Владивостоцький Державний Медичний Університет

Кафедра мікробіології, вірусології і імунології

РЕФЕРАТ

Експрес-

Діагностика < p> Особливо Небезпечних

інфекцій

Виконав: Новак А.Л.

301 гр., л/ф

Владивосток, 1998 .

Зміст

1. Актуальність проблеми ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .3

2. Загальні принципи експрес-діагностики станів інфекції та імунітету ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .4

3. Експрес-діагностика холери ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .11

4. Експрес-діагностика туляремії ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 15

5. Експрес-діагностика чуми ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 17

6. Деякі інші методи ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 19

7. Висновок ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 22

8. Список використаної літератури ... ... ... ... ... ... ... ... ... .23

Актуальність проблеми

Особливо небезпечні інфекції (ГОІ) - це інфекції, які можуть виникатисеред населення у вигляді окремих захворювань, епідемій і навіть пандемій,частіше супроводжуючи НС (стихійні лиха, війни, масовий голод тощо),характеризуються природного вогнищеве, швидким розповсюдженням і важкимтечією.

Єдиного в усьому світі думки про те, які інфекції слід зараховувати до
ГОІ поки немає, вітчизняні епідеміологи дотримуються такого переліку:

1. Чума

2. Туляремія

3. Міелоідоз

4. Геморагічні лихоманки

5. Жовта лихоманка

6. Холера

7. Генералізована форма сибірської виразки

Найбільш ймовірна поява ГОІ можливо під час НС. Різке погіршеннясанітарно-гігієнічних умов загострює епідемічну ситуацію щодоінфекцій, які раніше мали ендемічних характер, а завезенихінфекції ззовні прибувають особами призводить до того, що потенційніджерела інфекції виявляються неізольованими і протягом тривалогочасу мають численні контакти з оточуючими їх особами. У зв'язку зцим до встановлення остаточного діагнозу захворювання дотримуєтьсясуворий протиепідемічний режим. При перших ознаках або підозрі на
ГОІ здійснюється:

. Виявлення контактних осіб та їх обсервація;

. Дача антибіотиків широкого спектру дії (доксіцілін, тетрациклін тощо), тобто екстрена профілактика;

. Проведення дезінфекційних заходів;

. Відбір матеріалу від хворих і доставка його в лабораторію для мікробіологічного дослідження;

. Організація частковою (повної) санобробки конкретних осіб.

У даній роботі розбирається етап діагностики ГОІ на прикладі чуми,холери та туляремії. Якщо діагноз встановлений з достатньою достовірністю,можна визначити характер протиепідемічних заходів, встановитиможливе джерело інфекції та механізми її передачі. Саме з цьогонеобхідно і виправдано застосування експрес-методів діагностики ГОІ.

Загальні принципи експрес-діагностики станів інфекції та імунітету

Сучасна імунологія виключно багатолика, а сфери застосування імунологічних знань і методів безмежно різноманітні. Вони використовуються практично у всіх розділах біології, ветеринарії і медицини
- від фундаментальних молекулярно-біологічних дослідженні до медико-генетичного консультування і безлічі інших суто практичних процедур, що здійснюються рослинникам, тваринниками та медиками.

І, тим не менше, особливо важливим у соціальному відношенні і методично найбільш передовим продовжує бути той старий і неухильно розвивається розділ імунології, успіхами якого забезпечується розвиток теорії і практики здійснення протиепідемічної роботи-діагностики, профілактики та лікування інфекційних захворювань. А методи імунологічної експрес-діагностики мають ключове значення для ефективного вирішення названих проблем та здійснення усіх відповідних протиепідемічних заходів. Наступні нижче матеріали і присвячені саме цьому розділу прикладної імунології, його стану та перспективам розвитку.

Найважливішою передумовою ефективності будь-яких протиепідемічних заходів є своєчасне прогнозування та виявлення моментів активізації тих екологічних та соціально-екологічних взаємодій, які становлять істота епідемічних процесів . Виключне різноманітність, властиве останнім і потребує диференціації протиепідемічних заходів, обумовлено не тільки самобутністю кожної з існуючого безлічі інфекційних хвороб. Дуже велике значення має в цьому відношенні фундаментальне явище гетерогенності популяцій, що входять до складу відповідних екологічних та соціально-екологічних систем мікроб-жертва. Варіабільность цих дуже складних біосоціальних факторів і умов в дуже великій мірі впливає на специфіку того чи іншого етапу існування кожного епідемічного процесу. І своєчасне розпізнавання цих особливостей, що здійснюється, як правило, з використанням імунологічних методів, забезпечує ту диференціацію протиепідемічних заходів, завдяки якій досягається належне поєднання їх ефективності та виправданості.

