Актуальність теми. Вірусні гепатити, не дивлячись на певні успіхи у вивченні етіології, патогенезу, клініки і терапії, залишаються проблемою, далекою від свого рішення (Дунаєвський О.А., 1993. Подимова З Д, 1993, Учайкин В Ф та ін, 1994; Сорінсон З Н, 1996, Alberti A et al, 1991; Barbara JA, 1994)

Необхідність подальшого вивчення різних сторін патогенезу вірусних гепатитів виникає внаслідок розробки нових методів дослідження і можливості верифікації гепатитів, раніше розцінювати. як "ні О. ні В" (мукомели з Л та ін, 1992, Рахманова А Г и др, 1995, Хазанов А І, 1996; Krogsgaard До et al. 1990, Chang WY et al, 1992)

Поряд з моноінфекціямі, в результаті спільних шляхів і механізмів зараження, а також строго тіпоспеціфіческого характеру імунітету, останнім часом спостерігається збільшення частоти ко-і суперінфіцірованія декількома вірусами з розвитком мікст-гепатитів В більшій мірі це відноситься до вірусних гепатитів з парентеральним механізмом зараження (Соболевська О Л. 1995. Румянцев О.М. та ін, 1996, Шувалова ЄП. Антонова Т.В. 1996, Zeidis YB et al, 1992, Liaw G.-F., 1995, Goranova Q et all, 1996) < p> Однією з причин розвитку затяжного перебігу вірусного гепатиту вважають неповноцінність у відповідь реакції організму у зв'язку з порушенням функціонування імунної системи (Сорінсон З Н. та ін. 1992. Шамшура О Л, Фролов А. В., 1994. Баширова Д К. 1996, Собчак Д . М., Деречінская Е Л, 1996, Popper Н., Paronetto F. 1984: Paterlim P et al. 1993, Manns MP, 1996).

Велике значення у патогенезі різних захворювань надається структурно-метаболічному; станом імунокомпетентних клітин (ВКК), від якого залежить функціонування імунної системи в цілому (Ляшенко Юї, 1988, 1992, Paronetto F, 1986. Bianchi FB, 1992. Schirmacher P et al. 1993 ) і, як наслідок, перебіг інфекційного процесу. Однією з можливих причин неспроможності лімфоцитів може з'явитися посилення процесів вільнорадикального окислення в їх мембранах і порушення його регуляції (Афоніна Г Б, Бордонос В Г, 1990, Пастушенко В А та ін, 1993, Матвейков Г П та ін 1994, Devi MA. Das NP, 1994, Cardier YE et al, 1995), а також зміна внутрішньоклітинного метаболізму, що приводить до порушення дозрівання, диференціювання і функціонування ВКК (Робінсон М.В, 1986, 1994, Миколаїв А І та ін, 1989. Габріловіч Д І и др . 1991, Гольтяпін Д Б. 1995, Huang З M et al, 1988, LosaGA., 1989)

Вищевикладене стало підставою для вибору напрямку наших досліджень

Мета дослідження: Оцінити патогенетичне значення функціонально-метаболічного стану лімфоцитів і їх мембран при вірусних гепатитах різної етіології, розробити на цій основі додаткові критерії оцінки тяжкості та прогнозування перебігу захворювання.

Завдання дослідження:

1. Вивчити стан процесів ліпопероксидації у мембранах лімфоцитів і в плазмі крові за рівнем малонового діальдегіду в динаміці вірусних гепатитів різної етіології.

2. Вивчити стан антиоксидантного захисту в лімфоцитах за рівнем активності її основного ферменту - супероксиддисмутази і Біосинтетичними активність клітин при вірусних гепатитах.

3. Визначити стан внутрішньоклітинного метаболізму лімфоцитів щодо зміни активності провідних ферментів основних обмінних циклів (СДГ, ЛДГ, альфа-ГФДГ, НАД-і НАДФ-оксидази) при гострому вірусному гепатиті В (ОВГВ) і гепатиті В + С.

4. Визначити характер імунологічних зрушень при ОВГВ станом Т-, В-клітинної ланки імунітету і неспецифічної резистентності.

5. Оцінити клінічне та патогенетичне значення стану лімфоцитів в периферичній крові і розробити додаткові критерії оцінки тяжкості та прогнозування перебігу вірусних гепатитів.

Основні положення, які виносяться на захист . У роботі обгрунтовується положення про закономірний посилення перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) мембран лімфоцитів, що відповідає періоду і формі тяжкості вірусних гепатитів. Зміна рівня малонового діальдегіду (МДА) у лімфоцитах має кількісні відмінності і різноспрямований характер у динаміці захворювання при гепатитах різної етіології.

