Фармакогностіческое вивчення роду хвощ

ВСТУП

АКТУАЛЬНІСТЬ ТЕМИ: Проблема створення нових лікарських засобіврослинного походження - одна з актуальних в сучасній фармації.
Ця задача може бути вирішена за рахунок підвищення якості існуючих івпроваджених нових лікарських засобів.

Кількість рослин, які використовуються в якості лікарських дужевелике. Але лише незначна частина з них, найбільш важливих і частішезастосовуваних, визнана офіцинальними і входить в сучасну фармакопеї.

дикорослих лікарських рослин великий інтерес приділяєтьсязавдяки великим зон зростання, і, отже, що дозволяєзабезпечити потреби охорони здоров'я в лікарську сировину.

Для лікування дерматологічних захворювань поряд з гормонами,антибіотиками та синтетичними продуктами в даний час успіхомкористуються препарати, одержані з лікарської рослинної сировини,перевага яких полягає в широті фармакологічної дії, малоїтоксичності, можливості тривалого застосування без побічних ефектів.

Хвощ, користується підвищеною увагою дослідників і клініцистівзавдяки наявності цінних цілющих властивостей, достатніх площзростання, а значить сировинної бази.

Поряд з цим відзначається неповне вивчення фармакологічної діїхвоща, його лікарських форм та методів оцінки, що зумовило передумовидля більш поглибленого вивчення хвоща як лікарського засобу.

Великий ареал зростання дозволяє використовувати хвощ яксировини для промислового виробництва препаратів.

МЕТА РОБОТИ: Фармакогностіческое вивчення, розробка технологіїекстракту хвоща сухого.

ОСНОВНІ ЗАВДАННЯ:
1. Визначити перспективний вид роду хвоща.
2. Вивчити антигрибкову активність роду хвощ.
3. Вивчити хімічний склад роду хвоща.
4. Розробка технологічного процесу сухого екстракту хвоща.

Наукова новизна: Вперше проведено фітохімічних аналіз деяких видівроду хвощ, розроблена технологія одержання екстракту, визначенапротигрибкова активність.

Практичне значення: Розроблено схему технологічного процесуотримання сухого екстракту хвоща польового.

ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

Глава I.

1 Ботанічна характеристика деяких видів роду хвощ, його хімічний склад, перспективність створення лікарських препаратів.

1.1.1Ботаніческое опис.

Хвощ польовий (Eqisetum arvense L), сімейство хвощевие (Eqisetaceae) --це багаторічна трав'яниста рослина з спорові повзучим, глибокозануреним, буро-чорним кореневищем, нерідко несе кулясті бульби.
Стебла двоякого роду: спороносні, що з'являються навесні, і літні --безплідні, що залишаються до осені.

спороносні пагони не гіллясті, соковиті, висотою 7-25 см, світло-буріз рівними ребрами і дзвонові бурими піхви, закінчуютьсяспороносні колоском. Колоски овально-циліндричні, суперечки кулястізеленуваті. Після осипання суперечка спороносні стебла швидко відмирають, і зцього ж кореневища відростають літні вегетативні пагони. Літні пагонипрямостоячі, борознистих, висотою до 50-60 см, без колосків, зелені,тонкі, членистих, жорсткі з численними гілками, всередині порожні. Гілкибезлисті, в колотівками по 6-8, косо вгору спрямовані, прості, чотирьох-,п'ятигранний. Піхви стебел, що представляють собою зредуковані листя,циліндричні, 4-8мм довжини, з трикутно-ланцетні, чорно-бурими,белоокаймленнимі зубцями, зазвичай зрощені між собою по 2-3, піхвигілочок зелені з 4-5 бурими, дліннооттянутимі зубчиками [].

Складний зовнішній вигляд мають і інші види хвощів, що істотноускладнює встановлення автентичності.

Хвощ луговий (Eqisetum pratense L). Багаторічна, спорових, трав'янистарослина з нетовстий, повзучим чорним кореневищем без бульбочок.
Спороносні стебла 10-20 см заввишки, блідо-зелені, прості, гладкі, задозріванню суперечка розвивають зелені гілки і стають схожими навегетативними пагонами. Піхви на них не більше 1,5 см завдовжки,узкоколокольчатие. Колос 0,8-1,5 см завдовжки, циліндричний.

Хвощ лісовий (Eqisetum sylvaticum L). Багаторічна, спорових,трав'яниста рослина з тонким, повзучим, чорно-бурим, зеленим кореневищем.
Спороносні стебла 20-40 см заввишки, до 0,5 см в діаметрі, рудуваті абочервонуваті, прості з рівними ребрами. Піхви на них дуже великі,
1.5-3 см довжиною, 1 см шириною, в нижній частині зелені, у верхній бурі,перетинчасті, в числі 6-10. Колоски 2-4 см завдовжки, циліндричні. Післядозрівання суперечка генеративні пагони зеленіють і розвивають колотівкамибагаторазово гіллястих гілок. Безплідні стебла з 10-14 ребрами. Піхви
6-12см завдовжки, дзвонові, блідо-зелені, з іржаво-коричневимилопатями. Гілки численні, 3-5-граніті, тонкі, з'являються з 4-5вузла. [].

