Санітарно-мікробіологічні дослідження та контроль у лікувально-профілактичних закладі за внутрішньолікарняними інфекціями

Медицина, здоров'я

Іркутський Державний Медичний Університет

Кафедра Мікробіології

РЕФЕРАТ

Санітарно-мікробіологічні дослідження та контроль у лікувально-профілактичних закладі за внутрішньолікарняними інфекціями < p> Перевірив: Зав. Кафедрою проф. Кіборт Р.

В.

Виконав:

Іркутськ, 2002
ПЛАН:

Введення ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 3

1. Загальні поняття ... .... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .4

1.1 Етіологія ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .5

2. Збудники госпітальних інфекцій ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 6

2.1Формірованіе госпітальних штамів ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .6

3. Об'єкти, матеріали і методи дослідження ... ... ... ... ... ... ... ... ... 9

3.1 Дослідження мікробної обсіменіння повітряного середовища .. 10

3.2 Дослідження мікробної обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 12

3.3 Орієнтовний перелік об'єктів, що підлягають бактеріологічному контролю ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 13

3.4 Контроль на стерильність хірургічного інструменту ... ... ... 15

4. Правила забору матеріалу на дослідження ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 17

5. Поживні середовища використовуються в мікробіологічних дослідженнях ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 18

6. Список літератури ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 23

ВСТУП

внутрішньолікарняні інфекції (синонім нозокоміальних інфекції) --інфекційні хвороби, пов'язані з перебуванням, лікуванням, обстеженням ізверненням за медичною допомогою в лікувально-профілактичний заклад.
Приєднуючись до основного захворювання, В. і. погіршує перебіг і прогнозхвороби.

Проблеми В. і. набули більшої актуальності у зв'язку з появою такзваних госпітальних (як правило, полірезистентних до антибіотиків іхіміопрепаратів) штамів стафілококів, сальмонел, синьогнійної палички таінших збудників. Вони легко поширюються серед дітей і ослаблених,особливо літніх, хворих зі зниженою імунологічної реактивністю,які являють собою так звану групу ризику.

внутрішньолікарняні, або госпітальні, інфекції слід розглядатибудь-які клінічні розпізнавані інфекційні захворювання, що виникає ухворих після госпіталізації або відвідування лікувального закладу з метоюлікування, а також у медичного персоналу в силу здійснюваної нимдіяльності, не залежно від того, виявляються або не виявляються симптомицього захворювання під час перебування цих осіб у медичному установа.
Захворювання, пов'язані з наданням медичної допомоги, також позначаютьтермінами ятрогенія або нозокомінальние інфекції.

1. Загальні поняття

Госпітальні інфекції оцінюються як одна з основних причин смерті.
Летальність при різних нозологічних формах коливається від 3.5-60%, апри геніралізованних формах досягає такого ж рівня, як удоантібітіческую еру.

В даний час в усьому світі розгорнулася наукова дискусія провиникнення внутрішньолікарняних інфекцій в лікувально-профілактичнихустановах. За даними офіційної реєстрації внутрішньолікарняні інфекції в
Російської Федерації розвиваються у 0.15% госпіталізованих хворих.
Однак вибіркові дослідження показали, що госпітальні інфекціївиникають у 6.3% хворих з коливаннями від 2.8-7.9%. У період з 1997-1999року в Росії зареєстровано 50-60 тис. випадків внутрішньолікарнянихінфекцій, а за розрахунковими даними Сьоміна Н.А. кількість повинна наближатися до 2.5млн. Велику небезпеку для пацієнтів та медичного персоналу представляютьтакож спалаху гепатитів В і С, що реєструється в різних типахстаціонарів Росії.

Для успішної боротьби з внутрішньолікарняними інфекціями, то думку Н.А.
Сьомін та ін, необхідно оптимізувати епідеміологічний нагляд і на йогооснові проводити профілактичні та протиепідемічні заходи,сприяють управління епідемічним процесом при цих інфекціях.