Обговорюється положення про те, що додатковим фактором. що впливає на функціонування імунокомпетентних клітин (ВКК) при вірусних гепатитах, є змінене внутрішньоклітинний метаболічне стан лімфоцитів, що оцінюється по активності ключових ферментів основних обмінних циклів та утримання РНК. ДНК і ПДН,

Стан процесів ПОЛ та метаболізм лімфоцитів мають важливе патогенетичне значення, що обгрунтовує значення їх показників для оцінки тяжкості та прогнозування перебігу вірусних гепатитів.

Наукова новизна роботи. Вперше виявлені переважно однотипні зміни метаболічних процесів та функціонування імунокомпетентних клітин при ОВГВ і ВГВ + С.

Отримані нові дані про залежність інтенсивності ПОЛ в мембранах лімфоцитів і активності СОД від етіології гепатиту. Так, при легкій формі ВГС рівень МДА лімфоцитів у розпал захворювання не підвищувався і був істотно нижчим, ніж при ОВГВ і ВГВ + С. Якщо при циклічної формі ОВГВ спостерігалося компенсаторне посилення активності СОД до періоду реконвалесценції, то у хворих на гепатит В + С показник залишався стабільним протягом захворювання.

Інтенсивність ПОЛ та активність СОД лімфоцитів відповідали тяжкості та періоду вірусного гепатиту.

Вперше виявлено достовірне збільшення ендонуклеоліза хроматину лімфоцитів при ОВГВ і посилення Біосинтетичними активності клітин незалежно від тяжкості та періоду захворювання.

Практична цінність роботи. Виявлені закономірності зміни показників МДА, активності СОД лімфоцитів при вірусних гепатитах у залежності від тяжкості та періоду захворювання, обгрунтовують їх прогностичне значення, а також можливість використання їх визначення для оцінки тяжкості захворювання та повноти одужання.

Апробація роботи. Основні положення роботи були докладені на засіданні Санкт-Петербурзького відділення Всеросійського наукового товариства інфекціоністів (1997). представлені на 1. 2 і 3 Всеросійській тижня гастроентерологів (1995, 1996. 1997).

По темі дисертації опубліковано 5 робіт.

Шляхи реалізації роботи. Результати дослідження впроваджені в практику роботи Науково-дослідного інституту дитячих інфекцій (м. Санкт-Петербург) та інфекційного відділення в/ч 22412 ЛенВО, а також у навчальному процесі на кафедрі інфекційних хвороб та епідеміології СПбГМУ ім. акад. І.П. Павлова.

Обсяг і структура дисертації. Дисертація складається з вступу, 5 глав, заключення, висновків і практичних рекомендацій. Робота викладена на 167 сторінках машинопису, з них 132 сторінки основного тексту, містить 23 таблиці та 12 малюнків, забезпечена покажчиком літератури, що включає 182 вітчизняних та 139 іноземних джерел.

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Під наглядом перебували 166 хворих вірусними гепатитами: 137 чоловіків і 29 жінок. Вік 86,2% обстежених не перевищував 30 років. У результаті серологічної верифікації ВГ у 99 хворих встановлено діагноз ОВГВ, у 11 - ВГС, 56 хворих мали одночасно маркери ОВГВ і антитіла до HCV (ВГВ + С).

Оцінка форми тяжкості вірусних гепатитів проводилася за загальноприйнятими критеріями. Легка форма захворювання діагностовано у 23 хворих ОВГВ, у тому числі в 4 випадках - безжовтяничну, середньої важкості - у 58. важка - у 18 хворих. У 4 випадках захворювання ускладнилося розвитком гострої печінкової недостатності (ГНН). У 3 з цих хворих спостерігалося прогресуюче перебіг захворювання, розвиток печінкової коми з летальним результатом.

Гепатит В + С в легкій формі переносили 29 хворих, в тому числі в 3 випадках - безжовтяничну, середньої тяжкості - 21 хворий, важку - 6 хворих. У 3 випадках важкий перебіг захворювання ускладнилося розвитком гострої ниркової недостатності, в одному з них - печінковою комою і легальним результатом.

Всі 11 хворих ВГС переносили захворювання у легкій формі, безжовтяничну - у 4 випадках.