Хвощ болотний (Eqisetum palustre L). Болотне, гідрофільні рослина.
Кореневище матово-чорне, розгалужене, з бульбочок. Стебла 15-40 смвисотою, 1.5-3 мм діаметром, зелені, звичайно гіллясті або прості, з тонкопоперечно-зморшкуватими крилатими ребрами. Піхви 5-12мм довжиною,узкоколокольчатие, зелені або темні, зубці в числі 5-8, коротше піхв,чорно-коричневі, c широкою білою облямівкою. Гілки вгору спрямовані, колос 1 -
3 см завдовжки, циліндричний, тупий, на короткій ніжці. [].

Хвощ зімующій (Eqisetum hiemale L). Кореневище майже чорне, вертикальнорозгалужене. Стебла 50-80 см заввишки, 3-5мм діаметром, циліндричні,міцні, жорсткі, з широкою внутрішньою порожниною. Ребра численні,тонкі. Піхви 5-10мм завдовжки, блідо зелені, на верхівці і припідставі чорні, c 10-30 шіловіднимі зубцями, які рано обламуються.
Колос 1-3 см завдовжки, овальний, угорі загострений. [].

1.1.2 Анатомічна будова (мікроскопія)

Поперечні зрізи міжвузля стебла різних видів хвоща округлі і,відповідно з більш-менш виступаючими ребрами і втиснутийборозенками стебла. Центр стебла звичайно порожнистий і серцевина відсутня;що знаходиться навколо центральної порожнини однорядний пояс провідних пучківвідмежований ендодерми від корковою частини. У корковою частини стебла підепідермісом розташовується колленхіма суцільним або перерваним кільцем;найбільше вона розвинута у виступах. За колленхімой слід хлорофілоноснаяпаренхіма, яка найбільше розвинена під борозенками, що несуть продихи. Утаких паренхімних ділянках утворюються, шляхом розбіжності клітин аборозриву, великі повітроносні порожнини. Проти виступів ребер розташовуютьсяпровідні пучки. До периферії від пучковій порожнини розташована флоема. Центрстебла зайнятий великої повітроносні порожниною.

продихи мають надзвичайно своєрідну будову, характерне для всіхвидів хвоща. Супроводжуючі клітини їх забезпечені на внутрішній своєїповерхні ребрами, що виступають в порожнину клітини. На поверхневихпрепаратах видно ці ребра, променисто що розходяться навколо устьічной щілини. Зарозташуванню продихів розрізняють два типи: в одних видів супроводжуючі клітинирозташовані на рівні і в площині клітин епідермісу, в інших - вонизанурені. При занурених продихи велике поглиблення надсупроводжуючими клітинами частково перекрито виступаючим окременевшем краємзовнішніх стінок сусідніх епідермальних клітин, що залишають тільки посерединінеправильне отвір. Так утворюється велика повітроносні порожнину надпродихи, отвір якої і видно в першу чергу на поверхневихпрепаратах.

Види хвоща добре відрізняються між собою по контуру стебла, будовоюпаренхіми, ендодерми і типу продихів.

1.1.3 Географічне поширення

Хвощ польовий має космополітичний тип ареалу. Це самийпоширений вид хвоща, що росте майже по всюди, крім пустель,напівпустель, а також Крайньої Півночі. Південна межа хвоща йде від
Каспійського моря до Азовського, звідки повертає на схід, перетинає
Волгу у Волгограда і річку Урал і йде за межі країни [].

Хвощ польовий росте на луках, в ялинових, светлохвойних, липових,соснових, сосново-березових, березових і змішаних лісах. Віддає перевагузаплавні місця, береги річок, чагарникові зарості, узбіччя доріг, укосизалізничних насипів, піщані і глинисті кар'єри. Нерідко утворює наприрічкових мулистих пісках майже чисті зарості. Часто зустрічається в озимих таярових посівах і є трудноіскоренімим кореневищні бур'яном, вважаєтьсяіндикатором кислих грунтів [].

Хвощ болотний найбільш поширений на трав'янистих і мохових болотах,луках, прибережних заростях чагарників, за задернінням кам'яним розсипах іпокладів, лісосмузі, в Європейській частині заходить і в а Арктику, дезнайдений по північному узбережжі Кольського півострова, на Канин і на
Колгуеве, через Большеземельную тундру доходить до Полярного Уралу. Уарктичної Сибіру відсутня, і лише на крайньому сході знайдений в Анадирі.
На південь вид поширений до Чорного моря; поширений по всьому Кавказу.
Відсутній в нижньому Поволжі та в Криму; займає весь Сибір і весь
Далекий Схід [].