Активізація епідемічних процесів визначається, перш за все,зміною співвідношень між двома основними параметрами екологічнихсистем мікроб-жертва, а 'саме між хвороботворними потенціямивідповідних збудників інфекцій і імунологічних статусомзагрозливих контингентів в цілому і кожного з їх членів окремо.
Співвідношення між цими параметрами визначають терміни і інтенсивністьактивізації епідемічних процесів, а отже обсяг і характерпротиепідемічних заходів. Стан же цих параметрів іспіввідношення між ними характеризуються головним чином за допомогою імуно -діагностичних методів, що дозволяють оцінювати стану інфікованості таімунної, як індивідуумів, так і колективів. Цілком зрозуміло, щонайбільшу цінність мають експресні методи іммунодіагностікі.

Імунологічні методи експрес-діагностики станів інфекції таімунітету в деяких відносинах принципово різні, але в багатьохінших аспектах вони є практично єдиними.

Методи експрес-діагностики інфекційних захворювань до недавньогочасу розвивалися головним чином на основі класичних схеммікробіологічного аналізу, що зводиться до виділення в чистій культурізбудника та подальшої його ідентифікації по біохімічних,тинкторіальних, антигенних та іншими характерними властивостями. Багатоетапністьцих аналізів обумовлює їх тривалість і практично виключаєекспресному, що задовольняє епідеміологічну і клінічну практику.
Загальна тривалість мікробіологічного аналізу становить, як мінімум, кількаднів.

Експрес-індикація - це своєрідна розвідка великої арміїлабораторної діагностики. Вона знаходиться на передньому краї наукового пошукунових, простих, економічних, швидких методів індикації мікробів, частина зяких надалі йде на озброєння лабораторної практики і завдякицьому остання весь час вдосконалюється.

Основні об'єктивні вимоги до експресним методів діагностикиінфекційних захворювань зводяться до наступного:

1. отримання результатів аналізу в максимально короткі терміни (години,ідеально-хвилини);

2. можливість проведення і завершення аналізу без виділення шуканогомікроорганізму в чистій культурі, при використанні тільки нативногоматеріалу, у крайньому випадку-з залученням елективних біосред для швидкогонакопичення збудників;

3. безперечно висока специфічність та висока чутливість, якпередумови належної достовірності аналізу;

4. висока продуктивність, простота, доступність івідтворюваність аналізів. Ці вимоги в рівній мірі застосовні і дометодам експресному діагностики станів імунітету.

переважне використання того чи іншого з існуючих методів експрес-діагностики залежить від багатьох конкретних умов. Однак найбільш бажаним є паралельне використання 2-3 методів. Такий підхід значно збільшує надійність одержуваного результату.

На найближчі роки найбільш перспективними такі напрямки розвитку експрес-індикації мікроорганізмів.

1. Ензімоіндікаціонное напрямок, пов'язаний з експрес-індикацієюбіохімічних властивостей та визначенням ферментативного спектру мікробів.

Як і раніше, збережуть свою значимість дослідження з розробкиПолітропний (полісубстратних) живильних середовищ. У нашій країні булирозроблені оригінальні Політропний середовища та їх комбінації, які зуспіхом застосовуються в лабораторній практиці.

При створенні складних полікомпонентних поживних систем необхідновиходити з різних біохімічних і енергетичних потребмікроорганізмів. Для кращого прояви життєдіяльності та біохімічноїактивності патогенних і інших мікробів у середовищах необхідно створюватиоптимальні умови для їх росту і розмноження і одночасно вводитиферментіруемие субстрати (вуглеводи, багатоатомних спирти, амінокислоти ітощо) з найбільш чутливими індикаторами, які швидко бреєстрували їх ферментацію. В результаті застосування оптимальнихполісубстратних середовищ проводиться виділення та накопичення чистої культуримікробів з одночасним визначенням їх біохімічних ознак.