Одночасно із загальноприйнятим клініко-лабораторним обстеженням в динаміці захворювання у 94 хворих вивчали стан процесів ПОЛ мембран за рівнем малонового діальдегіду (МДА) у лімфоцитах і в плазмі крові в тесті з тіобарбітуровой кислотою (Андрєєва Л.И, и др., 1988; Пастушенко в . Л. та ін, 1993). Стан системи антиоксидантного захисту в лімфоцитах оцінювали за ступенем активності супероксиддисмутази (СОД) методом Fndovich J. (1989). Функціонально-метаболічної активності лімфоцитів вивчали за активністю ключових ферментів основних обмінних циклів, сукцинатдегідрогеназа (СДГ), лактатдегідрогеназа (ЛДГ), альфа-гліцерофосфатдегідрогеназа (альфа-ГФДГ) в цитозольних і мітохондріальної ізоформах. НАД-оксидаза і НАДФ-оксидаза методом С. Loida (1982).

Біосинтетичними активність лімфоцитів оцінювали за величиною коефіцієнта (альфа (К-альфа,), що відображає співвідношення РНК/ДНК в методі люмінесцентного мікроспектрального аналізу (Карнаухов В Н., 1978) Виразність ендонуклеоліза ядерного хроматину характеризували за рівнем продуктів деградації нуклеотидів (ПДН), що є маркером даного процесу методом Іванніков В П. та ін (198б).

Для оцінки імунного статусу 30 хворих ОВГВ досліджували показники клітинного, гуморального імунітету і неспецифічної резистентності. Імунологічні дослідження проводилися на базі НДЛ СНІД та інфекційних захворювань у ЗС РФ (ВМА) під керівництвом д.м.н Є.І. Змушко - начальника лабораторії.

Клініко-біохімічні та імунологічні обстеження хворих ВГ проводили двічі - в періоди розпалу захворювання і ранньої реконвалесцснціі. Отримані дані порівнювали з результатами обстеження 25 здорових донорів і піддали варіаційно-статистичній обробці у відповідності із загальноприйнятими методами.

РЕЗУЛЬТАТИ ВЛАСНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ

У переважної більшості хворих ОВГВ вже з перших днів жовтяничного періоду виявлено значне посилення процесів ліпопероксидації мембран лімфоцитів, про що свідчило достовірне підвищення рівня МДА Так. при нормі МДА в лімфоцитах (МДАл) 1,10 ± 0,02 нмоль/2х106 кл. показник був збільшений при легкій формі в 1.4 рази (1.54 ± 0,04 нмоль/2х106. Р <0.001). при середній тяжкості - в 1,5 рази (1,63 ± 0,05 нмоль/2х106 кл, Р <0,001), при важкій-в 1,6-1,8 рази 1,89 ± 0,12 нмоль/2х 106 кл, Р <0,001).

Рівень МДА в плазмі крові (МДАпл) змінювався узгоджено з показниками МДАл і перевищував показники здорових осіб в 2,9-3,1 рази при легкій формі (38,9 ± 2,27 нмоль/мл, норма - 12,6 ± 0, 52 нмоль/мл, Р <0,001). в 4,2-4,6 рази при середньої тяжкості (55,5 ± 4,29 нмоль/мл, Р <0,001) і в 7,2-8,0 рази при важкій формі ОВГВ (96,5 ± 8,88 нмоль/мл, Р <0,001). Таким чином, ступінь підвищення рівня МДА відповідала формі важкості захворювання і мала достовірні відмінності показника в плазмі крові в залежності від вираженості патологічного процесу при всіх формах тяжкості ВГ Зміст МДАл мало достовірні відмінності у хворих середньої тяжкості і тяжкою формою захворювання

Виявлене нами підвищення кількості продуктів ПОЛ в плазмі крові відображає ступінь вільнорадикального пошкодження мембран гепатоцитів. що є загальновизнаним механізмом, що обумовлює прояви основних синдромів ОВГ (цитолітичним, інтоксикаційний і синдром жовтяниці) (Дудник Л.Б,. 1988; Антонова Т.В. та ін 1991, Пак З Г., Нікітін Е.В, 1991; Левина Л.Д та ін, 1992).

Функціонування ВКК при розвитку імунної відповіді супроводжується активацією процесів ПОЛ в мембранах лімфоцитів (Ляшенко В.О. та ін, 1988) і визначає їх стан та ефективність імунологічного захисту (Іванова У В. та ін. 1986; Лебедєв К А, Понякіна І . Д. 1986; Афоніна Г.Б., Бордонос У М., 1990). Виявлена кореляція рівня МДАч з формою тяжкості ОВГВ відображає посилення процесів ліпопероксидації в мембранах лімфоцитів, відповідне напруженості імунної відповіді.

У міру купірування патологічного процесу спостерігалося зниження МДАл і МДАпл у всіх обстежених групах, за винятком групи хворих середньої тяжкості, де відзначено незначне збільшення середнього рівня МДАл.

