МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ

ОДЕСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ім. І. І. МЕЧНИКОВА

БІОЛОГІЧНИЙ ФАКУЛЬТЕТ

Кафедра мікробіології, вірусології.

ПОРІВНЯЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА ЕФЕКТИВНОСТІ МЕТОДІВ ЛАБОРАТОРНОЇ
ДІАГНОСТИКИ трихомоноз

Кваліфікаційна роботабакалавра

студента п'ятого курсу заочного відділення

БОГУШ Андрія
Миколайовича

Науковийкерівник кандидатбіологічних наук, доцент

Панченко Микола Микитович

Допущена до захисту Захищена на засіданні ДЕК
"____"_________ 2004р. "____"__________ 2004р.
Протокол засідання з оценкой_________________кафедри ____________ № Протокол № ____________< br>Завідувач кафедри Секретар ДЕК_____________

______________________

ОДЕСА-2004

ЗМІСТ

ВСТУП ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 3
1.ОБЗОР ЛІТЕРАТУРИ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 5
1.1.Сістематіка та біологічні особливості тріхомононад ... ... ... ... .... ... ... .. 5
1.1.2. Метаболізм T.vaginalis ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .7
1.1.3. Культуральні властивості трихомонад ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... 8
1.2. Стійкість до фізичних, хімічних факторів і в зовнішньому середовищі ... ... 8

1.2.1. Умови інфікування трихомонадами ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... .9
1.3. Механізми патогенезу урогенітальної інфекції трихомонаднойетіології ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 10
1.3.1. Клініка тріхомоноза у чоловіків ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 12
1.3.2. Клініка тріхомоноза у жінок ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 14
1.4. Методи діагностики тріхомоноза ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... .15
1.4.1. Мікроскопія нативних і забарвлених препаратів ... ... .... ... ... ... ... ... ... .. 16
1.4.1.1. Метод змивів ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. ... ... ... ... ... ... ... ... .16
1.4.1.2. Мікроскопія нативних препаратів ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... .... ... ... ... .17
1.4.1.3. Мікроскопія пофарбованих препаратів ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... .... ... .18
1.4.2.Культуральное дослідження ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... ... 21
1.4.3.Іммунологіческіеметоди ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... ... ... .22
1.4.4.Методи генної діагностики T.vaginalis ... ... ... ... ... ... ... .... ... .... ... ... ... ... .. 23
1.5.Леченіе тріхомоноза ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... ... ... ... ... ... 24
2.МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 25
2.1. Дослідження культуральним методом ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 25
2.2 Дослідження методом мікроскопії мазка ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .26
2.3. Дослідження методом ПЛР ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .27
3.РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ ... ... ... ... ... ... ... ... ... 28
3.1.Аналіз даних виявлення T.vaginalis у жителів Одеського регіону ... ... ... ... 30
ВИСНОВКИ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 33
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 34

Введення

трихомоноз є одним з найбільш поширених захворюваньсечостатевого тракту і займає перше місце серед хвороб,що передаються статевим шляхом. Інфекція має «космополітичний»характер, від неї страждають 170 мільйонів людей на земній кулі.

Це широко поширене паразитарне захворювання, що викликається
Trichomonas vaginalis однаково часто вражає, як чоловіків, такі жінок. Урогенітальна трихомонада була вперше описана 1863році. Паризький лікар доплату виявив її в виділеннях зпіхви хворих жінок і дав їй назву, яким користуються і по теперішній час. Трихомонади виявляються у 10% «здорових» жінок і більше ніж у 30% мають явні клінічні прояви. Утропічних країнах цей показник змінюється від 15 до 40%. Оцінкичастоти ураженості чоловіків у різних країнах різко відрізняються.
Так, у доповіді Наукової групи ВООЗ наголошується, що трихомонади рідко бувають причиною не гонококковых уретритів. У Польщі патологіяскладає близько 4% всіх НГУ у чоловіків, в Болгарії - 10%, вкраїнах СНД - від 23 до 47%.

Частота інфікування трихомоноз клінічно здорових жінок урозвинених країнах складає 2-10%. У США щорічно реєструютьприблизно 3 млн. нових випадків захворювання жінок (це приблизно
2,4%). У Росії в 1996 році на 100 тис. населення зареєстровано 399
(0,34%) випадків захворювання [3,8].