Хвощ лісовий поширений в лісах, чагарниках, на лісових ісубальпійських луках, кочкарних болотах.

Хвощ луговий зустрічається в Західному Сибіру, Тюменської області, в
Хакаський автономної області, Курганської області, Омської, Новосибірської,
Кемеровській областях. Частіше зустрічається в лісах, серед чагарниковихзаростей, на кам'янистих розсипах.

Хвощ зімующій росте в лісах, серед заплавних чагарників, налісових луках, стрімких берегах річок, струмків.

Хвощ можна зустріти в різних рослинних зонах і спільнотах, але вбудь-якому випадку біля води або в місцях з достатнім вмістом вологи в грунтіабо з відносно не глибоким заляганням грунтових вод.

Входячи до складу піонерних рослинних угруповань і захоплюючитериторії з порушеним природним рослинним покривом, хвощі нерідкоутворюють чисті або майже чисті зарості в тих місцях, де інші рослинине можуть жити, наприклад, через велику кількість води або, навпаки через їїнестачі в тих шарах грунту, де розташована коренева система цихрослин. Раз оселившись на який-небудь території, хвощі завдякинаявності глибоко залягають кореневищ, успішно протистоять такимнесприятливих впливів зовнішнього середовища, як посухи, лісові пожежі іт.п. і успішно конкурують з іншими рослинами, довго утримуючизахоплену територію. Поселяючись на місцях з порушеним рослиннимпокривом.

1.1.4 Хімічний склад рослин роду хвощ

Перші роботи з дослідження хімічного складу рослин сімействахвощевих з'явилося в 40-х роках XX століття. Ранні роботи мали розрізненийхарактер і стосувалися виділення і вивчення лише окремих з'єднань
(сапонінів, алкалоїдів, флавоноїдів) [].

Нахамура і Хукуті (1940) виділили з хвоща польового флавоноїдиеквізетрін, ізокверцетін і 5-глікозид лютеоніна []. Пізніше Харборн
(1967) і Салех (1972) отримав із сировини хвоща польового флавоноїдноїсполуки, похідні кемпферол і кверцетину [].

Ці ж сполуки були ідентифіковані чеськими вченими (1980) методомтонкошарової хроматографії і визначено їх кількісний вміст.
Порівняльне дослідження хімічного складу польських видів хвоща такожпоказало присутність флавоноїдів і фенолкарбонових кислот у всіх видах.

У нашій країні, в результаті хімічного дослідження свіжої травихвоща польового і його спороносні стебел, Сирчіной А.І. встановлено наявність
26 фенольних сполук, до складу яких входять флавоноїди, фенолокислоти,і похідні 1-інданона. Флавоноїдної з'єднання хвоща польовогопредставлені: флавононамі (нарінгенін), флавонолу (аромодендрін,таксіфолін, кемпферол, кверцетин), флавони (генхванін, лютеолін,апігенін, 6-хлорапігенін) [].

Цим же автором методом газорідинної хроматографії в хвощ польовийідентифіковані оксібензойние і оксікорічние кислоти: п-оксібензойная,протокатеховая, ваніліновий, галові, п-кумаровая, феруловая, кавова [
].

Вивчаючи рослини роду Eqisetum, з хвоща польового виділили сапонін --еквізетонін (до 5%), що розщеплюється при гідролізі на аглікон --еквізетогенін і фруктозу [].

Виявлено водорозчинні кислоти: аконітовая, арабіноновая, лимонна,фумарова, глюконовою, малоновий, фосфорна, хінна, треоновая.

Хвощ польовий є рекордсменом серед рослин за змістомкремнію. Так, у сухій речовині хвоща польового міститься 9% кремнезему, а взолі до 96%. У соку хвоща польового кремній виявлений в розчинній формікремнієвої кислоти, пов'язаної з органічними сполуками. Зі зростаннямрослини вміст кремнію зростає, досягаючи максимуму в кінцівегетації. Також в хвощ знайдені особливі ферменти - сілікази,сприяють перетворенню неорганічних сполук кремнію в органічні
[].

Хімічний склад алкалоїдів рослин сімейства хвощевих представлений уроботах К. Еугстера, Губанова І.А., Баньковський А.І. та ін Хвощ польовиймістить у вегетативних органах невелика кількість (до 0,26%) алкалоїдів
(нікотин, 3-метоксіпірідін і палюстрін), що є спільним для всіх видівхвощів [].

Також у траві хвоща польового виявлені гіркоти, дубильні речовини,смоли, 30-190мг% аскорбінової кислоти, 4.7мг% каротину, вітаміни групи В [
].