Перспективним слід розглядати розвиток ензімоіндікаціоннихметодів, в яких субстрат з індикатором відділений від живильного середовища іфіксований на спеціальному носії. У нашій країні розроблені вуглеводно -паперові диски із захисною плівкою (паперові реагенти для визначеннядезамінази у мікробів) та їх аналоги ВІС (паперово-індикаторні системи),вуглеводно-паперові поплавці, вуглеводно-полімерні плівки. Всі ціпрепарати є дуже перспективними, вони дозволяють протягомнайкоротший час (3-5 год), використовуючи загальноприйняті поживні середовища талабораторний посуд, визначати ферментативну активність різних видівмікроорганізмів.

Автономний препарат - олівець-фермент, що не має аналогів ні в нас,ні за кордоном, дозволяє без застосування поживних середовищ безпосередньо напредметному склі визначати біохімічні властивості мікробів.

Полісубстратная тест-система і ензімоіндікаторная стрічка використовуютьсядля одночасної ідентифікації 20 біохімічних ознак у мікробів. Ценові види простих «довгожителів» препаратів, призначених для швидкогоі економічного визначення біохімічних властивостей мікробів.

електрофізичних метод визначення ферментативної активності мікробіввключає посів мікробної культури на рідкі поживні середовища, що містятьпептони воду, різні вуглеводи, багатоатомних спирти, амінокислоти зподальшим ферментативним розщепленням досліджуваних речовин і освітоюрізних іонізованих продуктів розпаду, що виявляються спеціальноїелектронною апаратурою. Результати ензімоіндікаціі реєструються через
45-60 хв з моменту посіву матеріалу. Метод дозволяє виявити іідентифікувати кінцеві продукти розпаду, тобто кінцеві мотаболіти звизначенням їх біохімічної і хімічної природи. Безумовно,електрофізичних метод заслуговує пильної уваги і потребуєподальшого вивчення та доопрацювання.

2. Імунологічне напрямок, пов'язаний з швидким визначенням якокремих специфічних детермінант, так і з індикацією цілих антигеннихгруп і комплексів, що характеризують пологи, види і серовар бактерій. Довласне імунологічному напрямку ми відносимо класичніімунологічні методи, засновані на використанні природнихреагентів. Реакції преципітації в рідині по Асколі і в гелі по Оухтерлонюі Манчіні (особливо їх мікроваріанти) зберігають своє значення як методиекспрес-індикації патогенних мікробів і виявлення їх антигенів у різнихматеріалах.

Перспективними є рапід-системи для одночасної та швидкоїіндикації різних видів мікроорганізмів в реакціях мікроагглютінаціі,хоча як і раніше не вирішені питання створення оптимальних видів і найбільшекономічних форм таких систем. Імунологічні принципи розпізнаванняантигенів є вельми тонкими, специфічними, чутливими, звеликими индикационного-діагностичними можливостями. Комплексуванняімунологічних принципів з фізичними, хімічними і деякими іншимипринципами сприяло диференціації імунологічного направлення наряд самостійних напрямів, які наводяться нижче.

3. Іммунофізіческое напрямок, що використовує різні за природою,формі і величині види дрібнодисперсних носіїв (сорбентів) антигенів іантитіл, що сприяють підвищенню чутливості комплекснихімунологічних методів.

Реакції пасивної гемаглютинації та їх модифікації пов'язані звикористанням еритроцитарних діагностичних препаратів. Еритроцитарнадіагностику з успіхом застосовуються для прискореного виявлення іідентифікації як патогенних, так і умовно-патогенних мікроорганізмів
(наприклад, збудників туляремії, бруцельозу, сальмонельозу та ін) врізних патологічних матеріалах, отриманих від хворих, і в об'єктахзовнішнього середовища. Реакції з еритроцитарних діагностикумами є вельмичутливими, і в цьому відношенні часто перевершують інші серологічніреакції. Вони введені в офіційні інструкції по експрес-індикаціїбактеріальних агентів в елементах зовнішнього середовища і в матеріалах, отриманихвід уражених людей і тварин.

Одночасно тривають пошуки нових носіїв антигенів і антитіл,які були б безантігеннимі, стабільними, не руйнується притривалому зберіганні, а застосовувані реакції - простими з техніки постановки
(наприклад, скляні тести) і дослідження з їх допомогою - економічними.

Удосконалюються реакції із застосуванням кольорових целюлозних частинок вяк носіїв антигенів і антитіл. Позитивними властивостями такогороду препаратів є: 1) відсутність власної антигенів; 2)стабільність при тривалому зберіганні; 3) демонстративність і простотатехніки постановки реакції, зазвичай на предметному склі; 4) високашвидкість проходження реакції; 5) економічність.

