. За допомогою флюоресцентних барвників FDA і DAP1 через 3-10-хвилинний період можливе швидке та достатньо надійне визначення здатності ембріонів до розвитку в ранніх стадіях. Живі ембріони і навіть живі бластомери яскраво флюоресцирующим після інкубації в FDA, але не флюоресцирующим після інкубації в DAP1. У загиблих ембріонів або бластомерів реакції зворотні. Ці методи дозволяють більш точно визначати життєздатність ембріонів під мікроскопом.

Ряд авторів пропонує використовувати синьку Еванса. У живих ембріонів при температурі 37 градусів нею забарвлюється тільки зона пеллюціда, яку потім знебарвлюють в розчині Рінгера. У мертвих же ембріонах фарба міцно фіксується на бластомери.

Як вважає М. І. Прокоф 'єв [2], можуть бути гістохімічні методи оцінки життєздатності ембріонів, засновані на специфічних реакціях структурних елементів і речовин клітин до вітальним і флюоресцентний барвників. Такі реакції протікають дуже інтенсивно і швидко, що дозволяє прискорити процес оцінки ембріонів.

Однак слід враховувати, що флюоресцентна забарвлення лише доповнює і покращує основний метод оцінки ембріонів -- морфологічний. Найбільш важливими морфологічними ознаками при оцінці життєздатності ембріонів служать обсяг, фарбування, розташування клітин, величина перівіталлінового простору і вид непошкодженою зони пеллюціда. Ідеальний ембріон повинен бути компактним, сферичної форми, з однорідною забарвленням, з клітинами однакової величини, з гладкою, плоскою і рівномірно сформованої зоною пеллюціда, без включень у перівітелліновом просторі.

Найважливішим критерієм для оцінки якості ембріонів є інтенсивність розвитку стадій. Ембріони з уповільненим розвитком НЕ використовуються для пересадки, заморожування та інших маніпуляцій.

При оцінці якості ембріона в нашій країні прийнята 5-бальна шкала з урахуванням наступних показників: відповідності стадії розвитку ембріона її віку; правильності форми прозорої оболонки та її цілісності; рівномірності дроблення бластомерів, стану цитоплазми; прозорості перівітеллінового простору.

Найбільш придатними для трансплантації є ембріони, витягнуті з матки корови-донора на 7-8 добу після першого осіменіння. Як показують результати досліджень і практика, в цей час нормально розвинені ембріони, придатні для трансплантації реципієнтам, перебувають у стадії пізньої морули або бластоцисти. Ці ембріони використовують для пересадки гормонально підготовленим коровам-реципієнтів.

вибракування підлягають дегенерував незапліднених яйцеклітини (ооцити), які можна виявити при витягу ембріонів. Морфологічно неінтактние, непридатні для трансплантації ембріони мають дефектну морула, або бластоцисти, ознаками яких є дефекти прозорої оболонки, розпад бластомерів, різна величина бластомерів, порушення міжклітинної зв'язку.

У стадії пізньої бластоцисти непридатні для трансплантації ембріони характеризуються деформацією і ослабленням бластомерів, розривом міжклітинних зв'язків та цілісності зони пеллюціда.

Пересадка ембріонів реципієнтів.

Як реципієнта відбирають гінекологічно здорових корів після двох-трьох нормальних статевих циклів. Для відбору реципієнтів основним показником є відсутність гінекологічних відхилень, а продуктивні, племінні і породні якості великої ролі не грають. Разом з тим, у реципієнтів з поганою вгодованістю, низькою запліднюваність після першого осіменіння, можуть погано приживатися ембріони. У середньому на кожного донора відбирають 5-6 реципієнтів. Більшість фахівців вважає, що в якості реципієнтів найбільш придатні полновозрастние телиці з хорошими племінними кондиціями.

Основною умовою гарного приживлення ембріонів служить синхронність прояви статевої полювання у донорів і реципієнтів. Різниця в часі у прояві статевої полювання не повинна перевищувати 24 год, оптимальні ж результати виходять при різниці не більше 12 годин.

При сучасному рівні техніки трансплантації рекомендується пересаджувати ембріони відразу після їх вилучення з рогів матки донора та оцінки.

В даний час пересадка ембріонів реципієнтів проводиться хірургічним і нехірургічним способами. При пересадці потрібно точно знати, де перебуває ембріона в статевих шляхах корови. Це пов'язано з переходом предімплантаціонного періоду, в якому знаходиться ембріон до пересадки, в новий період ембріонального розвитку - імплантаційний. При природному протягом ембріонального періоду зародився на стадії морули або бластоцисти знаходиться у верхньому відділі роги матки, тому й найбільш сприятливим місцем для його аплікації є верхня частина роги матки реципієнта. Встановлено, що пересадка ембріонів глибоко в ріг матки реципієнта найкраще забезпечується хірургічним способом. При нехірургічне ж пересадки, яка відбувається в період діеструса місце аплікації ембріона в розі матки контролюється менш точно.

Ефективність хірургічного способу пересадки ембріона становить 60-70%, а число телят - 3-4 на донора. Хірургічний спосіб використовували в основному до середина 70-х років. Однак він вимагає великих витрат коштів. Крім того, широке застосування хірургічного методу стримується складністю проведення операцій у виробничих умовах, отриманням травм внаслідок резекції м'язів, і неможливістю багаторазового використання реципієнта. Тому останні 10-15 років пересадку ембріонів в основному здійснюють нехірургічним способом.

При нехірургічне пересадки основним гідністю, крім простоти та економічності, є можливість багаторазового використання реципієнта. Розроблено кілька способів нехірургічне пересадки ембріонів. Проте всі вони засновані на одному принципі - Введення ембріона в ріг матки через шийку, внаслідок чого цей спосіб названий також цервікальним.

Після пересадки ембріонів проводять ретельний контроль за реципієнтами, звертаючи особливу увагу на можливе прояв у них повторної статевої полювання.

Для встановлення стельності у корів-реципієнтів використовують кілька методів: візуальний; за рівнем прогестерону в крові або молоці; клінічний, головним чином шляхом ректальної пальпації.

Важливою ланкою селекційно-племінної роботи є вірогідність встановлення справжнього походження телят, отриманих при трансплантації ембріонів від генетично цінних батьків. Істинне походження можна встановити за групою крові і типами білків крові. Пробу крові беруть у теляти у віці від 4 тижнів до 4 місяців.

Суттєвою причиною, що знижує ефективність нехірургічне пересадки ембріонів, є можливе пошкодження ендометрію при введенні катетера. У той же час узагальнення результатів досліджень з нехірургічне пересадки ембріонів показує, що ефективність пересадки в значною мірою залежить не від того, як глибоко буде введено катетер в ріг матки, а від того, наскільки правильно виконано введення.

Однак з цього приводу є й інша точка зору [7]: що конструкція приладів істотно не впливає на результати вилучення та пересадки ембріонів. Ці результати більш пов'язані з типом гонадотропіну, кваліфікацією оператора, якістю і стадією розвитку ембріонів.

В цілому ж слід зазначити, що нехірургіческіх метод пересадки ембріонів забезпечує аплікацію зародків в середньому 50-60%, а застосування маткових релаксантів перед пересадкою - до 75%. Це істотно вище, ніж при хірургічному методі. Технологія нехірургічного методу трансплантації подібна з штучним заплідненням корів і триває 3-5 хвилин, або 15-20 пересадок на годину.

На особливу увагу заслуговує на прийом,