1.1.5 Застосування роду хвоща в народній і офіцинальними медицині

Препарати хвоща польового (настої і відвари) призначають яксечогінний засіб при застійних явищах серцевого походження
(пороки серця, серцева недостатність), а також при набряках, пов'язанихз легеневою недостатністю, при плевритах, з великою кількістю ексудата
[].

При захворюваннях сечовивідних шляхів і сечового міхура (пієлітах,цистити, уретрити), хвощ польовий використовується одночасно з мучниціабо іншими рослинами, які мають сечогінні та протизапальнівластивостями []. При нефриті і пієлонефриті застосування препаратупротипоказано, тому що вони можуть викликати подразнення нирок [].

Широко використовують траву хвоща польового при гемороїдальних, маткових,шлункових та інших кровотечах [].

Настій трави хвоща польового застосовується при водянці, туберкульозілегенів, кишкових інфекціях, кривавому поносі, для видалення каміння з нирок,при головних болях, аддісоновой хвороби, запалення сідничного нерва, приревматизмі і подагрі.

З огляду на здатність хвоща прискорювати виведення свинцю з організму, йогорекомендують при гострому та хронічному отруєнні свинцем.

Трава хвоща польового входить до складу протиастматичних мікстури попрописи Тарсакова, пасти''Фитолизин'', протидіабетичного збору
''Арфазетін''[].

Застосовують хвощ і для догляду за шкірою обличчя. При жирної і пористої шкірісерветки, змочені настоєм, накладають на обличчя. Настій трави хвощапольового входить до складу косметичних кремів''СОТ''і''Оленка''.

Також хвощ застосовується як протисвербіжну для лікування алергічнихдерматитів [].

У народній медицині застосовується не тільки хвощ польовий, але й іншівиди хвоща.

Хвощ зімующій використовується як сечогінний, в'яжучий,кровоспинний, болезаспокійливу, седативну, потогінний засіб;застосовується при туберкульозі легенів, при ревматизмі, головних болях, прижовтяниці, грижі, для лікування виразок, пухлин, запалень.

Хвощ лісовий теж використовується як в'яжучий і сечогінний засіб.

1.2 Нові протигрибкові препарати.

Інфекційні захворювання людини, що викликаються грибами, носять загальнийназва мікози. Етіологія, патогенез і клінічна картина мікозівнадзвичайно разнообразни, однак практично у всіх випадках цихзахворювань в патологічний коло втягується шкіра.

Переважна більшість патогенних і умовно-патогенних грибів викликаютьзахворювання тільки при наявності факторів, що знижують нормальнуфізіологічну захисну функцію шкіри і порушують резистентність організмупроти інфекції (особливо при імунодефіцитних станах). Кількість цихпричин останнім часом різко зросла (несприятливі екологічніфактори, збільшення кількості хворих із злоякісними хворобами,особливо імунної системи, широке використання медичних препаратівімуносупресивними що володіють властивостями: цитостатиків, гормонів,антибіотиків і т.д.)

Аміказол (Amycozolum) - 5% мазь і 2-5% пудра. Активний отнашеніідерматофітів і дрожеподобних грибів роду Candida.

Амфоглюкамін (Amphoglucaminum) - застосовується при локалізованих іглибоких мікозах.

Анкотіл (Ancotil) - випускається у вигляді таблеток (0,5) і розчину дляінфузій. Показання: системний кандидоз, криптококоз і хромобластомікоз;аспергільоз.

Антіфунгол (Antifungol) - активна речовина клотримазол. Випускається уформі мазі, вагінального крему і вагінальних таблеток.

Батрафен (Batrafen) - випускається у формі крему, розчину і пудри длязовнішнього застосування, лаку для нігтів і вагінального крему.

Гино-дактарін (Gino-dactarin) - вагінальні свічки по 0,1 г. Застосування:місцеве лікування вагінальних кандидозів і суперінфекції, викликанихгрампозитивними мікроорганізмами.

Гино-травоген (Gino-travogen) - кульки вагінальні по 0,6 м. Показання:грибкові інфекції піхви.

Дактозін (Daktozin) - комбінований препарат, що випускається у формімазі. Оснавное показання-лікування «пелюшкового» кандидозу у дітей.

Дифлюкан (Diflucan) - желатинові капсули по 0.05; 0.1; 0.15; 0.2; ірозчин для інфузій. Застосовується при лікуванні різних кандидозів і припрофілактики грибкових інфекцій у хворих із злоякіснимизахворюваннями, які схильні до таких інфекцій внаслідокхіміотерапії цитостатиками.

Ламізил (Lamisil) - протигрибковий препарат для перорального імісцевого застосування. Препарат має широкий спектр протигрибковоїдії.

Лоцеріл (Loceril) - лак для нігтів-5% по 5 мл, упаковка містить також
60 тампоном, змоченим 70% ізопропіловим спиртом в пакетиках з фольги, 10лопаточок, 30 пилок для нігтів. Крем 0,25% по 20 г в тубах. Застосування:мікози нігтів, стоп, гладкої шкіри.