Таким чином, актуальність проблеми госпітальних інфекцій длятеоретичної медицини і практичної охорони здоров'я не викликаєсумніви. Вона обумовлена з одного боку високим рівнем захворюваності,летальності, соціально-еко і моральною шкодою що наноситься здоров'юпацієнтів, а з іншого боку внутрішньолікарняні інфекції завдаютьзначної шкоди здоров'ю медичного персоналу. Слід зазначити, що вумовах Сибіру ці питання вивчені вкрай недостатньо і потребують великоїуваги.

В останні десятиліття внутрішньолікарняні інфекції стають все більшзначущою проблемою охорони здоров'я, в економічно розвинених країнах вонивиникають у 5-10% пацієнтів, що значно обтяжує перебіг основногозахворювання, створюючи загрозу для життя хворого, а також збільшуєвартість лікування. Багато в чому це пов'язано з демографічними зрушеннями (збільшення числа осіб похилого віку) і накопичення в популяції осібпідвищеного ризику (люди з хронічними захворюваннями, інтоксикаціями абоприймають імунодепресанти). Виділяють наступні основні причинирозвитку внутрішньолікарняних інфекції.
- Формування і селекція «госпітальних штамів» мікроорганізмів, що мають високу вірулентністю і множинною лікарською стійкістю.
- Нераціональне проведення антимікробної хіміотерапії та відсутності контролю за циркуляцією штамів з лікарською стійкістю.
- Значна частота носійства патогенної мікрофлори (наприклад, золотистого стафілокока) серед медичного персоналу (досягає 40%).
- Створення великих лікарняних комплексів зі своєю специфічною екологією - скупченістю в стаціонарах та поліклініках, особливостями основного контингенту (переважно ослаблені пацієнти), відносної замкнутістю приміщень (палати , процедурні кабінети і т.д.).
- Порушення правил асептики та антисептики, відхилення від санітарно-гігієнічних норм для стаціонарів і поліклінікою

1. Епідеміологія

внутрішньолікарняних інфекцій реєструють повсюдно, у вигляді спалахів абоспородіческіх випадків. Практично будь-який пацієнт стаціонару схильнадо розвитку інфекційних процесів. Внутрішньолікарняні інфекції характеризуютьвисока контагіозність, широкий спектр збудників і різноманітні шляхиїх передачі; можливість спалахів в будь-який час року, наявність пацієнтів зпідвищеним ризиком захворювання та можливість рецедівов. Особливостіепідеміологічного процесу залежать від властивостей збудника, типуучреждежденія, контингенту хворих, якості організації медичноїдопомоги, санітарно-гігієнічного і протиепідемічного режимів.
Необхідно зазначити значне обсіменіння об'єктів навколишнього середовищавнаслідок активної циркуляції «госпітальних» штамів умовно-патогенноїмікрофлори між хворими та персоналом, що сприяє формуванню новогоконтингенту носіїв. Інакше кажучи, відбувається «природний кругообіг»умовно-патогенної мікрофлори за схемою «медичний персонал (хворі)>зовнішнє середовище> медичний персонал (хворі) », що підтримує постійнийепідемічний процес в ЛПУ. Не менше значення мають медичніманіпуляції їх характер. Часто внутрішньолікарняні інфекції виникають післяоперативних втручань і інвазивних лікувальних і діагностичних процедур
(наприклад, катетеризація вен або сечового міхура). Визначений «внесок»вносить нова медична апаратура, що вимагає особливих методів стерилізації
(см таб. 1. Фактори, що призводять до розвитку інфекцій.) Як правило,внутрішньолікарняні інфекції виникають на тлі основного захворювання або,рідше, первинно розвиваються у новонароджених.
- внутрішньолікарняні інфекції може викликати практично будь-який патогенний або умовно-патогенний мікроорганізм.

внутрішньолікарняні Збудник інфекції можуть передаватися повітряно -крапельним, повітряно-пиловим, аліментарним шляхами, трансфузійної,трансплацентарно, при проходженні плода по родових шляхах, статевим та іншимишляхами. (См таб.4 Передача інфекції лікарняним персоналу і від лікарняногоперсоналу, і таб.3. Основні джерела госпітальних інфекцій)

1. Збудники госпітальних інфекцій

Спектор збудників внутрішньолікарняних інфекції охоплює віруси,бактерії, гриби і найпростіших, представлених найбільш вірулентними
«Госпітальними» штамами (см таб.2. Основні збудники внутрішньолікарнянихінфекції). Щороку їх кількість збільшується, переважно за рахунок умовно -патогенних мікроорганізмів. Основні збудники бактеріальних інфекцій --стафілококи, пневмококи, грамнегативні ентеробактерії, псевдомонади іанаероби. Провідну роль відіграють стафілококи (до 60% всіх випадківвнутрішньолікарняних інфекції), грамнегативні бактерії, респіраторнівіруси та гриви роду Candida.