Докладну характеристику захворюваності трихомоноз московськоїпопуляції у віковій групі від 14 до 59 років чоловіків і жінок дав
М.М. Васильєв [9]. Серед хворих трихомоноз і змішаної гонорейному --трихомонадной інфекцією переважна кількість пацієнтів були незаміжня
/ неодружені або розведені (практично 80%). Як правило, вік хворих трихомоноз та змішаною інфекцією жінок коливався в межах 18-39років, чоловіків - 15 - 39 років. Останні дані підтверджують світовупрактику - хвороба охоплює населення, що веде активне статевежиття. Захворювання протікало з мінімальними клінічними проявами,а часто і без них! Тому частіше трихомоноз виявлявся припрофілактичних оглядах і залучення до обстеження статевихпартнерів. При цьому трихомонадно носійство виявлялося у 40 - 50%хворих змішаної урогенітальної інфекцією [4,11,12,28,40].

З огляду на все вище викладене, змінити ситуацію в кращомунапрямку, можна розробивши політику проведення масовогоскринінгу. А це, неможливо не маючи доступних, точних та надійнихметодів і засобів експрес діагностики тріхомоноза.

Метою цієї роботи була оцінка ступеня надійності та ефективностіметодів лабораторної діагностики тріхомоноза. А так само аналізстатистичних даних щодо виявлення трихомоноз, в Одеському регіоні заперіод 1998-2003 роки.

1 ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

1. Систематика та біологічні особливості трихомонад

Збудником захворювання є Trichomonas vaginalis, він належить до царства вищих протистов - Protozoa, класу жгутикових - Flagella,сімейства - Trichomonadidae, роду - Trichomonas. В організмі людиниіснує три види трихомонад: Trichomonas tenax (elongata),
Trichomonas hominis (abdominalis), Tricomonas vaginalis. У ротовійпорожнини частіше присутня Trichomonas tenax. При диспепсичнихрозладах, зазвичай у дітей виділяють коменсал товстого кишечника -
Trichomonas hominis [24,27,31,32].

Збудник має овально - грушовидну, довгасту,багатокутну та інші форми в залежності від зустрічаються на шляхуперешкод. Розміри трихомонад коливаються від 8 до 40 мкм ібільше. Дрібні особи виявляються при гострому, великі прихронічному перебігу процесу. Зовні збудника є тонкаоболонка - періпласт, забезпечена в передній частині тіла щілиною --цістомой крючкообразной форми, що виконує функцію рота. Тілотрихомонад складається з тонкозернистий протоплазми з численнимивакуолями.

У передній частині тіла паразита розташоване ядро довгасто --овальної форми, круглої або грушоподібної форми, яка містить 5 - 6ядерець. Поруч з ядром знаходиться декілька тілець у вигляді зерен, званих блефоропластом, від якого починається прямаосьова нитка аксонів (аксостіль), що представляє собою пружнийтяж, розташований всередині протоплазми по довгій осі тавиступаючий назовні у вигляді шпильки. На передньому кінці тіла трихомонади є чотири вільних джгутика, що відходять від блефаропласта.
П'ятий джгутик йде тому, приблизно до третини довжини тіла,утворюючи край ундулірующей мембрани, сформованої з періпласта.

Завдяки рухам джгутиків і хвилеподібною (ундулірующей)мембрані трихомонади можуть активно переміщатися. Вони здатніутворювати псевдоподии, що забезпечують амебовідное рух.
Висока пластичність цитоплазми дозволяє трихомонад впроваджуватися вдуже вузькі проміжки між клітинами. Тому трихомонадиможуть існувати в жгутиковой і амебовідной формі, приякої руху джгутиків не видно. Переміщення збудникавідбувається настільки повільно, що він здається нерухомим. Уз них (і нерухомої) стадії трихомонади або зовсім позбавленіджгутиків, або притискають їх до тіла, внаслідок чого їх не можнарозглянути.

Електронно - мікроскопічні підтверджено існування круглихнерухомих форм трихомонад, позбавлених ядра і джгутиків. Усечівнику у чоловіків їх міститься менше, ніж ужінок, і вони малорухливі.

Живиться трихомонада ендоосмотіческі і шляхом фагоцитозу.
Оптимальне середовище для її існування рН 5,2 - 6,2. Саметому найбільш сприятливі умови для трихомонад створюються після менструації. Трихомонади не утворюють цисти або інших форм стійкості забезпечують їм збереження позалюдського організму.

Піхвова трихомонада являє собою самостійний вид, в природних умовах мешкає тільки в сечостатевому апаратілюдини і не вражає тварин. У жінок місцем проживання
Trichomonas vaginalis є піхву, у чоловіків - передміхурова залоза і насінні бульбашки [35,39].

2. Метаболізм T. Vaginalis

Незважаючи на те, що трихомонади за багатьма характеристикаминагадують еукаріоти, вони відрізняються з енергетичного метаболізмуі мають багато спільного з примітивними анаеробними бактеріями.
Трихомонади мають - гідрогеносоми, оточені подвійною мембраною,є які більш досконалими аналогами мітохондрій івиконують схожі метаболічні функції.