Нізорал (Nizoral) - пігулки, крем, шампунь. Показання: грибковіінфекції шкіри, волосся, нігтів, статевих органів.

Орунгал (Orungal) - капсули по 0,1 г. Показання: захворювання шкіри іслизових оболонок, викликані чутливими до препарату грибами:кандидозний вульвовагініт, висівковий лишай, мікози, спричиненідерматофітами.

Толміцен (Tolmicen) - 1% паста, 1% лосьйон, 0,5% порошок. Показання:мікози гладкої шкіри, складок, стоп, висівковий лишай.

Еконазол (Econasol) - крем 1%, лосьйон 1% для зовнішнього застосування,аерозоль 1% для місцевого застосування. Має широкий спектр дії.

Висновок

Рослини роду хвощ - широко розповсюджена багаторічна дикорослатрав'яниста рослина, здавна використовуються як в народній так і вофіцинальними медицині.

Виділено і вивчено основні біологічно активні речовини трави хвощапольового: фенольні сполуки, органічні сполуки кремнію і сапоніни.

Широке використання засобів на основі біологічно-активних речовинхвоща в народній медицині спонукало нас вивчити його інші види активності,чому присвячена експериментальна частина роботи.

Глава II. Матеріали, методи і апаратура

1. Об'єктом вивчення служила надземна частина (трава) хвоща, зібрана в середині літа в 1996-1998 р. на території Томської області, сушіння сировини повітряно-тіньова.

2. Як здобувачів при отриманні екстрактів використовувалися: вода очищена, етанол 70%, 40%, 20%, хлороформ, ацетон.
2. Для хроматографії застосовували папір хроматографічних Ленінградську марки «М» у системі ацетон: бутанол: вода (7:2:1).
3. Апаратура:
1 Спектрофотометр «Спектроскан»;
2 Сушильна шафа;
3 Термостат ТС-80 МУ42;
4 Перколятори лабораторні.
5. Якісний аналіз вмісту різних груп природних сполук.

5.1 Виявлення алкалоїдів.

Для виявлення алкалоїдів в досліджуваному рослинній сировині, готуваликисле витяг: 5,0 г сировини заливали 50мл 1% розчином хлорноводороднойкислоти і залишали на ніч. Витяг фільтрували і визначали в ньомуалкалоїди за допомогою общеосадітельних реактивів:

1. реактив Драгендорфа;

2. реактив Фред;

3. реактив Вагнера;

4. 1% розчин пікринової кислоти;

5. 1% розчин кремнієво-вольфрамова кислота;

6. 1% розчин фосфорно-вольфрамової кислоти;

7. 1% розчин фосфорно-молібденової кислоти.

2. Виявлення флавоноїдів.

Для якісного виявлення флавоноїдів проводили ціанідіновую пробу
(проба Синоду).

1,0 г сировини заливалися 10 мл 96% етанолу та нагрівалися на водяній банідо кипіння. Колба стріпувала кілька разів, закривалася пробкою ізалишалася на 3-4 години. Спиртове витяг зливали і концентрували до
2-х мл, до нього додавали 5-7 крапель концентрованої хлорноводороднойкислоти і 10 мг металевого цинку.

3 Виявлення дубильних речовин

Приготування вилучення: 1 г подрібненої рослинної сировинизаливали 100 мл води. Нагрівали на водяній бані 20-30 хв, проціджуваличерез вату і отримане витяг використовували для проведення якіснихреакцій.

1 До 2-3 мл вилучення додавали кілька крапель розчину железоаммоніевих квасцов у разі гідролізуемих дубильних речовин з'являється чорно-синє фарбування або осад, а конденсованих-чорно-зелене забарвлення або осад. < p> 2 До 1 мл вилучення додавали 2 мл розчину 10% оцтової кислоти і 1 мл розчину 10% середньої солі ацетату свинцю. При наявності конденсованих дубильних речовин фільтрат забарвиться в чорно-зелений колір від додавання 5 крапель 1%-них железоаммоніевих квасцов і 0,1 г ацетату свинцю.

4 Виявлення сапонінів.

Приготування витягу . Готували водний настій 1:10, нагріваючиподрібнена сировина на водяній бані протягом 10 хв. Настій післяохолодження фільтрують і проводять з ним реакції.

Реакція піноутворення. Беруть дві пробірки, в одну доливають 5 мл 0,1моль/л хлорноводородной кислоти, а в іншу-5мл 0,1 моль/л гідроксидунатрію. Потім в обидві пробірки додають по 2-3 краплі вилучення аборозчинів сапонінів і сильно струшували. За наявності в сировині тритерпеновихсапонінів в обох пробірках утворюється стійка піна.

5 Виявлення аліфатичних кислот.

1 щавлевої кислоти.