1 Формування госпітальних штамів

У літературі широко використовується термін «госпітальний штам» мікроба,однак єдиного розуміння цього поняття не існує. Деякі вважають,що госпітальний штам - це той, який виділяється від хворих незалежновід його властивостей. Найчастіше під госпітальними штамами розуміються культури,які виділяються від хворих у стаціонарі та характеризуються яскравовиражений резистентністю до деякій кількості антибіотиків, тобто,відповідно до цього розуміння, госпітальний штам є результат селективногодії антибіотиків. Саме таке розуміння вкладено в першій, що є влітературі, визначення госпітальних штамів, дане В.Д. Белякова іспівавторами.

Штами бактерій, виділені від пацієнтів з нозокомінальнимі інфекціями,як правило, більш вірулентніші і мають множинноїхіміорезистентного. Широке використання антибіотиків з лікувальною іпрофілактичної цілями лише частково пригнічує ріст стійких бактерій іпризводить до селекції стійких штамів. Відбувається формування «порочногокола »- виникають внутрішньолікарняні інфекції вимагають застосуваннявисокоактивних антибіотиків, які сприяють у свою чергу появи більшстійких мікроорганізмів. Не менш важливим фактором слід вважатирозвиток дисбактеріозу, що виникають на тлі антибіотикотерапії іприводять до колонізації органів і тканин умовно-патагеннимімікроорганізмами

2. Об'єкти, матеріали і методи дослідження

Об'єктами дослідження при проведенні бактеріологічного контролює:

- повітряне середовище;

- різні об'єкти зовнішнього середовища;

- хірургічний інструментарій;

- шприци, голки;

- системи переливання крові багаторазового використання.

- зонди, катетери, бужі, гумові рукавички і др.ізделія згуми і пластикатів;

- хірургічний шовний матеріал, підготовлений до використання;

- руки хірургів і шкіра операційного поля.

Вивчення санітарно-гігієнічних умов включає визначеннятемператури повітря в основних приміщеннях (лікарняні палати, процедурні,перев'язувальні, операційні та інші приміщення) із застосуванням ртутних іспиртових термометрів, відносну вологість вимірюється за допомогоюпсихрометри Ассмана, швидкість руху повітря кульовим кататерометром,освітленість люксіметром Ю-16. Заміри проводиться за загальноприйнятими методамивідповідно до сучасних нормативних документів.

У поняття мікробіологічний контроль стаціонару включаєтьсябактеріологічне обстеження об'єктів навколишнього середовища на наявністьпатогенних мікроорганізмів, здатних викликати внутрішньолікарняні інфекції.
Плановий бактеріологічний контроль грунтується на визначенні загальногомікробного обсіменіння і визначення санітарно-показовихмікроорганізмів (стафілококи, бактерії групи кишкової палички та ін.) Припроведення бактеріологічних досліджень набір приміщень, у якихпроводиться відбір проб, і перелік предметів навколишнього середовища,що піддаються обстеженню, визначається відповідно до наказу МОЗ СРСР
№ 720 від 31.07.1978 р.

1. Дослідження мікробної обсіменіння повітряного середовища.
Основні положення при відборі проб повітря:

- при високому вмісті мікроорганізмів у повітрі досліджується невеликі обсяги (число вирослих колоній не перевищує 200-300, тому що при більшому числі важко проводити мікробіологічні дослідження колоній);

- при низькому вмісті мікроорганізмів або необхідності виявлення патогенних бактерій суттєво збільшувалися обсяги простягнутого повітря.

Проби повітря відбираються на рівні дихання сидячого або стоячоголюдини. Визначається загальна мікробне число в одному кубометрі повітря інаявність золотистого стафілокока. Дослідження проводиться в динаміці дляоцінки санітарно-гігієнічного режиму навколишнього середовища стаціонару.