Крім того, корисним і виправданим вважаємо пошук нових носіївантигенів і антитіл. У цьому відношенні перспективними є іонообміннісмоли, латекси, целюлоза та її похідні і ряд інших речовин, якіможуть сприяти підвищенню чутливості серологічних реакцій.

4. Імунохімічної напрямок, пов'язаний з використаннямрізноманітних комплексних сполук специфічних антитіл або антигенів зхімічними речовинами. Додані хімічні речовини надають їм новіфеноменологічні здібності та властивості, тим самим, розширюючи можливостіекспрес-індикації мікробних агентів зокрема і лабораторного аналізувзагалі.

Велику популярність і практичну значимість набули методишвидкого імунофлуоресцентного аналізу (прямий, непрямий,антікомплементарний), які нині офіційно використовуються як методиекспресному індикації і швидкого визначення мікроорганізмів.

Подальший розвиток дуже перспективного імунохімічної напрямкибагато в чому залежить від хіміків, які повинні розробити досить яскравінові барвники, що вступають на посилання зі специфічними антитілами іантигенами. В результаті можуть бути отримані препарати з новимифеноменологічним властивостями, що дозволяють проводити експрес-індикаціюмікробних культур та окремих клітин за допомогою широко розповсюдженихмікроскопічних пристроїв (типу МБІ різних марок).

5. Імуноферментні напрям, що інтенсивно розвивається в останніроки. Розроблено прямий, непрямий, антікомплементарний й інші методишвидкого виявлення мікробів шляхом використання іммуноензімологіческогопринципу; запропоновані нові види ферментів, а також різноманітні видихромогенних субстратів. Даний напрямок є дуже перспективним,розвиток його може призвести в найближчі роки до появи нових методівекспрес-індикації мікроорганізмів.

6. Іммуноелектрофоретіческое напрямок успішно розвивається з кінця 50 --х років. Розроблено численні методи іммуноелектрофореза. Однак дляцілей експрес-індикації мікробів частіше вдаються до зустрічногоіммуноелектрофорезу. Застосування нових хімічних барвників, ферментної аборадіоактивності дозволить різко підвищити чутливість?? сть методуіммуноелектропреціпітаціі.

7. Іммунорадіологіческое напрямок пов'язане з використаннямрізноманітних кон'югатів специфічних антитіл або антигенів, з'єднаних зрадіоактивними речовинами, які надають їм нові феноменологічнівластивості і здібності, розширюючи можливості експрес-индикационногометоду. Досить перспективно подальший розвиток іммунорадіологіческогонапряму, так як воно безсумнівно призведе до створення нових, простихметодів експрес-індикації мікроорганізмів.

8. Мікроцітологіческое напрямок швидкого цітоморфо-логічногоаналізу пов'язано з використанням светлопольной, фазово-контрастної аболюмінесцентної мікроскопії бактеріологічних мазкових препаратів,оброблених та пофарбованих барвниками, що дозволяють швидко ідентифікуватимікроорганізми за їх морфології і специфічним структурних елементівмікробної клітини. Дослідженню піддають як нативний (гній, мокротиння,сеча, СМЖ, різні ексудати тощо), так і збагачений (наприклад,центрифугуванням, фільтр і іншими методами) патологічнийматеріал.

9. Бактеріологічне напрямок пов'язано з прискореним виділенням інакопиченням бактеріальних популяцій патогенних, умовно-патогенних ісанітарно-показових мікроорганізмів. Воно засноване на використанніоптимальних ростових поживних середовищ, що містять необхіднібіостимулятори, для прискореного отримання бактеріальної культури ічасткової їх ідентифікації за сукупністю культуральних ознак.

10. Фагодіагностіческое напрям, який передбачає, з одногобоку, ідентифікацію мікробів за допомогою специфічних індикаторнихбактеріофагів, а з іншого, - виявлення та індикацію специфічних фагів впатологічному і другом матеріалах за допомогою індикаторних мікробнихкультур.

Прискорена фагодіагностіка в ряді випадків є необхідним ікорисним методом, який дозволяє значно скоротити строки досліджень івстановити природу збудника навіть у тих випадках, коли іншими методами,на увазі його мінливості або забруднення матеріалу, він залишаєтьсянерозпізнаним.

11. Біологічне напрямок, пов'язаний з вивченням токсичних іагресивних властивостей патогенних мікроорганізмів. Біологічні методиздійснюються на одноклітинних організмах, на культурах клітин, курячихембріонів, а також на здорових, а ще краще спеціально підготовленихлабораторних тварин. Ці методи більш трудомісткі і менш точні попорівнянні з іншими.