Хоча середні значення МДАл і МДАпл в період ранньої реконвалес-ценціі виявилися достовірно вище контрольних значень, в динаміці ОВГВ спостерігалася явна тенденція до їх нормалізації, найбільш демонстративна при важкій формі (зниження вмісту МДАл при легкій формі від 1,54 ± 0,04 до 1 , 46 ± 0,08 нмоль/2х106кл; при важкій формі - від 1,89 ± 0.12 до 1,55 ± 0,09 нмоль/2х106 кл; в плазмі крові - при легкій формі від 38,9 ± 2,27 до 21 , 4 ± 3,96 нмоль/мл; при середній тяжкості - від 55.5 ± 4,29 до 34.4 ± 3,95 нмоль/мл; при важкій формі - від 96,5 ± 8,88 до 26,2 ± 3,62 нмоль/мл).

У групі хворих середньої тяжкості ВГВ середнє значення рівня МДАт в динаміці захворювання мало тенденцію до підвищення (від 1,6310.05 до 1,68 ± 0,08 нмодь/2х106 кл) і було пов'язане з тим. що у 31,8% хворих спостерігалося збільшення показника після курсу Алок, який застосовувався в якості додаткового методу еферентної терапії у пацієнтів з відхиленнями у нормальному перебігу відновного періоду (тривала гіперферментемії і антигенемії), розцінюємо багатьма авторами як критерії затяжної реконвалесценції (Сорінсон С.Н ., 1987, 1996, Угрюмова Б.Л. 1941; Шамшура ОЛ. Фролов А.В., 1994). Результати вивчення вмісту МДА в лімфоцитах в цій групі хворих значно перевищували середні (2,02 +0,11 проти 1,68 +0,08 нмоль/2х106 кл, Р <0,05).

Попри те, що багато авторів вказують на посилення патологічного процесу і. як наслідок, більшу вираженість функціональних порушень печінки і тяжкість клінічних проявів при розвитку вірусних гепатитів змішаної етіології, зокрема В + С, ми не виявили суттєвих відмінностей рівня МДАл і МДАпл протягом ОВГВ і гепатиту В + С при всіх формах важкості Отримані нами дані свідчать про підвищення, в порівнянні з показниками здорових осіб. рівня МДАл в розпал легкої форми гепатиту В + С у 1.4-1.5 рази (1,60 +0,05 нмоль/2х106 кл, Р <0.001), в 1,6 рази при середньої тяжкості (1,72 +0,05 нмоль/2 * 106 кл. Р <0,001), в 1.6-1,8 рази при важкій формі (1,88 +0,14 нмоль/2х106кл, P <0,001),

Зміст МДАпл змінювалися аналогічно показнику в лімфоцитах і відповідали формі важкості, при легкій формі - у 2,8-3,3 рази (38,9 ± 4.90 нмоль/мл. Р <0.001). при середній тяжкості - в 4,1-4,9 рази (57,4 ± 7,23 нмоль/мл, Р <0.001). при важкій формі - у 5,8-7,3 рази (83.1 ± 12,5 нмоль/мл. Р <0.001).

У період згасання основних клініко-біохімічних проявів гепатиту В + С відзначалося зниження вмісту МДАл і МДАпл, за винятком групи хворих легкою формою, де виявлена тенденція до підвищення середнього рівня МДАл (до 1,63 +0,12 нмоль/2х106 кл), що пов'язано з тим, що в цій групі 25% хворих обстежені після курсу Алок, результати обстеження яких достовірно перевищували середні у групі (2,46 +0.23 нмоль/2х106 кл, Р <0.02).

Достовірний зниження МДАл в динаміці гепатиту В + С виявлено при середній тяжкості (до 1.39 +0,11 нмоль/2х106 кл. Р <0.05). У плазмі крові вміст МДА в процесі розвитку захворювання достовірно знижувався при всіх формах важкості (легка форма - до 24,5 ± 4,43 нмоль/мл, Р <0,05, форма середньої тяжкості - до 24,8 ± 5,45 нмоль/мл, Р <0.01; важка форма-до 39,8 ± 4,18 нмоль/мл, Р <0,01) і в реконвалесценцію суттєво відрізнялося від показників здорових осіб лише при важкій формі захворювання.