Бактеріологічне дослідження повітряного середовища передбачає:

- визначення загального вмісту мікробів в 1 куб. м повітря.

- Визначення вмісту золотистого стафілокока в 1 куб. м повітря.

Відбір проб повітря для бактеріального дослідження проводять у наступнихприміщеннях:

- операційних блоках;

- перев'язувальних;

- послеопераціонних палатах;

- відділеннях і палатах реанімації та інтенсивної терапії та ін приміщеннях, що вимагають асептичних умов.

Проби повітря відбирають аспіраційних методом за допомогою апарату
Кротова. Швидкість протягування повітря становить 25 л на хвилину.
Кількість пропущеного повітря повинна складати 100 літрів длявизначення загального вмісту бактерій і 250 літрів для визначення наявностізолотистого стафілокока. Дослідження повітря новий методдопускається у виняткових випадках.

Для визначення загального вмісту бактерій в 1 куб.м повітря забір пробпроводять на 2% поживний агар. Посіви інкубують при температурі 37 ° С впротягом 24 годин, потім залишають на 24 години при кімнатній температурі,підраховують кількість колоній, що виросли і роблять перерахунок на 1куб.м повітря. Якщо на чашках поживного агару виросли колонії цвілевихгрибів, їх підраховують і роблять перерахунок на 1 куб.м повітря. У протоколікількість цвілевих грибів вказують окремо.

Примітка: При перенесенні апарату Кротова з одного приміщення в іншейого поверхню обробляють дезінфікуючим розчином. Столик, внутрішністики і кришку приладу з внутрішньої та зовнішньої сторони протирають спиртом
(70 %).

Для визначення наявності золотистого стафілокока забір проб проводять нажовтковим-сольовий агар (ЖСА). Чашки поміщають в термостат при 37 ° С на 24 годиниі витримують ще 24 години при кімнатній температурі. Колонії,підозрілі на стафілококи, підлягають обов'язковій мікроскопії іподальшої ідентифікації. З жовтковим-сольового агару знімають в першучергу колонії стафілокока, які утворюють райдужний віночок навколоколонії (позитивна лецітовітеллазная реакція), подальшому зученіюпіддають також пігментовані колонії і з негативноголецітовітеллазной реакцією. Підозрілі колонії пересівають а чашки зкров'яним або молочним агаром. Подальше вивчення їх проводять за схемою.
Схема бактеріологічного дослідження на стафілокок.
Перший день.

Посів на елективний середовища (жовтковим-сольовий, молочно-Олев абомолочно-жовтковим-сольовий агар). Засіяні середовища витримують в термостатіпри 37 ° С протягом 2 діб, або одну добу в термостаті і додатково
24 години на світлі при кімнатній температурі.
Другий-третій день.

Перегляд чашок, фіксація в журналі характеру і масивності зростання. Навищевказаних середовищах стафілокок росте у вигляді руглих, блискучих,маслянистих, опуклих пігментованих колоній. На середовищах, що містятьжовток, золотистий стафілокок, поділений від людини, у 60-70% випадківутворює райдужний віночок навколо колонії (позитивна лецітовітеллазнаяреакція). Стафілококи тваринного походження дають позитивнулецітовітеллазную реакцію в 5-10% випадків. Отвівка на скошений агар дляподальшого дослідження не менше 2-х колоній, підозрілих настафілокок. Для дослідження отвівают насамперед колонії, що даютьлецітовітеллазную позитивну реакцію. При тсутствіі на чашках такихколоній подальшому дослідженню піддаються пігментовані колонії,схожі по морфології з стафілококом. При одночасній наявності на чашкахколоній стафілокока, що відрізняються за пігменти, слід отвівать не меншедвох колоній різного виду. Пробірки з посівом поміщають в термостат при
37 ° С на 18-20 годин.
Четвертий день.