12. Фізико-хімічний напрямок. Цей напрямок пов'язане звикористанням порівняно швидких, але в той же час і досить складнихза апаратурним оформлення методів. Сюди входять методи вивченнябактеріальних популяцій і їх екстрактів за допомогою хроматографії
(газорідинна та ін), спектроскопії (інфрачервоного, ультрафіолетового йін), резістографіі по відношенню до різних антибіотичних, хімічних ілікарських речовин, а також методи температурної і кислотної агрегації,коагуляції мікробних суспензій і їх токсинів.

13. Рецепторні і генетичне напрямки швидкої індикації патогеннихта санітарно-показових мікроорганізмів. Методи, засновані на цихпринципах, тільки починають розвиватися. Так, за допомогою целюлозно -глобулінового або еритроцитарної-глобулінового діагностикумів швидковиявляють патогенний стафілокок, що містить білок А, а шляхом гомологіїневідомих нуклеїнових кислот з відомими нуклеїновими кислотамивстановлюють вид патогена.

14. Комплексне напрямок прискореної ідентифікації патогенних ісанітарно-показових мікроорганізмів, що використовує методи експрес -індикації, засновані на інтеграції різних принципів, пов'язане зрозробкою і створенням індикаторних тест-систем, що дозволяють протягомкороткого терміну і з мінімальними витратами на аналіз визначити комплексосновних ознак патогена або санітарно-показового представника,достатніх для його ідентифікації до роду, виду і навіть типу.

15. Напрями, пов'язані з розробкою нових принципівмікробіологічного аналізу. Цілком імовірно, і ми маємо право очікувати внайближчі 5-10 років появи нових ідей, підходів і принципів умікробіологічної науки та суміжних з нею областях. Відкриття нових видіврецепторній, імунологічної та генетичної специфічності у мікробівдозволить створити нові і можливо більш досконалі методи швидкоїідентифікації мікроорганізмів.

Основні шляхи розвитку експрес-індикації мікроорганізмів на найближчіроки:

1) створення і конструювання нових препаратів, що сприяютьприскоренню і здешевленню досліджень, підвищенню ефективності лабораторноїдіагностики інфекцій та індикації патогенних та інших мікроорганізмів. Нацьому шляху належить зробити дуже багато чого, оскільки загальноприйнятідіагностичні препарати в значній мірі вичерпали своїпотенційні можливості;

2) розробка нових більш чутливих, простих методів лабораторногоаналізу.

3) розроблення комплексних методів та видів досліджень. Будепродовжуватиметься подальша інтеграція методів і видів досліджень, що маютьрізні принципи дії, що лежать в їх основі;

4) створення нових схем досліджень. Оскільки лабораторна діагностикаінфекційних хвороб, а також експрес-індикація, хоча і в меншійступеня, пов'язані з вивченням комплексу різних властивостей і особливостеймікроорганізмів з використанням звичайно різноманітних методів і прийомів,заснованих на різних принципах, то створення нових схем досліджень ззастосуванням нових методів є об'єктивною реальністю і важливоюзавданням, що випливає із суті самого процесу розвиткумікробіологічного аналізу;

5) розробка і створення нових методів реєстрації та обліку результатівекспрес-индикационного та лабораторних досліджень.

6) розробка нової мікромініатюрной лабораторного посуду, апаратури таприладів для досліджень;

7) автоматизація і комп'ютеризація досліджень.

У сучасних умовах ці питання повинні вирішуватися комплексно.

Таким чином, розглянуті основні напрямки та шляхи розвиткуекспрес-індикації мікроорганізмів у період сучасного науково -технічного прогресу природничих наук безумовно отримають подальшийприскорений розвиток, а мікробіологічна лабораторна практика збагатитьсяновими швидкими методами індикації мікробів.

Експрес-діагностика холери

Холеру викликають два біовари Vibrio cholerae. Один з них, виділений
Кохом в Єгипті в 1883 році, назвали класичним, інший, отриманий
Ф. Готшліхом на карантинної станції Ель-Тор у Північній Африці в 1906 році -
V.eltor. обидва біовари неагглютінірующіеся вібріони (Наги), галофільнихпарагемолітіческіе вібріони, які продукують гемолізини, і нехолерние вібріони -кіслотообразователі включені в рід Vibrio сімейства Vibrionaceae.