T. vaginalis демонструє риси, які є загальними для всіханаеробів відносно вуглеводного та енергетичного метаболізму,що контролюється ферментами, що працюють, як в аеробних, так ів анаеробних умовах. Продукти метаболізму включають: ацетат, лактат, малат, гліцерин, СО2, а в анаеробних умовах - водень.

T.vaginalis - це облігатних паразит, що втратив здатністьсамостійно синтезувати багато макромолекули (пуринів, піримідинів,ліпіди), тому найважливіші поживні компоненти трихомонади отримують звагінального, уретрального секрету при фагоцитозі епітелію і бактеріальнихклітин зі складу симбіотичної і умовно - патогенної мікрофлорисечостатевих шляхів. Остання обставина диктує необхідністьвключення до культуральну середовище для зростання T. vaginalis всі найважливішімакромолекули, вітаміни та мінерали. Для репродукції трихомонадособливо важлива сироватка крові, що містить ліпіди, жирні кислоти,амінокислоти і сліди металів [9,19,22,33,47].

1.1.3 Культуральні властивості трихомонад

трихомонади добре ростуть в анаеробних умовах, оптимальність їхросту при рН середовища 5,5 - 7,5 і температурі 35 - 37 градусів
Цельсія. Культура Trichomonas vaginalis на відміну від інших культур трихомонад не здатна до гемолізу, плазмокоагуляціі, добрерозкладає глюкозу, мальтозу, крохмаль, слабо - лактозу, не утворюєсірководню та індолу.

піхвові трихомонади можна культивувати на живильнихсередовищах, на клітинних культурах і курячих ембріонів. Найбільшпридатна середовище для культивування - печінкова середу зцистеїном, Пептони та мальтози. Культивують від 3 до 5діб [37,39].

1. Стійкість до фізичних, хімічних факторів і в зовнішньому середовищі

Поза організмом людини трихомонада швидко втрачаєжиттєздатність. На протязі декількох секунд гине відвисушування, при термічній обробці в діапазоні до 55 градусів
Цельсія вона зберігає життєздатність - 30 секунд. На трихомонадузгубно діють прямі сонячні промені. При дослідженні секрету простати, збудник гине (візуально втрачає всяку рухливість) зачас поки мазок несуть до мікроскопу.

Серед хімічних речовин бактерицидно діє розчин ртутідихлорид (1:1000 - 1:1500), карболової кислоти (1%) і хлорамін Б
(1 %).

Трихомонада залишається життєздатною при температурі -10 градусів
Цельсія до 22-45 хвилин, при температурі 1-4 градуси Цельсія впротягом 96-114 годин. Збудник також зберігає життєздатність удеяких біологічних рідинах і виділеннях людини. У спермі ісечі трихомонади життєздатні до доби, кілька годин вонивиживають у вологому чистій білизні [23,39].

1. Умови інфікування трихомонадами

Джерелом інфекції є хвора людина, аботріхомонадоносітель. У нестатеве зараження зустрічається рідко,переважно у дівчаток (через мочалки, нічні горщики, латекснірукавички, медичні інструменти). Це можливо завдяки тому, що в грудочках гною або слизу урогенітальні трихомонади протягомкількох годин зберігають життєздатність (до висихання субстратуабо до повного перемішування його з водою). Водний шляхінфікування відкидається, хоча допускається можливість зараженняжінок при спільному прийомі ванн, зі слабко мінералізованою водою, близької до ізотонічного розчину. В акушерській практиці частовідбувається інфікування новонароджених від хворих матерів.

Для дітей характерна осередкові інфекції. Такими осередками можутьбути сім'я, дитячий колектив. Зараження відбувається при непрямомуконтакті. Однак при будь-якому шляху передачі джерелом єхвора людина або носій урогенітальних трихомонад.

Ймовірність зараження під час статевого акту, перевищує 80%.
Причому цей показник має закономірність з тривалістюкоитуса, і з часткою морально гігієнічних аспектів.

Чоловіки в силу анатомо-фізіологічних особливостей ризикузараження схильні в меншій мірі, ніж жінки. Однак у 60 -
80% мали статеві контакти з хворими трихомоноз жінкамипаразити виявляються. У жінки, що стала джерелом зараженнячоловіків трихомоноз, збудник виявляється у 100% випадків.

У тих випадках, коли статевий акт відбувається з використаннямбар'єрних або хімічних методів контрацепції, випадків зараженнямайже не відзначають. Деякі чоловіки після коитуса практикуютьметод затримки сечі в уретрі (шляхом перетиснення крайньої плоті),помилково вважаючи домогтися тріхомонацідного ефекту. Така практика часто призводить до того, що трихомонади вражають не тільки уретру, а й дистальні відділи сечостатевого тракту чоловіки. Імовірністьрозвитку простатиту у цих випадках набагато вище, ніж при звичайномупротягом тріхомоноза, коли спочатку уражається тількиуретра [9,13,14].