Після добової інкубації у виділених штамів перевіряють морфологію,тинкторіальних властивості (фарбування за Грамом) та наявність плазмокоагулірующейактивності. Слід зазначити, що характер росту культури на скошеномуагарі в ряді випадків дає можливість "передбачати" належність її доувазі золотистого стафілокока або епідермального стафілокока. Перші, якправило, дають рясний рівномірний, соковитий зростання, друга - дуже убогий інерівномірний зростання по ходу посіву. Фарбування за Грамом проводять загальноприйнятимметодом. Під мікроскопом пофарбовані за Грамом стафілококи мають виглядфіолетово-синіх коків, що розташовуються гронами або невеликими купками
( "мереживо"). Плазмокоагулірующую активність перевіряють у реакції коагуляціїплазми (РКП). З урахуванням результатів РКП і лецітовітеллазной активності в 70 -
75% випадків, на четвертий день дослідження може бути підтвердженаналежність виділеного штаму до виду золотистого стафілокока і виданийвідповідну відповідь. На схемі представлені можливі варіанти поєднаньрезультатів визначення плазмокоагулірующей і лецітовітеллазной активності.
Якщо культура має тільки плазмокоагулірующей або тількилецітовітеллазной активністю, то для остаточної відповіді потрібновизначення інших ознак патогенності (ферментації маніту в аеробнихумовах - АФМ або ДНКазной активності). У цих випадках відповідь видають узалежно від результатів, отриманих при визначенні названих ознак.
У разі потреби на 4-й день дослідження може бути поставленареакція визначення ДНКазной активності або анаеробної ферментації маніту.
Визначення антібіограмми проводять лише після виділення чистої культури,за показаннями (вибір способу лікування і т.д.). Виділені культуризолотистого стафілокока підлягають фаготіпірованію.
П'ятий день.

Облік результатів фаготіпірованія, визначення чутливості доантибіотиків, ДНКазной активності. Остаточна видача відповіді.

2. Дослідження мікробної обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища.

Бактеріологічне дослідження мікробної обсіменіння предметівзовнішнього середовища передбачає виявлення стафілокока синьогнійної палички,бактерій групи кишкових паличок і аероманад (строго за показаннями).
Забір проб з поверхонь різних об'єктів здійснюють методом змивів.

Взяття змивів проводять стерильним ватним тампоном на паличках,вмонтованих в пробірки, або марлевими серветками, розміром 5х5 см,простерилізованих в паперових пакетах або в чашках Петрі. Длязволоження тампонів в пробірки з тампонами наливають по 2,0 млстерильного фізіологічного розчину. При використанні серветокстерильний фізіологічний розчин розливають у стерильні пробірки по 2,0мл. Серветку захоплюють стерильним пінцетом, зволожують фізіологічнимрозчином з пробірки, після протирання досліджуваного об'єкта поміщають в туж пробірку.

При контролі дрібних предметів змиви забирають з поверхні всьогопредмета. При контролі предметів з великою поверхнею змиви проводять удекількох місцях досліджуваного предмета площею приблизно в 100-200 кв. см.

Для виділення стафілококів роблять посів безпосередньо на чашку
Петрі з жовтковим-сольовим агаром (див. схему дослідження на стафілокок).
Крім того, в якості середовища накопичення використовують бульйон з 6,5%хлористого натрію, бульйон з 1% глюкози, розлиті в пробірки по 0,5 мл, уякі засівають по 0,2-0,3 мл змивний рідини. Засіяні пробіркиінкубують при 37 ° С протягом 20-24 годин, після чого роблять висів на ЖСА
(див. схему дослідження на стафілокок).

Для виявлення бактерій групи кишкових паличок виробляють посів насереду збагачення, для чого тампон (марлеву серветку) занурюють у 10-20%жовчний бульйон або середу Кесслера. Через добу інкубації при 37 ° Сроблять пересів на середовище Ендо. Підозрілі колонії на середовищі Ендомікроскопіруют і пересівати на 2-у бродильно пробу - середу Гіссен з глюкозою. Середу витримують 24 години при 43 ° С.

Примітка: При використанні свинячий жовчі для приготуванняжовчного бульйону, концентрація жовчі повинна бути в 20 разів менше.

Для виявлення синьогнійної палички спеціальні посіви можна невиробляти. Зазвичай колонії синьогнійної палички вдається виявити накров'яному агарі або на середовищі Ендо. Колонії, підозрілі на синегнойнуюпаличку, пересівають на скошений агар, що містить 2-5% гліцерину абоманіту. Колонії синьогнійної палички дають на поверхні скошеногоагару рясний зростання із зеленуватим відтінком, маслянистої консистенціїз характерним медовим запахом. Виділену культуру фарбують по
Грамом, мікроскопіруют, визначають гемолітичні властивості шляхом висіву начашку з кров'яним агаром.