До 2 мл водного витягу додали 4 краплі розчину кальцію сульфатунасиченого, у результаті має утворитися осад розчинний в солянійкислоті і не розчинний у оцтової кислоти.

2 Янтарна кислота.

До 1 мл вилучення додати кілька кристалів резорцину, потім постінці пробірки додати 0,5 мл концентрованої сірчаної кислоти, охолодитиі додати 0,5 мл 10% розчину гідроксиду амонію, повинна з'явитися зеленафлуоресценція.

3 Лимонна кислота.

1 мл вилучення помістити в випарітельную чашку, додати кількакристалів ваніліну і випарувати насухо. До залишку додати 2-3 краплі конц.сірчаної кислоти, нагріти на водяній бані до появи фіолетовогофарбування.

4 Яблучна кислота.

До 2 мл екстракту додати 0,1 (-нафтол і 1каплю конц. сірчаної кислоти.
Опустити пробірку на 1/2 хв у киплячу водяну баню повинна з'явитися яскраво -жовта з зеленим флуоресценція.

5 Винна кислота.

4 краплі водного екстракту випарувати насухо у порцеляновій чашці, додати
1 мл конц. сірчаної кислоти і декількома кристалами резорцину, нагрітина водяній бані до появи вишнево-червоного фарбування.

6 Виявлення полісахаридів.

До 8,0 сировини додали 260 мл води, потім збовтувати протягом 1 години,залишили на одну добу на холоді, злили з сировини вилучення та профільтруватийого. У фільтраті облягали водорозчинні полісахариди (попередньоупарів фільтрат до1/3) 2-х кратним об'ємом 96% етанолу (фр.А).

Залишилося сировину обробили 100 мл киплячою водою очищеною з 0,4 млконц. хлорноводородной кислотою і 30 хв витримали на киплячій водяній бані.
Потім у фільтраті облягали пектинові речовини 2-х кратним об'ємом 96%етанолу (фр. Б).

Сировина обробляли 10% розчином гідроксиду натрію, залишали надобу, потім фільтрували і в фільтраті облягали полісахариди 50% оцтовоїкислотою (фр. В).

Кожну фракцію окремо фільтрувати на воронці Бюхнера. Опадисушили при температурі +90 (С до постійної маси.

Далі проводили кислотний гідроліз. Точну навіску (0,1) кожної фракціїпоміщали в ампули, додавали в кожну по 5 мл 10% розчину сірчаної кислоти.
Ампули запаюють і нагрівали при температурі +105 (С протягом 3-х годин.
Ампули охолоджували і вміст кількісно переносили у мірну колбу на 25мл, обсяг доводілім до мітки водою (розчин А).

10 мл гідролізату (розчину А) розбавити 5 мл води і нейтралізувалипорошком карбонату барію за універсальною індикаторної папері. Розчинфільтрували через паперовий фільтр, промив водою. Отриманий фільтратупарюють до об'єму 0,5 мл (розчин Б).

На хроматографічних папір Ленінградської фабрики марки «М» наносимо
0,02 мл упаренного фільтрату і стандартні зразки цукрів,хроматографіровалі висхідним методом в системі ацетон: бутанол: вода
(7:2:1).

Висушену хроматограм обробляли анілінфітолатом і сушили всушильній шафі при температурі +105 (С до появи плям.

Нейтральні цукру:

- глюкоза Rf-0.15;

- галактоза Rf-0.12;

- арабиноза Rf-0.24;

- ксилоза Rf-0.27;

- Рамноза Rf-0.4.

Приготування анілінфітолата:

0,93 сірчанокислого аніліну

1,66 фталевої кислоти

100 мл водонасиченого бутанолу.

7 Виявлення кремнію

Для ідентифікації сполук кремнію проводити якісну реакціюутворення жовтого і синього кремнемолібденового комплексу з молібдатиамонію в кислому середовищі. Як відновлювача використовували аскорбіновукислоту.

Для цього 1,0 г подрібненої сировини спалювали в фарфоровому тиглі наелектричній плитці і прожарюють в муфельній печі. Потім попілобробляли 1% розчином хлороводородной кислоти, фільтрували, осад нафільтрі промивали 1% розчином хлороводородной кислоти і розчиняли в 5%розчині гідроксиду калію. З розчином силікату калію проводили реакцію з
10% подкисленным розчином молібдати амонію, приготованого наступнимчином: до 90 мл 11% розчину молібдати амонію додавали 10 мл 50%розчину сірчаної кислоти.

До 1 мл отриманого розчину силікату калію додавали 2 мл 10%підкисленою розчину молібдати амонію, повинно утворитися жовтефарбування, при додаванні декількох кристалів аскорбінової кислотижовте забарвлення повинна переходити в інтенсивно синій колір.

8 Виявлення ефірних олій.