2. Механізми патогенезу урогенітальної інфекції трихомонадной етіології

Для тріхомоноза властиві чотири фактори патогенезу такі, як:інтенсивність інфекційного впливу, рН - піхвового та іншихсекретів, фізіологічний стан епітелію сечостатевої системи,супутня бактеріальна флора.

T.vaginalis виділяє в зовнішнє середовище «клітинний роз'єднуючий фактор»розглядаються як засіб, за допомогою якого паразит проникає вміжклітинний простір і, розпушуючи тканину, сприяє проникненню всубепітеліальний шари бактерій, що в підсумку формує вогнище запалення.

T.vaginalis здатна уникати літичної дії комплементу іклітинно - опосередкованих реакцій імунної відповіді хазяїна, що єнайважливішим аспектом патогенезу захворювання.

Стійкість піхвових трихомонад до комплементу залежить відвисокої концентрації в них іонів заліза, які паразит в надлишку здатний одержувати з менструальної крові. Відомо, що іонизаліза регулюють експресію протеазних білків, які сприяютьруйнування С3 - компонента комплементу на поверхні мікроорганізму,і дозволяють паразита уникати комплемент - залежного лізису.
Необхідно враховувати, що вагінальні трихомонади, подібно до іншихпаразитів, секретують високоімуногенние антигени, які здатнінейтралізувати антитіла або цитотоксичні антигени, якіздатні нейтралізувати антитіла або цитотоксичні Т - лімфоцити.
Крім того, T.vaginalis може сорбувати на своїй поверхнібілки плазми (антигенна мімікрія), що не дозволяє імунноїсистемі ідентифікувати паразита, як чужорідний організм.

Таким чином, показано, що трихомонадний інфекція не призводить до розвитку вираженого імунної відповіді. Виявлення у хворих абоперехворіли трихомоноз осіб сироваткових і секреторних антитілє лише свідченням існуючої або перенесеноїінфекції, але не здатністю забезпечити стійкий імунітет.
Реінфекція T.vaginalis в людини не викликає імунного захисту.
Клінічні прояви урогенітального тріхомоноза відрізняються великою різноманітністю: від гострих форм з яскраво вираженими симптомамизапалення до мало і асимптомно перебігу захворювання.
Патогномонічних клінічних (суб'єктивних і об'єктивних) ознактріхомоноза немає, також не виявлені специфічні морфологічнізміни в уражених органах і тканинах. Визначальну роль упатогенезі T.vaginalis грає формування різних асоціаційпіхвової трихомонади з патогенними та умовно - патогеннимимікроорганізмами урогенітального тракту, а також у відповідь реакціїмакроорганізму. Якщо сила відповідної реакції макроорганізму перевищує
«Агресивність» інфекційного агента, то клініка гострого запалення, як правило, не розвивається, а навпаки, слабкий імунну відповідьсприяє реалізації патогенних і вірулентних властивостейзбудника.

T.vaginalis, потрапляючи в уретру, фіксується на клітинах плоского епітеліюслізістой оболонки, проникаючи в залози сечівника і лакуни.
Потрапивши в сечостатеві органи, вона зумовлює розвиток запаленняабо залишається непоміченою. Помірно виражена запальна реакціярозвивається за наявності великої кількостіпаразитів [1,2,3,6,9,13,15].

1.3.1 Клініка тріхомоноза у чоловіків

У чоловіків трихомонади можуть вражати уретру, її залози,насінні бульбашки, простату, придатки яєчка, куперови залози, парауретральні протоки, залози крайньої плоті, сечовий міхур, нирковімиски.

Уретрит - найбільш часте ураження. Розрізняють свіжий іхронічний. Перебіг свіжого уретриту частіше підгострий і торпидную,рідше гостре. При гострому і підгострий протягом уретриту спостерігаютьсярясні гнійні виділення з уретри, при торпидной течії --мізерні, водянисті, слизисто гнійні або слизові. У деякиххворих виділення пінисті. Суб'єктивні відчуття непостійні і звичайно маловиражени: част це свербіння і паління в сечівнику;іноді може виникати біль під час сечовипускання. Діуретичнірозлади виражені слабко.

Рясні виділення при гострій і підгострій формах уретриту за 1
- 2 тижні, мимоволі зменшуються, і захворювання стаємалосимптомно. У частини хворих уретрит починається з не різковиражених явищ, але потім поступово посилюється, набуваючигострий і підгострий характер.