Це гостра кишкова інфекція, що супроводжується різким обезводненням ізнесолення організму. Джерелом інфекції є людина - хворийабо носій. Механізм передачі фекально-оральний.

Збудники мають соматичний О-і жгутикових Н-антигени. О-антигенволодіє видової і типової специфічністю. По будові О-антигену розрізняютьдовше 40 сероварів. Розвивається до холері імунітет носить гуморальнийхарактер.

Матеріал для дослідження: випорожнення, блювотні маси, трупнийматеріал.

Метод масового дослідження на вібріононосітельство. Матеріал беретьсябезпосередньо з кишечника за допомогою скляної трубочки діаметром 0,5см (для дітей), 1,5 см (для дорослих) і довжиною 15 см з оплавлені кінцями
(за відсутності трубочок використовують ватяні тампони на дерев'яних палички).
Трубочку негайно занурюють у флакон, що містить 100 - 200 мл 1%пептонов води і аглютинативна холерних О-сироватку у розведенні дополовини її титру. В один і той же флакон беруть матеріал від 10 осіб. Флаконипоміщають в термостат при 370с. Через 3 - 4 години холерні вібріони починаютьагглютініроваться і поступово (протягом найближчих 2 годин) падають у виглядіпластівців на дно флакона. Досліджуючи під мікроскопом пофарбовані мазки і
«Висячу краплю», виявляють склеїти і частково вільних вібріонів.
Через 6 годин дається відповідь і в разі виявлення холерних вібріонівнегайно проводиться посів індивідуально від кожного з 10 осіб. Такийметод дає можливість досліджувати до 16 000 чоловік за 3 - 4 дні.

Метод іммунодіагностіческой мікроплівки. Вивчення антигенних властивостейхолерних вібріонів проводять шляхом постановки пробірочними або пластинчастоїреакції аглютинації з використанням сухих ліофілізованихдіагностичних аглютинативна холерних 0-сироваток і сироваток Огава і
Інаба. Сироватку розводять у фізіологічному розчині або дистильованоїводі і змішують при постановці аглютинації на склі з досліджуваноїкультурою вібріонів. При підготовці сироватки використовується додатковапосуд, що ускладнює роботу бактеріолога, а в що залишилася розведеноюсироватці швидко проростає бактеріальна мікрофлора і інактивує її.

Для вивчення антигенної структури холерних вібріонів були розробленийіммунодіагностіческій препарат у вигляді мікропленок разового застосування,який володів достатньою специфічністю, демонстративністю іекономічністю. Іммунодіагностіческіе холерні мікроплівки (ІХМП) у виглядіполімерної плівки з нанесеними висушеними краплями, фіксованими напапері, містять мінімальну кількість сироватки, плівкоутворювальнийкомпонент і консервант. Плівкоутворюючий компонент зв'язує, склеює іфіксує мікрокількості інгредієнтів до поверхні носія, виключаєкрошенію мікропленок; консервант охороняє препарат від руйнування притривалому зберіганні.

Концентрація діагностичної сироватки в ІХМП є достатньою,оскільки після емульгування у краплі фізіологічного розчину, антитіла містяться втитрі 1:100, що повністю забезпечує хід реакції. Тим самимзабезпечується достатня концентрація антитіл, знижується, витратадіагностичної сироватки і виключається можливість її невикористання. Прицьому створюються умови для швидкого розчинення ІХМП, контакту її зхолерними вібріонами і проведення реакції безпосередньо на полімернійплівці.

Готові ІХМП зберігають у темному сухому місці при 4 - 7 ° С в картоннихкоробках (термін придатності 3 роки - термін спостереження) і в міру потреби ІХМПвикористовують для визначення холерних вібріонів. Для виключення випадковогозараження навколишніх предметів ІХМП поміщають в чисту чашку Петрі. Наповерхню ІХМП наносять краплю фізіологічного розчину, в якійрозчиняють її. Розведену сироватку змішують з досліджуваної культуроювібріонів, знятої бактеріологічної петлею з живильного середовища. При іншомуваріанті постановки реакції ІХМП знімають скальпелем з паперової підкладки іпереносять на предметне скло, розчиняють у краплі фізіологічногорозчину і змішують з досліджуваної культурою вібріонів.

При позитивній реакції через 1-3 хв з'являються зерна агглютіната,пофарбовані в зелений колір, а крапля просвітлюють. При негативній реакціїкрапля залишається гомогенно-каламутній.