Схожі результати активності ПОЛ при ОВГВ і гепатиті В + С свідчать про близькість механізмів патогенезу, що пов'язано з єдністю шляхів і механізмів зараження і. можливо, визначальним значенням вірусу В на стан лімфоцитів В той же час, згідно з літературними даними, при гепатиті В + С вірус гепатиту С пригнічує реплікацію HBV, що впливає на перебіг мікстінфекціі (Корочкін О.В, Соболевська О.Л.. 1996; Румянцев О.М. та ін 1996). З метою виявлення можливої залежності етіології вірусних гепатитів і ступеня активності процесів ПОЛ ми провели порівняльний аналіз рівня МДАл і МДАпл в групі хворих легкою формою ОВГВ, ВГС, ВГВ + С, Вибір даної групи обумовлений тим, що, по-перше. ОВДП в більшості випадків протікає в легенях, безжовтяничну формах, а по-друге, після легких форм ВГ, при яких, як правило, спостерігається слабка імунна відповідь, частіше розвиваються затяжні та хронічні форми захворювання (Редечкіна С.І. та ін, 1 -- 992; Сорінсон С.Н. та ін, 1996; Хазанов А І,, 1996, Lai M. et al, 1994; Van der Poel CL, 1994) Було виявлено, що в розпал ВГС рівень МДАл достовірно не відрізнявся від норми (1,23 +0,08 нмоль/2х106 кл), а рівень МДАпл в 4,3-5, 6 рази перевищував показники здорових осіб (63,0 ± 10,6 нмоль/мл, Р <0,001). У міру купірування клінічних проявів ВГС спостерігалося збільшення рівня МДАл. Показник в 1,3-1.4 рази перевищував норму (1,48 +0,04 нмоль/2х106 кл. Р <0.001) при нормалізації рівня МДАлл (15,1 ± 3,00 нмоль/мл).

Ці дані свідчать про достовірно менш виражених процесах ліпопероксидації у мембранах лімфоцитів у розпал ВГС у порівнянні з ОВГВ і ВГВ + С за рівнем МДА і більш суттєве підвищення вмісту продуктів ПОЛ в плазмі крові В динаміці ВГС спостерігалася протилежна спрямованість зміни МДАл на відміну від ВГ іншої етіології . Отримані дані можуть бути наслідком особливостей патогенезу ВГС, зокрема, існуючим в літературі думкою про характерному впливі HCV на тропний органи і тканини, а саме, гепатоцити мононуклеарні клітини периферичної крові (Koskinas J et al .. 1994, Abrignani S., 1995; Dicpolder HM et al, 1995: Thomas H S.. 1995).

Разом з тим, посилення ПОЛ у лімфоцитах у міру згасання клініко-біохімічних ознак захворювання при ВГС може свідчити про триваючому патологічному процесі, персистенції вірусу і хронізації захворювання.

Як відомо, у процесі розвитку будь-якого інфекційного захворювання відбувається формування адаптаційних реакцій організму, який здійснюється на різних рівнях - мембранному, органному, системному і мають універсальний характер при різній патології (Антонова Т В.. 1996). Однією з цих систем є компоненти АОЗ. так як від співвідношення активності прооксидантно і антиоксидантних систем залежить ступінь активності процесів ліпопероксидації мембран

Ми виявили підвищення активності одного з основних ферментів АОЗ - СОД у лімфоцитах в розпал ОВГВ, ступінь якого відповідала формі важкості При неважких формах захворювання активність СОД була збільшена в середньому в 1,4 рази (66,0 ± 20,9 од прілікой формі і б6 , 3 ± 12,3 од при середньої тяжкості) і достовірно перевищувала норму (45,3 ± 4,51 од) у хворих середньої тяжкості. При тяжкому перебігу ОВГВ активність СОД в жовтяничний період була підвищена в 2,3-3,8 рази в порівнянні зі здоровими особами (142,0 ± 48,0 од. Р <0.001) і достовірно перевищувала аналогічний показники "у хворих середньої тяжкості. Ці результати узгоджуються з даними інших дослідників, що виявили підвищення активності СОД в лімфоцитах при гострій пневмонії (Плешкова З М., Жапарханова Р С., 1989), ГРВІ (Тихомирова О.В. та ін. 1992), виразкової хвороби шлунка (Яковлєв А А, Тарасова Г М., 1995), інфекційно-алергічному міокардиті (Плешкова СМ та ін, 1991), що є необхідним для нормального функціонування ВКК.