Хронічні уретрити відрізняються млявим перебігом з періодичнимзагостренням патологічного процесу. У 63% хворих захворюванняхарактеризується малосимптомно, убогими гнійними виділеннями, абослизисто - гнійними виділеннями, у 37% переважають симптомиускладнень, а уретрит залишається непоміченим хворими.

Запальний процес недовго обмежується передньою уретрою.
Досить швидко розвивається тотальний уретрит. Прискоренесечовипускання, імперативні позиви, біль наприкінці сечовипускання,пиурия, термінальна гемотурія спостерігаються тільки при гостромутечії. У торпідний випадках клінічні ознаки заднього уретритувідсутні. Він зазвичай розпізнається по патологічного складудруга порції сечі і даними уретроскопії.

Зміни, виявлені при уретроскопії у чоловіків, які страждаютьтрихомоноз, мало чим відрізняються від ендоскопічної картини пригонорейному уретриті.

Простатит, виникає в у 10,6 - 27,8% хворих. Можливо,встановити тільки після взяття секрету залози.

Епідіміт, зустрічається частіше, ніж при гонореї, носить завждиодносторонній характер. У 30% протягом гостре, у 70% спостерігаєтьсякороткочасний підйом температури.

везикул, супроводжує епідіміту і простатиту і несупроводжується зазвичай суб'єктивними розладами. Везикуліти інодіведуть гемосперміі. Часто уражаються лакуни - літтеровскіх залоз,тізоніевих залоз і пара уретральних проток.

стриктури уретри, розвиваються в 5 - 8,4% випадків і виявляютьсятільки при уретроскопії, на відтік сечі не впливають.

Цистит, за клінічним перебігом нічим не відрізняються відциститів іншої етіології. При цистоскопії виявляється дифузнагіперемія слизової трикутника. У сечі, взятої катетером, інодівиявляють трихомонади і бактеріальну флору. Висхідна інфекціяверхніх сечових шляхів розвивається дуже рідко.

трихомонади у частини хворих вражають шкіру геніталій. Вони частішерозвиваються у жінок. За своїм прояву ураження можутьнагадувати шанкріформную піодермії, первинну сіфілому, в іншихвипадках утворюються виразки з неправильними подритимі краями з гнійнимнальотом на дні. Однак більш часті неправильної форми ерозії зяскраво - червоним дном [34,35,38].

2. Клініка тріхомоноза у жінок

Характеризується многоочаговостью поразки. У патологічнийпроцесу залучається переважно нижній відділ сечостатевого тракту
(86%). Висхідний процес розвивається у 14% хворих. Перш за все,у жінок уражаються уретра, піхву і канал шийки матки.
Переважає розвиток вульвовагинита.

вульви і вестибуль. При гострому перебігу процесу хворіскаржаться на печіння в області геніталій, свербіж і білі. Шкіра великихстатевих губ і слизова оболонка передодня стають набряклими,гиперемованими і покриваються гнійно-слизовими сірого кольорувиділеннями, зсихаються в кірки, при видаленні яких наслизової виявляються ерозії. Під впливом рясних виділеньвиникає дерматит на внутрішній поверхні стегон. При хронічномуперебігу захворювання можливий свербіж і менш рясні виділення. Приогляді наголошується вогнищева гіперемія слизової вульви

Уретрит. Майже у половини хворих протікає без суб'єктивнихвідчуттів, у решти - переважно з гострим перебігом. Єскарги на різь і болючість під час сечовипускання, імперативніпозиви на сечовипускання і болючість при залученні впатологічний процес шийки сечового міхура. При огляді виявляються гіперемія і набряк губок уретри, пальпаторно встановлюється їїінфільтрація. При масажі уретри виділяється крапля гнійного або гнійно -слизового вмісту, в якому можна виявити трихомонади.

Хронічний уретрит звичайно протікає асимптомно, супроводжуєтьсямізерним виділеннями та ущільненням у вигляді тяжа уретри.

Нерідко в патологічний процес втягуються парауретральних ходи.
Навколо їх гирл розвивається гіперемія слизової оболонки, а при пальпаціївиявляється ущільнення у вигляді маленького тяжа або вузлика. Приуретроскопії слизова зазвичай гіперемована або бліда, судинипогано помітні, складки нерівномірні, згладжені.

Бартолініт. Загальні розлади відсутні, біль в областібартолінових залози.

Вагініт. Сама часта форма тріхомоноза. При гострому перебігуспостерігаються рясні рідкі, гнійні, пінисті білі, роз'їдаютьвиділення, кількість яких значно менше при хронічномупроцесі. Слизова піхви дифузно гіперемована. Інодізахворювання може протікати по типу макулезного, гранулезного іерозивного вагініту, а хронічні поразки - нерідко безвиражених клінічних симптомів.