Використану частина полімерної плівки відрізають, а частину, що залишиласяплівки з ІХМП зберігають у тій самій чашці Петрі для подальших досліджень.
Використання ІХМП в дослідженнях вібріонів та інших мікроорганізмівдозволяє отримати статистично достовірні результати, заощадитидорогі діагностичні сироватки, підвищити якість і ефективністьдосліджень.

Реакція аглютинації мікрометодом. Останнім часом вбактеріологічної практиці знайшов досить широке застосування мікрооб'емнийметод постановки серологічних реакцій з використанням спеціальнихпланшеток і мікротітровальних голок.

Реакції аглютинації мікрометодом ставлять з холерними аглютинативнареференс-сироватками в полістролових мікротітровальних планшетка з плоскимабо V-образ-ним дном, призначених для імунологічних реакцій,використовуються мпкротітровальние планшетки з об'ємом лунок 0,4 мл і впробірках паралельно. Попередньо планшетки ретельно промивfютпроточною водою, кожну лунку переполіскували дистильованою водою ідобре просушували, потім робили написи простим олівцем.

В усі лунки чотирьох рядів піпеткою-крапельницею з мікротітратора
Такач вносять 0,85% розчин хлориду натрію (рН 7,2) в об'ємі 0,05 мл,потім у першу лунку кожного ряду - того ж об'єму відповідноїсироватки в розведенні 1:25 і проводять її тітрацію мікротітроваль-ної голкоюз головкою (об'єм 0,05 мл), видаляючи з останньої лунки по 0,05 мл.

Після тітраціі сироваток в усі лунки, крім їх контролів, вносять 0,05мл суспензії досліджуваної агарового культури. Цю маніпуляцію проводять натаці.

Після закінчення тітраціі планшет накривають кришкою і ставлять на таці втермостат при 37 ° С. Після 2-годинної експозиції проводять остаточний облікреакції під Стереомікроскопи (МБС-1, МБС-2) в косопроходящем світі. Приоблік реакції кришку з планшетки не знімають, в разі її запотіваннязамінюють іншою.

Після обліку реакції Планшетку і кришку складають у кювет і заливають
5 '% хлораміном так, щоб усі лунки планшетки були заповнені дезраствором.

Дослідження показали, що всі холерні вібріони класичного і ельторбіовари аглютинативна холерної видовий 0-сироваткою в мікрооб'емах.

Що стосується агглютінабельності тіпоспеціфіческімі сироватками, топростежується наступна закономірність: при постановці з сироваткою Інаба в мікрометодом агглютініровалісь 100,а в пробірках-90% штамів класичного холерного вібріона серовар Інаба.
Холерні вібріони біовари ельтор серовар Інаба агглютініровалісь впланшетка і пробірках відповідно в 95 і 96% випадків. У холернихвібріонів класичного і ельтор біовари серовар Огава співвідношення вобох методиках були практично ті ж.

Цікавий факт, що при постановці реакції аглютинації з RO-сироваткоюнайбільше число штамів, аглютинативна RO-сироваткою до титру, буловиявлено в мікрометодом; в пробірках аглютинація встановлена в одногоштаму.

Всі штами вібріонів 040-056 сероварів в мікрометодом НЕагглютініровалісь холерними аглютинативна сироватками, а в пробіркахштам II 258-1099 (040 серовар) агглютініровался усіма холернимисироватками.

Більшість вивчених штамів представників сімейства
Enterobacteraceae також не агглютініровалось холерними аглютинативнасироватками, за винятком Sh. flexneri 2503, у якого в пробірках булавиявлена аглютинація з усіма сироватками, і штаму S. typhimurium 21, уякого відзначена неспецифічна реакція аглютинації з усіма сироваткамияк в пробірках, так і в планшетка.

При користуванні цим методом витрата аглютинативна сироватокзменшується в 10 разів, значно скорочується час, необхідний дляпостановки реакції, і прискорюється термін видачі відповіді. Крім того, описанийметод менш трудомісткий. Таким чином, стандартність, достовірністьотриманих результатів, висока економічність методу дозволяютьрекомендувати його при ідентифікації холерних вібріонів, вивченні штамів іпопуляції штамів холерних вібріонів за ознакою агглютінабельності.