3.3 Орієнтовний перелік об'єктів, що підлягають бактеріологічномуконтролю:

А. Наркозно кімната

1. Інкубаційна трубка

2. Маска наркозного апарату

3. Трійник наркозного апарату

4. Гофрована трубка

5. Ларингоскоп

6. Роторозширювач

7. Дихальний мішок

8. Руки лікарів анестезіологів-реаніматологів, сестер-анестезист

Б. Передопераційна

1. Тази для миття рук хірургів

2. Чисті щітки для миття рук

3. Фартухи (клейончасті або поліетиленові)

В. Операційна

1. Робочий стіл анестезіологів

2. Операційний стіл

3. Шланг вакуумнасоса

4. Шланг кисневої підводки

5. Змиви з рук всіх що беруть участь в операції

6. Шкіра операційного поля

Г. Післяопераційні палати, відділення та палати реанімації та інтенсивноїтерапії

1. Ліжко, підготовлена для хворого

2. Рушник для рук персоналу і змиви з рук

3. Щітка на раковині

4. Шланг кисневої підводки

5. Запасна наркозно апаратура (набір реанімаційної укладання)

6. Шланг вакуумотсоса

7. Внутрішня поверхня холодильника (для зберігання ліків)

8. Градусники

Д. Перев'язувальна

1. Кушетка для перев'язок

2. Рушник для рук персоналу

3. Щітка на раковині

4. Халат медичних сестер

5. Руки лікарів, медичних сестер

6. Робочий медичний стіл

7. Внутрішня поверхня холодильника для зберігання ліків

3.4 Контроль на стерильність хірургічного інструменту

Інструментарії для медичних маніпуляції за ризиком разлічяют:

Критичні - проникають у стерильні тканини або судини: імплантати,скальпелі, голки, інші хірургічні інструменти і т.д. Стерилізація --спороцидно хімічні речовини, тривалий контакт. Засоби длястерилізації або дезінфекції

Полукрітіческіе - стикаються з слизовими оболонками (завинятком стоматологічних інструментів): г ібкіе ендоскопи,ларингоскоп, ендотрахеальний трубки, а також інші аналогічніінструменти. Дезінфекція високого рівня - спороцидно хімічні речовини,короткочасний контакт. Засоби для стерилізації або дезінфекції

Термометри, ванни для гідротерапії. Дезінфекція середнього рівня.
Лікарняні дезінфікуючі засоби із зазначенням у маркуванні про наявністьтуберкулоцідной активності.

Некритичні (стикаються з неушкодженою шкірою): стетоскопи,настільні прилади, підкладні судна та ін Дезінфекція низького рівня.
Лікарняні дезінфікуючі засоби без зазначення в маркуванні про наявністьтуберкулоцідной активності.

Хірургічний інструментарій за допомогою стерильного пінцета витягують збікс або м'якої упаковки і цілком занурюють у пробірки з поживнимисередовищами. Як виняток, в окремих випадках, якщо все простерилізованихінструменти в одній упаковці великих розмірів (голкотримач,ранорасшірітелі і т.д.), роблять змив з поверхні інструментустерильною серветкою, змоченою в стерильному фізіологічному розчиніабо стерильній водопровідній воді і серветку занурюють в пробірку зтіоглікольовая середовищем. Аналогічні змиви з інших інструментів засівають впробірки з середовищем Хоттінгера і Сабуро.

Методика посіву на стерильність голок і шприців. Для контролю настерильність відбирають шприци малої місткості (1,0 або 2,0 мл) в умовах бактеріологічного боксу, з дотриманням правил асептики занурюють упробірки з поживними середовищами окремо циліндр, поршень, голки. Принеобхідності контролю шприців великої ємності (10, 20 мл і більше)дослідження стерильності проводять методом змиву, при цьому стерильноюсерветкою, змоченою в стерильному фізіологічному розчині абоводопровідній воді, протирають за допомогою пінцета внутрішні частини шприца ісерветку занурюють в живильне середовище.