У період ранньої реконвалесценції ОВГВ активність СОД при легкому перебігу захворювання перевищувала норму в 2,3 рази (103,0 ± 10,6 од), при середньої тяжкості - в 2,1 рази (95,3 ± 10,7 од). що відображало триваюче компенсаторне посилення системи АОЗ. У хворих на тяжку форму, навпаки. в динаміці захворювання відбувалося зниження активності ферменту в 1,6-2,0 рази (90,0 ± 10.0 од), що може бути наслідком виснаження АОС Відомо, що декомпенсація АОЗ наступає раніше і більш виражено в ВКК, ніж в інших тканинах (еритроцити , плазма і т д) (Матвейков Т П та ін 1994) і може служити одним з факторів, що сприяють формуванню імунодефіциту (Лукаш М.А. та ін. 1995; Богатирьов В Г и др., 1996)

При легкій формі гепатиту В + С підвищена, в порівнянні з нормою. активність СОД в 1,9-2.0 рази (90,0 ± 10.0 од, Р <0,001) в період розпалу. зберігалася протягом усього захворювання і до періоду ранньої реконвалесценції становила 88,3 ± 30,0 од.

Процеси вільнорадикального окислення в однаковій мірі зачіпають всі мембранні освіти внутрішньоклітинних структур і субклітинні освіти, в тому числі чинять дестабілізуючий вплив на ядерний хроматин Зміст продуктів деградації нуклеотидів (ПДН) у лімфоцитах в розпал ОВГВ підвищувався незалежно від форми важкості в 1.2-1,3 рази в порівнянні з нормою (легка форма -57,9 ± 2,74%, Р <0,01; форма середньої тяжкості - б2.1 ± 1.94%> Р <0,001; важка форма - 58,8 ± 3.2%, Р < 0,001, норма - 48.5 +1,19%) До періоду ранньої реконвалесценції вміст ПДН не змінювалося, залишаючись стабільно підвищеним протягом усього захворювання.

При легкій формі ВГВ + С в період розпалу відбувалося збільшення рівня ПДН в 1,4-1.5 рази (70.7 ± 5,85%), що достовірно перевищувало норму. У реконвалесценцію показник відповідав рівню ПДН здорових осіб (49,2 ± 5,79%)

Зміст нуклеотидів у лімфоцитах можна оцінити за показником співвідношення РНК та ДНК (Ко), що відображає Біосинтетичними процеси, посилення яких супроводжує клітинний розподіл і диференціювання лімфоцитів в процесі розвитку імунних реакцій (Юсупова Л Б. Шевляков В В, 1993, Гладких С.І и др ., 1995; Scott DI, Lincoln YS, 1983) Посилення функціональної активності лімфоцитів за величиною Ка спостерігалося у всіх хворих ОВГВ в період розпалу незалежно від форми важкості. При нормі 5,01 +0.77 од, у хворих легкою формою Ко, був підвищений у 1,6 рази (7.97 +1.01 од. Р <0,05), середньої важкості - в 1,8-1,9 рази (9, 47 ± 1,79 од, РО.05), тяжкою формою - у 1.6-1,7 рази (8,3 ± 1,2 од. Р <0,02) У динаміці гепатиту Ко мав тенденцію до підвищення у хворих легкої ( 9.55 ± 2,74 од) і формою середньої тяжкості (12.1 +0,90 од). При важкій формі показник залишався стабільно підвищеним протягом захворювання (8,28 ± 3,71 од), що може свідчити про менші компенсаторних можливостях біосинтетичних процесів в ВКК.

Імунна система, що має основне значення в розвитку і проявах HBV-і HCV-інфекцій. характеризується певним рівнем метаболізму своїх клітинних елементів Зниження або підвищення енергетики лімфоцитів відображає рівень реакцій імунної системи на різні дії, що проявляється зміною активності ферментів основних обмінних циклів (Захарова Л.Б та ін 1989, Робінсон М.В. 1989, 1994). < p> Метаболізм лімфоцитів хворих ОВГВ істотно змінений за рахунок зниження активності альфа-ГФДГ - ферменту гліцеролфосфатного човникового механізму мітохондріального перенесення електронів, що характеризує напруженість енергетичного обміну. Достовірний, в порівнянні з нормою, зниження активності цитозольних ізоформи альфа-ГФДГ у лімфоцитах спостерігалося у хворих легкої (0,17 ± 0.01 од. Екс .. Р <0,01) і формою середньої тяжкості (0.19 +0,01 од. Екс , Р <0,01), при нормі - 0,28 ± 0,02 од. екс. Виявлено залежність активності альфа-ГФДГ від форми тяжкості найменша при легкій формі ОВГВ і без істотної відмінності від норми - при тяжкій (0,21 ± 0,02 од. Екс.). Активність мітохондріальної ізоформи альфа-ГФДГ мала тенденцію до зниження в розпал гепатиту. У міру купірування гострих проявів захворювання простежувалася тенденція до підвищення активності обох ізоформ альфа-ГФДГ при легкій та середній формі важкості і до зниження - при тяжкому перебігу ОВГВ.