А також:

Іммобілізація вібріонів холерними сироватками і типовими холернимифагами. Краплі випорожнень або матеріалу з поверхні пептонов водиобробляють холерної О-сироваткою, типовими сироватками Огава і Інаба аботиповими холерними фагами. Готують з них препарати «розчавлена крапля»,які досліджують за допомогою темнопольной і фазовоконтрастной мікроскопії. Упозитивному випадку через 3-5 хвилин рух вібріонів припиняється.

РИФ. Препарати з досліджуваного матеріалу обробляють флюоресцирующимпротихолерної сироваткою і досліджують в люмінесцентному мікроскопі.
Позитивним результатом вважається виявлення в препараті навіть одиничнихвібріонів з яскравим жовто-зеленим світлом у вигляді блискучого обідка попериферії клітини. Позитивний результат можна отримати через 1-2 годинипісля початку дослідження, при концентрації вібріонів не менше 106 клітин у
1 мл., Тому рекомендується заздалегідь підрощування матеріалу напоживних середовищах.

Експрес-діагностика туляремії

Збудник туляремії (Туляре - район Каліфорнії) - Franciellatularensis відноситься до роду з нез'ясованим становищем у систематицімікробів. Етіологічна природа туляремії була встановлена в 1912 році
Г.Мак-якому і Ш. Чепіним, а далі докладно вивчена Е. Франсісом.

тулять?? емія - важка кров'яна зоонозних інфекція з природноюосередкових. Основні джерела інфекції - водяні пацюки, ондатри, зайці,щури, миші. Хвора людина неконтагіозен і для збудника єбіологічним тупиком. Передається трансмісивних шляхом через кліщів, анерідко і контактним, аліментарним або аспіраційних шляхом.

Збудник містить нуклеопротеїдні О-і оболончатий білково-ліпідний
Vi-антиген. У перенесли хвороба виробляється дуже напружений ітривалий імунітет.

Матеріал для дослідження: кров, гній, пунктат бубон, слиз із горла.

Реакція аглютинації-розсіювання. Запропоновано проста, швидка,високочутлива і специфічна реакція аглютинації-розсіювання, дляпостановки якій використовується антитільний діагностикумів. Це суспензіятемно-коричневого кольору, що представляє собою комплексне з'єднаннякулястих крупнодісперсних НК-частинок (Нікітін і Котіч) іпротівотуляремійних імуноглобулінів. Препарат зберігають у холодильнику при
4 ° С протягом 2-3 років. Після закінчення 3 років препарат можнаресенсібілізіровать, так як НК-частинки высокостабильны.

Для постановки реакції аглютинації-розсіювання на ретельнознежирене предметне скло наносять ліворуч краплю досліджуваного матеріалу
(досвід), праворуч - краплю фізіологічного розчину або гетерологічногомікроба (контроль). Потім до краплях додають по одній краплі НК-антитільноїтуляремійного діагностикумів. Перемішування крапель виробляють шляхомобертального руху предметного скла за годинниковою стрілкою і через 1 - 5хв оцінюють результати реакції.

Облік і оцінка результатів проводяться неозброєним оком, а також здопомогою лупи та мікроскопа протягом 1-5 хв. При позитивній реакції вразі наявності туляремійного мікроба або його антигена в досліджуваномуматеріалі в невеликих кількостях (до 1-3 млн за стандартом ГКІ) відзначаєтьсяфеномен розсіювання кулястих НК-частинок по всій площі краплі, щореєструється під малим збільшенням мікроскопа, а при концентрації 3-5 млні більше - феномен освіти темно-коричневих зерен агглютіната, видимихнеозброєним оком. При негативній реакції формується чіткоокреслене, темно-коричнева пляма або точка в центрі краплі.

Пропонована реакція з використанням туляремійного НК-діагностикумипризначена для швидкого виявлення специфічного антигену придослідженні об'єктів зовнішнього середовища, харчових продуктів, трупів полеглихгризунів, а також у тих випадках, коли з-за масивного проростесторонньої мікрофлори або загибелі мікроба виділення його посівом або черезбіологічну пробу не вдається. Реакція строго специфічна і дозволяєвиявляти туляремійний мікроб у невеликих кількостях (300 тис. - 1 млн.м.к./мл) або його антиген.

А також ТІФМ та ін

Експрес-діагностика чуми

Збудник чуми був відкритий в 1894 році в Гонконгу А. Іерсеном і в йогочесть був названий Yersinia pestis. До роду іерсіній відносяться також Y.pseudotuberculosis і Y. enterocolitica, що викликають септичнігастроентероколіти або ієрсиніози.

Чума - особ