ендоцервіцит. Супроводжується гіперемією слизової і набряком шийкиматки, рясними виділеннями з шийного каналу, під впливомяких утворюються ерозії, що купують фолікулярний характер прихронічному перебігу процесу. При стиханні запального процесунерідко залишається тріхомонадоносітельство.

Висхідний трихомоноз. Виявляється у вигляді метроендометріта (46%)
, Періметріта і аднекситу (46%) [20,26,28,39].

1.4 Методи діагностики тріхомоноза

В даний час в нашій країні і за кордоном застосовують чотирилабораторних методу визначення T.vaginalis: мікроскопічний,культуральний, імунологічний та генодіагностіческій.

Всі методи діагностики тріхомоноза у чоловіків менш надійні, ніж ужінок, так як у виділеннях уретри у чоловіків, як правило, міститьсязначно менше збудників, які часто малорухливі. Умовиперебування паразитів в чоловічій уретрі і в піхві жінок різкорозрізняються. Це не може не вплинути на T. vaginalis, пристосувальніформи, якої у чоловіків і жінок звичайно різні. Трихомонади в цьомувідношенні не відрізняються від багатьох видів мікроорганізмів, фенотип якихзмінюється залежно від середовища проживання і зовнішніх умов. Для тогощоб отримати більш надійні дані, необхідно дотримуватися наступнихправил:

1. Негативний результат будь-якого дослідження не виключає наявність трихомонад; всі види досліджень необхідно виконувати багаторазово.

2. Дослідження отриманого матеріалу проводити одночасно всіма методами.

3. Для оцінки використовувати не тільки уретральний відокремлюване і секрет передміхурової залози, а й осад свежевипущенной сечі, секрет бульбоуретральних залоз, сперми [5,22,35].

1.4.1 Мікроскопія нативних і забарвлених препаратів

Кращі результати отримують при дослідженні не вільно стікаютьвиділень, а зіскрібків і змивів з уретри, так як трихомонади локалізуютьсяпереважно в її лакунах і залозах.

1.4.1.1 Метод змивів

Метод змивів дозволяє отримати матеріал для нативних препаратів іпосівів при мінімальній кількості надзвичайно небезпечні. З цією метою напрокип'ячену скляну трубку довжиною 12 - 15 см. з оплавлені кінцяминадягають гумовий балончик і набирають у неї злегка підігрітийізотонічний розчин хлориду натрію або розчин Рінгера - Локка (0,5 - 1мл). Після видалення вільно стікають виділень та легкого масажу уретри вїї зовнішній отвір вставляють трубку. Розчин кілька разів вдувають вуретру і знову засмоктують в трубку. Таким чином, з ним змішуєтьсявідокремлюване передньої частини уретри і вміст залоз і лакун. Змивши випускаютьу флакон з-під пеніциліну, звідки його можна перенести на предметнескло або засіяти. Центрифугування змивів полегшує пошуктрихомонад [9,37,38].

1.4.1.2 Мікроскопія нативних препаратів

Найбільш доступний і точний метод, так як типові трихомонади не можнасплутати іншими мікроорганізмами та клітинами, що зустрічаються в сечостатевихорганах. Нативний препарат готують методом висячою або роздавленою краплі.

Густе відокремлюване розбавляють теплим фізіологічним розчином хлоридунатрію, щоб полегшити переміщення трихомонад. Активна рухливість,притаманна трихомонада у вагінальному секреті, що виділяється чоловічої уретриспостерігається рідко. Найчастіше відзначаються толчкообразние руху або тількиколивання джгутиків і ундулірующей мембрани. Препарати розглядають узвичайному мікроскопі зі злегка спущеним і задіафрагмірованним конденсорів
Аббе, в результаті чого створюється необхідна контрастність. Використовуютьтакож конденсори темного поля і фазово-контрастної мікроскопії.

Іноді для більш рельєфного виділення трихомонад нативного препаратудодають краплю розчину Люголя, флюоресцеіна. Припинило рух абомалорухомі трихомонади в нативних препаратах не розпізнаються. Крімтого, руху трихомонад швидко припиняються при охолодженні і висиханніпрепарату, тому мазки необхідно досліджувати відразу ж після одержанняматеріалу [9,14,15,37].

1.4.1.3 Мікроскопія пофарбованих препаратів

Зручно, оскільки не вимагає негайного вивчення узятих мазків. У нихвдається розрізнити не тільки типові рухливі, але і малорухомі
(амебоідние) трихомонади, в нативних ж препаратах виявлення атиповихпаразитів, які не мають, як правило, активної рухливістю, доситьважко.