Активність одного з ферментів основного шляху окислення (циклу Кребса) - сукцинатдегідрогенази (СДГ) у всіх групах обстежених перебувала в межах показників здорових осіб.

Вивчення активності основного ферменту анаеробного окислення (гліколізу) - лактатдегідрогенази (ЛДГ) показало тенденцію до її зниження в розпал ОВГВ. Достовірний зменшення показника в порівнянні з нормою було у хворих середньої тяжкості (0,22 ± 0,01 од ЗКС., Норма - 0,29 ± 0,02 од екс, Р <0,05) При легкій формі цей показник знаходився в межах 0.2 ± 0.01 од екс, важкою - 0,20 +0,01 од. екс. У період ранньої реконвалесценції виявлена зміна активності ЛДГ у всіх групах зберігалося без суттєвої динаміки.

У хворих ОВГВ виявлено тенденцію до зниження активності НАД-і НАДФ-оксидаз, які здійснюють відновлення окислених форм НАД та НАДФ, необхідних для синтезу АТФ. Дані показники не відрізнялися у хворих обстежених груп. Достовірно низькими, у порівнянні з нормою, були показники активності НАДФ-оксидази у хворих середньої тяжкості, як у розпал, так і в період ранньої реконвалесценції.

У хворих легкою формою гепатиту В + С активність вивчених ферментів у лімфоцитах мала зміни, аналогічні легкій формі ОВГВ. за винятком активності ЛДГ, яка була достовірно знижена в розпал захворювання в порівнянні зі здоровими особами (0,19 ± 0,01 од екс, Р <0,02) і залишалася зниженою у відновлювальний період (0.175 ± 0,006 од. екс.) і активності НАДФ-оксидази, достовірно зниженою в порівнянні з нормою в період розпалу і в період ранньої реконвалесценції (0.09 ± 0,01 од. екс, Р <0,05 і 0,080 +0,004 ед, екс., Р <0,02, відповідно ).

Незважаючи на відсутність достоверньк відмінностей від показників здорових осіб активності більшості вивчених ферментів, виявлені зміни свідчать про ті зрушення у біоенергетичних процесах і внутрішньоклітинному метаболізмі лімфоцитів в ході розвитку імунної відповіді на HBV-та НВС-інфекції, що може впливати на функціонування ВКК та імунної системи в цілому. З огляду на виявлені порушення обмінних процесів, що відбуваються в лімфоцитах. представляло інтерес вивчити показники Т-і В-клітинної ланки імунітету та стан неспецифічної резистентності у хворих ОВГВ.

Як показали наші дослідження, зміни клітинної ланки імунної системи у хворих на гостру HBV-інфекцією характеризувалися порушенням регуляції і кількісним дисбалансом субпопуляцій Т-і В-лімфоцитів і зміною функціональних можливостей ВКК, що відповідають літературним даними (Юшук Н Д і ін 1994, Сорінсон З . Н. та ін, 1996; Чешік С.Г та ін, 1996: Barhaba V ct al., 1993; Davis GL. 1993, Moreno Otero R. et al., 1996, Chisari F V.. 1997).

Таким чином, виявлені зміни в імунному статусі хворих ОВГВ, за даними більшості показників, виявилися несуттєвими, що свідчить про достатність компенсаторних механізмів, що розвиваються у відповідь на вірусну інфекцію гепатитних. У той же час, виявлені нами функціонально-метаболічні зрушення в основний робочої клітці імунної системи - лімфоцит є більш чутливим індикаторними методом оцінки стану ВКК, які впливають на стан і функціонування імунної системи в цілому, що відбивається на течії і випадки вірусних гепатитів В, С. В + С

ВИСНОВКИ

1 У розпал ОВГВ у більшості обстежених хворих виявлено посилення процесів ліпопероксидації в лімфоцитах і в плазмі крові. характеризується збільшенням рівня вторинного продукту ПОЛ - малонового діальдегіду Аналогічні зміни виявлені у хворих на гепатит В + С

Ступінь підвищення рівня МДА відповідала формі важкості-При важкій формі показник був достовірно вище-ніж у хворих легкої та середньої тяжкості.

2. При вірусних гепатитах різної етіології (ОВГВ. ВГС. ВГВ + С) встановлені різноспрямовані зміни показників інтенсивності ПОЛ в лімфоцитах.

У розпал легкої форми ОВГВ і ВГВ + С виявлено достовірне збільшення рівня МДА в лімфоцитах У міру згасання клінічних і біохімічних ознак гепатиту виявлена тенденція до зниження показника МДА, але у 90,0% хворих показник був вище норми.