Дослідження на стерильність систем переливання крові багаторазовоговикористання. Від гумового шланга, ближче до голки, відрізають ножицямиза допомогою пінцета невеликі шматочки (1-2 см) і занурюють у пробірки зпоживними середовищами, голку окремо занурюють у поживні середовища.

Посів на стерильність катетерів, гумових рукавичок та ін виробів згуми і пластикатів. Контроль стерильності зондів, катетерів, гумовихрукавичок та інших виробів з гуми виробляють шляхом повногозанурення дрібних виробів на поживні середовища, від більших здопомогою стерильного пінцета стерильними ножицями відрізають невеликішматочки (1-2 см) і занурюють у поживні середовища.

Посів на стерильність хірургічного шовного матеріалу. Перед посівомємність з відібраними зразками шовного матеріалу в предбоксніке протираютьстерильною марлевою серветкою, рясно змоченою 6% розчином перекисуводню, і залишають на 30 хвилин. Потім вносять в бокс.

1. Кетгут. Підготовлений до роботи кетгут в операційному блоці зберігають у спиртовому розчині йоду. Кетгут перед посівом піддають спеціальній обробці для нейтралізації і відмивання нейтралізуючого розчину. Моток кетгуту, приготований для дослідження, перекладають стерильним карнцангом або пінцетом у стерильний 10% розчин гіпосульфіту натрію. Розчин гіпосульфіту натрію готують на дистильованої води, розливають у пробірки (колби) по 20-30 мл, стерилізують текучим паром по 30 хвилин в продовженні 3 днів.

Кетгут витримують в розчині гіпосульфіту протягом 24 годин при кімнатній температурі (можливе помутніння розчину за рахунок випадіння сірки), потім перекладають у пробірки з 20-30 мл стерильної дистильованої води, де також витримують протягом 24 годин при кімнатній температурі. Безпосередньо перед посівом Оток кетгуту витягують стерильним пінцетом і перекладають у терільную чашку

Петрі, за допомогою пінцета і ножиць його розрізають на дрібні шматочки довжиною 1-2 см і раздергівают для проростання мікроорганізмів кетгуту.

Посів роблять у 2 пробірки з тіоглікольовая середовищем, 2 пробірки з середовищем Сабуро і 2 пробірки з середовищем Хоттінгера, розміщуючи в кожну пробірку по 4-5 шматочків досліджуваного матеріалу.

2. Шовк. Підготовлений до роботи шовк в операційних зберігають в спиртному розчині, тому перед посівом шовк (лавсан) поміщають на 24 години в стерильну дистильовану воду при кімнатній температурі. Перед посівом моток шовку (лавсану) перекладають у стерильні чашки Петрі, розрізають на дрібні шматочки довжиною 1-2 см. Посів шовку роблять так само як і кетгуту.

Дослідження на стерильність апаратів екстракорпоральногокровообігу. Дослідження на стерильність апарату штучногокровообігу проводить бактеріолог і лаборант лікувально-профілактичногоустанови в операційній після асептичної зборки апарата.
Контролю підлягають:

- змив з апарату;

- перфузат до перфузії;

- кров після перфузії.

Стерильний фізіологічний розчин у кількості не менше 250 млпроганяють через апарат, підготовлений до операції, відбирають 100 млрозчину і засівають на поживні середовища. Аналогічно проводять посівперфузата до перфузії і крові після перфузії.

Посів на стерильність перев'язувального матеріалу. Бинти, ватяні кульки,марлеві серветки, турунди і т.п. відбирають з різних місць бікс стерильнимпінцетом. Дрібні вироби цілком занурюють у пробірки з поживнимисередовищами. Від бинтів (внутрішніх частин) і великих марлевих серветок здопомогою стерильних ножиць відрізають шматочки і занурюють у пробірки зпоживними середовищами. На кожний вид перев'язувального матеріалу використовуютьпо 2 пробірки кожного середовища.

Посів на стерильність хірургічного білизни. Простерилізованих іфламбірованнимі ножицями (змоченими в спирті і проведеними через полум'япальники) за допомогою пінцета від хірургічного білизни відрізають невеликішматочки тканини (зав'язка, внутрішні шви і т.п.) і занурюють у пробірки
(колби) з поживними середовищами, по можливості, не торкаючись пробірки
(колби).