Використовувався метод перегонки водяною парою. Навіску подрібненогосировини поміщають в шірокогорлую круглодонні колбу місткістю 700-800 мл,доливають 300 мл води і закривають гумовою пробкою з зворотнимхолодильником. У пробці знизу зміцнюються металеві гачки, на якіза допомогою тонкої дроту підвішують градуйований приймач так, щобкінець холодильника знаходився точно над воронкоподібним розширеннямприймача, не торкаючись його. Колбу з вмістом нагрівають до кипіння і слабокип'ятять.

Пари води та ефірної олії конденсуються в холодильнику і рідинастікає в приймач. Масло відстоюють у градуйованому коліні приймача, авода через меншу коліно приймача втекти назад в колбу.

9 Виявлення Культивують лактоном.

50 мл водного витягу (1:10) поміщали в ділильні воронку,додавали 10 мл хлороформу і обережно збовтувати, потім хлороформноевитяг зливали в колбу. До цього ж водного вилученню додавали свіжупорцію хлороформу, другий витяг поєднували з перших. Потім хлороформвідганяли під тягою до отримання «Смолки».

ІЧ-спектр знімали на спектрофотометрі «Specord UR» з призмами Li F і
NaCl у таблетках KBr висотою 1 мм при співвідношенні речовин, наповнювача
1:400 і в плівці.

6. Кількісне визначення флавоноїдів

Близько 1,0 г сировини поміщали в колбу з притертою пробкою на 50 мл,заливали 20 мл 90% етанолу з вмістом 2%-тов концентрованоїхлороводородной кислоти, екстрагованих із зворотним холодильником на киплячійводяній бані і декантіровалі в мірну колбу на 50 мл. Витяг повторювалище двічі, заливаючи по 10 мл 90% підкисленою етанолу. Об'єднаневитяг доводять до позначки 90% етанолом.

0,2 мл екстракту наносили на смужку хроматографічне паперу розміром
45 (15 см і хроматографіровалі в системі 0,1 М хлороводородной кислоти.
Хроматограм висушували, в УФ-світлі відзначали плями флавоноїдів, вирізали іелюіровалі 96% етанолом три рази по 10, 5 і 5 мл в колбі спрітертой пробкоюіз зворотним холодильником на водяній бані. Отримане витяг флавоноїдівзливали в мірну колбу на 25 мл, доводили до позначки 96% етанолом і знімалиоптичну щільність елюятов за допомогою спектрофотометра з товщиною шару 1см при довжині хвилі 353нм.

Суму флавоноїдів перераховували на кверцетин (Е = 387,5) поформуле:

C = Д * У1 * К * У2 * 100/(Е * I * М * (100-В) * У3, де

Д-оптична щільність

У1-обсяг першого витягу, мл (50 мл)

У2 - обсяг другу витягу, мл (25мл)

У3-обсяг, що пішов на хроматографірованіе, мл (0,2 мл)

Е-питомий показник поглинання

М - маса наважки, г

По-вологість сировини,%

I-товщина шару, см

К-поправочний коефіцієнт на неповне елюювання з паперу (1, 15)

7. Кількісне визначення сполук кремнію

У попередньо пропечений фарфоровий тігльпомещалі близько 1,0 гсировини, спалювали і прожарюють в муфельній печі при температурі не вище 560 -
650 (С до постійної маси (3-5 годин).

Після охолодження золу кількісно переносили в стакан ємністю 150мл, додавали 50 мл 5% розчину хлороводородной кислоти і нагрівали накиплячій водяній бані протягом 20 хв. Отриманий розчин фільтруватичерез пухкий беззольний фільтр, осад промивали 1% розчиномхлороводородной кислоти.

Фільтр з осадом переносили в конічну колбу на 150 мл, додавали 50мл 5% розчину гідроксиду калію, потім прикривши годинниковим склом, нагрівалидо кипіння і кмпятілі протягом 20 хв (колбу перед нагріванням зважили).
Після охолодження вміст колби доводили до первісної маси 5%розчином гідроксиду калію.

1 мл отриманого фільтрату поміщали в мірну колбу на 25 мл, додавали
2 мл 5% розчину сірчаної кислоти, доводили водою до позначки. Через 15 хввизначали оптичну щільність за допомогою фотоелектроколориметр в кюветі зтовщиною шару 10 мм при довжині хвилі 400 нм, використовуючи як розчинусравнеія фільтрат без додавання реактивів.

8. Методика визначення екстрактивних речовин.

20 г сировини подрібнювали та просівали крізь сито з отворами діаметром
1мм, поміщали в конічну колбу приплив розчинника до «дзеркала». Колбузакривали пробкою, зважували і залишали на 16 годин. Потім вмістретельно збовтувати та фільтрували через сухий фільтр у суху колбу.
Фільтрат переносили у фарфоровий чашку діаметром 7-9 см, попередньовисушену при t (+100 (C до постійної маси і зважену нааналітичних терезах. Фільтрат випарюють на водяній бані насухо, і сушатьпри t (100-105 (С протягом 3 годин, охолоджували в ексікаторе і зважували.