Розроблено різні методи забарвлення. Одні з них дозволяють розглянутиорганоиди паразита, але через складність їх використовують лише при науковихдослідженнях (наприклад, фарбування по Гейденгану). Інші методи, більшпрості (по Лейшману, за Романовскому - Гимзе), н завжди дозволяють відрізнитиджгутики, аксостілі і блефанопласти, які служать пізнавальнимиознаками трихомонад. Багато хто віддає перевагу забарвлення метиленовим синім. Досвідпроведення мікроскопії дозволяє стверджувати, що в правильно забарвленихметиленовим синім мазках рухливі (типові) трихомонади мають достатньохарактерний вигляд. Однак діагностика атипових (амебоідних) трихомонад більшескладна і відповідальна, вимагає більшої обережності і іноді залишаємісце для сумніву. Ось чому при виявленні атипових форм слідутриматися від категоричного висновку, який може бути причиноюгіпердіагностики. Приготування мазка: виділення наносять на чистепредметне скло і обережно розмазують по ньому іншим склом. Пригрубому розмазування настільки ніжні клітини як трихомонади, легкороздавлюється, що ускладнює їх розпізнавання. При фіксації над полум'ямтрихомонади також деформуються. Після забору матеріалу злегка висушеніна повітрі не фіксовані препарати відразу ж фарбуються 1% воднимрозчином метиленового синього протягом двох - трьох хвилин, а потімпромивають звичайною водою і висушують на повітрі.

Пофарбований метиленовим синім «типові трихомонади» мають ніжнусітчасту, піняву цитоплазму світло-блакитного кольору. Інтенсивно пофарбованийперіпласт чітко окреслює межі тіла. Компактна темно-синє зфіолетовим відтінком маленьке ядро знаходиться зазвичай у переднього кінця тіла,рідше в центрі. Воно має форму кісточки сливи або неправильну форму і неперевищує 1/3 довжини тіла. В цитоплазмі містяться вакуолі, найбільшіз яких розташовуються поблизу ядра. У них можуть бути укладені бактерії іхарчові частинки. В цитоплазмі видно також темні гранули діаметром 0,2 - 1мкм. Довжина коливається від 12 до 30 мкм і більше. Хоча джгутики та іншіорганели не видно (лише зрідка забарвлюється аксостіль), а препарат маєоднотипну забарвлення, ці особливості дозволяють легко диференціюватитрихомонади від клітин епітелію, а також лейкоцитів з блідою, рівномірнопофарбованої цитоплазмою і круглим або овальним ядром в центрі.

Інакше виглядають атипові, амебоідние трихомонади. Вони розрізняються заформою і величиною, але переважають особи круглої або овальної форми, діаметром
15 - 35 мкм і більше. Межі тіла чітко окреслені тонкою, синьою лінієюперіпласта. Цитоплазма ще більше світла з-за великої кількості вакуольз окремими включенням і зернами, іноді скупчуються біля ядра.
Овальне або неправильної форми, рідше кругле ядро складають половинудовжини тіла паразита, розташовуючись ексцентрично. Воно фарбується не настількиінтенсивно, але, як правило, чітко відокремлене від цитоплазми. У ядрі виднонечисленні грудочки хроматину і світла строма. У вакуолях не рідкопомітні захоплені бактерії і клітинні уламки. З цього опису легковідрізнити трихомонади від мононуклеарних лейкоцитів і клітин епітелію. Важкодиференціювати амебоідние трихомонади від макрофагів з дегенеративнимизмінами. Щоправда, такі макрофаги майже ніколи не зустрічаються в уретрі.
Лише при гострому гонококовому запаленні зрідка виявляють макрофаги ідвуядерні плазматичні клітини. Макрофаги розташовуються скупченнями,кількість їх збільшується на початку періоду одужання, вакуолізаціябуває тільки при дуже високій вірулентності бактерій, які зазвичай неінфікують уретру. Трихомонади, як правило, поодинокі в полі зору, післяодужання зникають, ексудат часто не містять мікробів, у них небуває дуже великих вакуоль. Ядро макрофаги кругле, овальне абобобовідное, щодо гомогенне: іноді в ньому видно одне або кількаядерець, загальна забарвлення його темна. Ядро трихомонади, навпаки, складається здекількох чітко розрізняються грудочок хроматину, укладених в загальнуоболонку з більш світлою стромою.

Підтвердженням того, що вказані вище клітини є трихомонадамиатипової (амебовідной), форми, служать наступні факти:

Їх знаходять одночасно з типовими паразитами, а також у тих хворих, у яких рухливість трихомонад відсутня, але які були джерелом зараження трихомоноз кількох людей.

1. Вони зникають після протівотріхомонадного лікування і з'являються знову лише за рецидивах і реінфекція.