4. Правила забору матеріалу на дослідження

Відповідно до Наказу Міністерства охорони здоров'я № 535 від
22.04.1985 р. і № 8 від 19.01.1995 р. завдання щодо вдосконалення іуніфікації діагностичної бази покладаються насамперед на лабораторіюклінічної мікробіології. Тому мікробіологічні аспекти діяльностілікарняного епідеміолога на практиці зводиться до організації та контролюправильного взяття, зберігання та транспортування матеріалу длямікробіологічного дослідження.

Біологічний матеріалу мікробіологічних методів дослідження слідбрати в максимально стерильних умовах, ретельно дотримуючись правиласептики і по возможності уникаючи контамінації зразків мікроорганізмами знавколишнього середовища.

Зразки для посівів необхідно брати до початку лікуванняантибактеріальними препаратами або в інтервалах між прийомом антибіотиків
(не менше 12 годин). Відібраний матеріал повинен бути маркований і як можнашвидше доставлений в мікробіологічну лабораторію. При необхідностізразки поміщають в транспортну середу. Деякі зразки вимагають зберіганняпри t 37 °, інші - при зниженій (холодильнику).

5. У мікробіологічних дослідженнях застосовуються наступні живильнісередовища:

1. Для визначення загального мікробного числа мікроорганізмів використовується частіше всього 1% пептони воду або мясопептонний бульйон (МПБ).

2. Для виявлення стафілококів використовується:

- молочно-сольовий агар: до 1 л мясопептонного бульйону додають 65 г хлориду натрію і 20 г сухого агар-агар. Розливають з колби і стерилізують при 120 ° С 20 хв. Перед посівом до розплавленого і охолодження до 45 ° С агар додають 10% стерильного молока, рівномірно змішують і розливають у чашки Петрі.

- жовтковим-сольовий агар Чістоковіча. 100 мл жовтковим емульсії (один жовток, розмішати в 200 мл ізотонічного розчину хлориду натрію) вливають в 300 мл розплавленого і охолодженого до 50 ° С мясопептонного і розливають у стерильні чашки Петрі.

- молочно-жовтковим-сольовий агар . У 1 л дистильованої води розчиняють при нагріванні сухий живильний агар у кількості, вказаній на етикетці банки, і 90 г хлориду натрію; розливають у колби, стерилізують при 120 ° С 20 хв. Перед вживанням у розплавлений і охолоджені до 50 ° С агар додають 60мл стерильного молока, один жовток (ретельно розбитий скляними намистом з 50 мл ізотонічного розчину хлориду натрію), поліміксин М 300 000 ОД.

Середу перемішують і розливають у чашки: по 20-25 мл для використання при підрощування стафілококів на мебрананних фільтрах і по 12-15 мл (тонким шаром) для прямого посіву.

3. Для виявлення бактерій групи кишкових паличок:

- використовується глюкозопептонную воду (ГПС), середа Ейкман.

Концентрована Середа: в 1 л води розчиняють 100 г пептони, 50 г хлориду натрію, 50 г глюкоза, суміш нагрівають до кипіння, фільтрують, встановлюють рН 7,4-7,6, розливають по 10 мл в колби

(ємністю по 100-250 мл) з поплавцями і по 1 мл в пробірки з поплавцями. У середу можна додати індикатор Аедреде (кислий фуксин, знебарвлені лугом) або бромтімоловий синій.

розведену середу глюкозопептонной води готують так само, як концентровану, але кількість інгредіенов в 10 разів менше на 1 л води. Лактоза-пептони середу готують так само як ДПС, з заміною глюкози на лактозу. Середовища стерилізують при 112 ° С 12 хв.

- середовище Ендо. Середу готують з сухого порошку по прописи, вказаною на етикетці банки. Склад порошку: сухий м'ясо-пептони агар, лактоза, основною фуксин, сульфіт натрію. Середу готують в день її використання. Гарячу середу розрізняють в стерильні чашки Петрі і залишають до застигання на поверхні столу. Зберігати чашки із середовищем можна не більше 3 днів у темному місці або в холодильнику.

- середу