При легкій формі ВГС рівень МДА в розпал захворювання не відрізнявся від норми, а до періоду реконвалесценції був достовірно підвищений.

3. У міру згасання клініко-біохімічних проявів гепатиту виявлено зниження рівня МДА у більшості обстежених хворих, значення якого залишалися вірогідно вище показників здорових осіб

У хворих, обстежених у перші дні після курсу Алок відзначено на фоні зменшення активності АлАТ значне підвищення рівня МДА в лімфоцитах.

4 Посилення антиоксидантного захисту в лімфоцитах при ОВГВ характеризується збільшенням активності її основного ферменту - супероксиддисмутази в розпал легкої та среднетяжелой форми в середньому в 1,4 рази, важкою - в 2,3-3,8 рази. В динаміці захворювання спостерігається ще більше збільшення активності СОД при неважких формах і, навпаки. зниження показника у хворих на тяжку форму ОВГВ,

5 Посилення процесів ПОЛ в лімфоцитах закономірно призводить до посилення ендонуклеоліза, деструкції хроматину і виходу продуктів деградації нуклеотидів в цитоплазмі клітки. Це підтверджується стабільно збільшеним вмістом ПДН у лімфоцитах протягом ОВГВ при всіх формах тяжкості,

6. При ОВГВ відбувається зміна внутрішньоклітинного метаболізму лімфоцитів, про що свідчить достовірне зниження активності альфа-ГФДГ при формах легкої і середньої тяжкості, НАДФ-оксидази при середньотяжкому перебігу.

При легкій формі ВГВ + С активність ферментів була аналогічна показниками при легкій формі ОВГВ

7 Структурно-функціональні та метаболічні зміни в лімфоцитах при ОВГВ, ВГС та ВГВ + С відповідають формі тяжкості та періоду захворювання і пов'язані з активацією імунокомпетентних клітин при гепатитних інфекції, що має патогенетичне значення і може слугувати додатковим критерієм оцінки тяжкості та прогнозу перебігу захворювання. < p> ПРАКТИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ

В якості додаткового критерію оцінки форми тяжкості та прогнозування перебігу вірусних гепатитів В, В + С з перших днів жовтяничного періоду рекомендується використовувати визначення рівня вторинного продукту ПОЛ - малонового діальдегіду (МДА) у лімфоцитах і в плазмі крові.

Збільшення показника МДАл більше, ніж в 1.6 рази і МДАпл - в 7 і більше разів дозволяє прогнозувати важкий перебіг захворювання у більшості хворих

Динамічне спостереження за активністю СОД у лімфоцитах при ОВГВ дозволяє прогнозувати важкий перебіг гепатиту при збільшенні показника в розпал в 2,0 і більше разів.

Виявлення функціонально-метаболічних та структурної зрушень у лімфоцитах рекомендується як ранній і чутливий метод визначення стану іммуннокомпетентнь1х клітин для оцінки стану системи імунітету в цілому, зокрема, за показниками рівня МДА, ПДН, Ка, активності СОД. альфа-ГФДГ, ЛДГ і НАДФ-оксидази,

СПИСОК РОБІТ, опублікованих за темою дисертації

1 Іммунобіохіміческіе критерії тяжкості та прогнозу гострого вірусного гепатиту В// Актуальні питання клініки, діагностики та лікування: Тез. докл. научн. конф, - СПб., 1995, - С. 313-314. (у співавт. з Т. В. Антонової, І. В. Жіцковой. Н. В. Каріцкой),

2. Роль прооксидантно і антиоксидантної систем у патогенезі-вірусного гепатиту в// Росс. журн. гастроентерит., гепатол. колопрокт, - 1995. -N3, Т 5, Програми. N1. - С. 8. (в соавт.с Т В. Антонової, В Б. Барановської).

3. Біоенергетичний метаболізм лімфоцитів при гострому вірусному гепатиті в// рос. журн гастроентерит., гепатод., колопрокт. -1996 - N4, Т.6, Програми. N3. "С. 307 (у співавт з Т.В, Антонової)

4 Рівень (бетта2-мікроглобуліну і стан мембран лімфоцитів в динаміці вірусного гепатиту В// Журн. Микробиол. -1996 - N6. - С 82-83. (У співавт. З Т.В, Антонової. І. В. Жіцковой, М . А Вашуковой)

5. Мембранно-метаболічні властивості лімфоцитів при гострому вірусному гепатиті В// Матер.1997 - C.134. (у співавт з Т. В. Антонової).