9. Визначення мікроелементного складу.

Для визначення мінерального складу трави хвоща використовувався рентгено -флуоресцентне метод.

У чашку (тиглі) беруть навіску подрібненого продукту (проби зважуютьз похибкою не більше + 0,01 г), поміщають в сушильний шафу і висушуютьпри температурі близько +105 (С.

Вміст чаші змочують 2-3 мл 32% розчином азотної кислоти інагрівають на водяній бані до припинення виділення пари. Обробку азотноїкислотою повторюють ще двічі. Потім чашу поміщають на електроплитку іпроводять обвуглювання до припинення виділення диму, потім чашу переносять уелектропіч при температурі близько +250 (С. Мінералізація проводять,поступово підвищуючи температуру електропечі на 50 (С через кожні 30 хв і,довівши її до температури +450 (С, продовжують мінералізацію за цих умовдо отримання золи. Чашу із золою витягують з електропечі, охолоджують докімнатної температури і змочують золу 0,5-1,0 мл 32% розчином азотноїкислоти. Потім кислоту насухо випарюють на електроплитці зі слабкимнагріванням і знову поміщають чашу з пробою в електропіч при температурі,поступово доводячи температуру до 450 (С і витримують 1 годину. Мінералізаціявважають закінченою, коли зола стане білого або злегка забарвленого ц?? ета,без обвуглених частинок. За наявності обвуглених часток повторюють обробкузоли розчином азотної кислоти або водою.

У чашу з золою додають 10 мл 32% розчину азотної кислоти, нагріваютьна електроплитці зі слабким нагріванням до появи запахів азоту. Вмістчаші фільтрують в стакан через фільтр "біла стрічка». Ретельно обполіскуютьчашу водою очищеною, фільтруючи змив чаші в ту ж склянку. У фільтрат,що містить важкі метали додають азотнокислий цирконію, нагрівають,фільтрують. Отриманий осад аналізують на приладі спектрометрі
«Спектроскан».

10. Дослідження антигрибковий активності

З метою вивчення антигрибкових властивостей БАР хвоща польового повітряно -суху сировину подрібнювали до розміру частинок 2-5 мм, заливали до «дзеркала»екстрагентів (вода очищена, етиловий спирт 70%, бутанол, хлороформ, ефір)наполягали на протязі 16 годин, фільтрували і отримані екстрактивисушували в струмені повітря, нагрітого до +30 (С.

антигрибкові властивості отриманих екстрактів досліджували методомдворазових серійних розведень в рідкому середовищі Сабуро за методикою Вічкановой
С.А.. Склад середовища Сабуро:

- 10,0 пептони,

- 40,0 мальтози,

- води очищеної до 1 л.

В якості тест-культури використовували штами Aspergillus niger
163/3685, Candida albicans 4337, Trichophiton rubrum ВКПГ248/700, T.
Mentagrophytes var. Interdigitale ВКПГ 268, Microsporum canis ВКПГ 326/316,які були отримані у відділі мікології центрального шкірно -венерологічного інституту Міністерства охорони здоров'я Росії м. Москва.

Підготовка грибів-дерматофітів до досвіду, посів і їх облік проводили заметоду Г.М. Першина. Для посіву використовували суспензії як правило,добової агарового культури дріжджів, культури цвілевий гриба 4-5 добові,інших дерматофітів 7-10 добові. Суспензії грибів готували вфізіологічному розчині по оптичному стандарту каламутності.

Після додаткових розведень стандартного розчину мікробнанавантаження патогенних грибів становила 1000 грибкових тіл в 1 мл середовища.
Посіви інкубувати в термостаті, дріжджі при 37 (С, решта при 33 (С.

Облік культури дріжджів проводили через 24 години, інші культури на 7-10добу. Гранична доза препарату випробувана нами, відповідала 1000мкг/мл. Повторність кожного досвіду 4-6 кратна. Контролем служили пробірки зживильним середовищем, засіяні аналогічним кількість тест-культури, а такожпробірки з середовищем і препарати без культури (для перевірки каламутності іосадження препарату).

За критерій антигрибковий активності препарату бралифунгістатичною титр, який оцінювали в мікрограмів на 1 мл (мкг/мл)живильного середовища. За фунгістатичною титр брали граничнуконцентрацію препарату в середовищі, при якій був відсутній видимий зростаннякультури в умовах оптимальної темпіратури і заданої мікробної навантаження.

Глава III Перспективність використання роду хвоща для отримання лікарських препаратів

1 Перспективність використання роду хвоща для отримання лікарських препаратів.

Як у нашій країні так і за кордоном відомо сечогінну дію хвощапольового. Нами було