2. Метронідазол (трихопол) ефективний при лікуванні хворих, у яких в абактеріальном відокремлюваному виявлені такі клітини.

3. При хронічному уретриті і рецидивах типові трихомонади з'являються у хворих, у яких у гострій стадії виявляються тільки ці клітини.

4. Вони відсутні у хворих з іншими формами уретритів, якщо немає змішаної інфекції.

5. Типові трихомонади виявляють у більшості статевих партнерок осіб, яким діагноз тріхомоноза був встановлений на підставі виявлення цих клітин.

6. При посіві матеріалу від хворих, у яких виявлені такі клітини, нерідко виростають типові трихомонади.

Представляє інтерес та обставина, що типові рухомітрихомонади частіше виявляють при хронічному та торпидной уретриті, нерідкоускладненому хронічний простатит, тоді як при гострих уретритахвиявляють мало паразитів - в основному атипові амебоідниеформи [7,10,14,15,19].

1.4.2 Культуральні дослідження

Служить важливою ланкою лабораторної діагностики тріхомоноза у чоловіків іжінок, особливо при розпізнаванні атипових форм паразитів і виявленні їхв осіб, які отримували протівотріхомонадние препарати притріхомонадоносітельстве. Зрозуміло, посіви необхідно проводитипаралельно мікроскопії нативних і забарвлених препаратів і повторювати принегативні результати.

Суперечливі оцінка культурального методу діагностики тріхомонозапов'язана, в першу чергу, з використанням нестандартних поживних середовищ,нерідко володіють низькими якостями. Достатній чутливістюволодіє середу СКДС, розроблена В. Н. Бєднова. Серед імпортних високімякістю володіють також середовища «Diamon», «Kupferberg», «Asani», а такожтест - система «Тріхомоно-Скрін» Дмитрієва.

Метод вирощування трихомонад в бульйон культурі - "золотий стандарт"для діагностики, тому що це простий в інтерпретації метод і вимагаєменш ніж 300-500 трихомонад/мл інокулюму для початку зростання в культурі. Тимне менше, для нього існують обмеження, властиві культуральним методам.
Для діагностики необхідний інкубаційний період від 5 до 7 днів, що єзанадто тривалим через можливість інфікованого пацієнта допоширенню інфекцію. У зв'язку з цим він не отримав широкого застосуванняв клінічній практиці як прямий діагностичного методу.

Для поліпшення сприйняття культурального методу, за кордоном буврозроблено метод пластикового конверта, за допомогою якого можна виконатияк негайну перевірку присутності трихомонади, так і зберегтиподальше зростання трихомонад в одній самопідтримуваної системі. Отриманірезультати порівнянні з такими при дослідженні мазка і культур. Аналогічнопластиковому конверту використовується система «InPouch» у вигляді двокамерногомішка, що дозволяє виконати швидку перевірку культури шляхом мікроскопіїчерез стінку мішка.

Технологія зростання патогенів на клітинній культурі використовує властивостіклітинних ліній відновлювати зростання T.vaginalis з клінічних зразків.
Було продемонстровано, що цей метод дає кращі результати --щодо культивування в бульйоні і приготування вологої камери,оскільки здатний визначати T.vaginalis в концентраціях менше 3організмів в 1 мл. Однак культивування в культурі - це не простийрутинний метод; він дорогий і незручний для швидкої діагностики [5,9,
14,15,22,29,36,37]

1.4.3 Імунологічні методи

Обмеження культуральних і мікроскопічних методів для виявлення
T.vaginalis змусили вчених розвивати альтернативні методи, які можутьвизначати антиген, антитіло або нуклеїнові кислоти в уретральний абовагінальному ексудаті. Імунологічні методи не отримали належногорозповсюдження через відсутність якісних вітчизняних тест-систем.
Крім цього, всі методи серологічної діагностики T.vaginalis малоінформативні, т. до даний антиген не викликає 100%-го імунної відповіді.
Хоча для підтвердження діагнозу ними можна скористатися. Використовуютьсярізні методи визначення антитіл: аглютинація, непрямагемаглютинації, дифузія в гелі, флюоресценція антитіл та імуноферментнийаналіз, метод іммуноблотінга. Певний діагностічіческое значення маєпряме визначення специфічних білків T.vaginalis в біопробах звикористанням моноклональних антитіл як швидкого методудіагностики тріхомоноза. Прямий імуноферментний і імунофлюоресцентнийаналіз мазків вагінального зіскрібка (тест-система фірми California
Integrated Diagnostics, Benicia, Calif.), Який використовує перокідазо - іфлюорохром - мічені суміші моноклональних антитіл до різних структур
T.vaginalis був таким самим чутливим і специфічним, як і використовуванийкультуральний метод. К тому