Введення

НИРКИ - найважливіші парні органи виділення хребетних тварин ілюдини, що беруть участь у водно-сольовому гомеостазі, тобто в підтримціпостійності концентрації осмотично активних речовин в рідинахвнутрішнього середовища, сталості обсягу цих жідкостоей, їх іонного складу ікістлотно-лужної рівноваги. Через нирки виводяться з організму кінцевіпродукти азотистого обміну, чужорідні і токсичні сполуки, надлишокорганічних і неорганічних речовин. Нирки беруть участь у метаболізмівуглеводів і білків, в утворенні біологічно активних речовин,регулюють рівень артеріального тиску, швидкість секреції альдостеронунадочечнікамі і швидкість утворення еритроцитів.

Огляд літератури.

1.1. Анатомо-морфологічна характеристика тканин нирки

Будова нирок. У людини нирки - парні бобовідние органи,розташовані на задній черевній стінці по обидва боки хребтазазвичай на рівні 12-го грудного - 3-го поперекового хребців. Одна брунькарозташована вище другої приблизно на 2-3 см. Відомі аномаліїрозвитку, коли є 1 або 3 нирки. У дорослої людини кожна ниркаважить 120-200 г, її довжина 10-12 см, ширина 5-6 см, товщина 3-4 см.
Передня поверхня нирки покрита очеревиною, але сама нирка знаходиться позаочеревинної порожнини. Нирки оточені фасцією, під якою знаходиться жировакапсула; безпосередньо паренхіма нирок оточена фіброзної капсулою. Брунькамає гладкий опуклий зовнішній край і увігнутий внутрішній край, в центрійого знаходяться ворота нирки, через які відкривається доступ в нирковупазуху з ниркової миски, ворнкообразний резервуар, утворений в нирцішляхом злиття великих ниркових чашок, що триває в сечовід. Уцьому ж місці в нирку входять артерія та нерви; виходять вена і лімфатичнісудини.

Відмінна особливість нирок ссавців - ясно виражене поділна 2 зони - зовнішню (коркові) червоно-коричневого кольору і внутрішню
(мозкову), що має лілово-крачний колір. Мозкова речовина нирок утворює 8 -
18 пірамід; над пірамідами і між ними лежать шари коркового речовини --ниркові (бертініеви) стовпи. Кожна піраміда має широку підставу,примикає до коркової речовини, і закруглену і більш вузьку верхівку --нирковий сосочок, звернений в малу ниркову чашку. Останнівідкриваються у великі ниркові чашечки, з них сеча поступет в нирковумиски і далі в сечовід.

В обох нирках людини близько 2 млн. нефронів. Нефрон - це основнаморфо-функціональна одиниця нирок (рис.1) Кожен нефрон складається з частин,що мають характерну назву і виконують різні функції. Початковачастина нефрона (боуменова капсула), чашевидних сліпий кінець сечовогоканальця, що оточує судинний клубочок із, приблизно 50 артеріальнихкапілярів (клубочок Шумлянського), утворюючи разом з ним мальпігієві, абониркове, тільце (загальна кількість яких сягає 4 млн.). Стінкабоуменовой капсули складається з внутрішнього та зовнішнього листків, міжякими знаходиться щілина - порожнина боуменовой капсули, вистелена плоскимепітелієм. Внутрішній листок прилягає до клубочки, зовнішньої триває впроксимальний звивистих сечовий каналець, що переходить у пряму частинапроксимального канальця. За ним йде тонкий

спадний ділянку петлі Генле, що спускається в мозкова речовина нирок, девін, вигинаючись на 180 градусів, переходить у тонкий висхідний, а потімтовстий висхідний каналець петлі Генле, що повертається до клубочки.
Висхідна частина петлі переходить у дистальний (Інтернейрони) відділ нефрона;він з'єднується сполучною відділом з розташованими в корі нирокколективними трубками. Вони проходять коркова і мозкова речовина нирок і,зливаючись разом, утворять у сосочке беллініеви протоки, що відкриваються вниркової миски.

У нирках ссавців і людини є кілька типів нефронів,розрізняються за місцем розташування клубочків в корі нирок і по фукнкцііканальців: субкортікальние, інтеркортікальние і юкстамедуллярние. Клубочкисубкортікальних нефронів знаходяться в поверхневій зоні кори нирок,юкстамедуллярние - у межі коркового і мозкової речовини нирок.
Юкстамедуллярние нефрони мають довгу петлю Генле, що спускається в нирковийсосокчек і обеспечівающуювисокій рівень осмотичного концентруваннясечі. Для нирок характерно суворе зональний розподіл різних типівканальців. У корі нирок знаходяться всі клубочки, проксимальні і дистальніпокручені канальці, коркові відділи збірних трубок. У мозковій речовинірозташовуються петлі Генле і збірні трубки. Від розташування окремихелементів нефрона залежить ефективність осморегулірующіх функцій нирок.

Клітини кожного відділу канальців відрізняються за будовою. Для кубічногоепітелію проксимального звивистих канальців характерні численниймікроворсинки (щіткова облямівка) на поверхні, оберненою у просвітнефрону. На базальної поверхні клітинна оболонка утворює вузькіскладки, між якими рсположени численні мітохондрії. У клітинахпрямої ділянки проксимального канальця менш виражені щіткова облямівка іскладчастість базальної мембрани, мало мітохондрій. Тонкий відділ петлі
Генле меншого діаметру, вистелений плоскими клітинами з нечисленнимимітохондріями. Характерна особливість епітелію дистального сегментанефрона (товстий висхідний відділ петлі Генле і дистальних звивистих каналецьзі сполучною відділом) - мала кількість мікроворсинок на поверхні канальця,оберненою у просвіт нефрона, яскраво виражена складчастість базальноїплазматичної мембрани і численні великі мітохондрії з великимчислом крист. У початкових відділах збірних трубок чергуються світлі ітемні клітини (у останніх більше мітохондрій). Беллініеви трубкиутворені високими клітинами з нечисленними мітохондріями.

Кров в нирки надходить з черевної аорти по ниркової артерії,розпадається в тканині нирок на междолевие, дугові, междольковие артерії,від яких беруть початок аферентні (що приносять) артеріоли клубочків. У нихартеріола розпадається на капіляри, потім вони вноиь з'єднуються, утворюючиефферентую (виносять) артеріол. Аферентна артеріола майже в 2 разитовщі еферентної, що сприяє клубочкової фільтрації. Эфферентнаяартеріола знову розпадається на капіляри, обплітають канальця того жсамого нефрону. Венозна кров надходить у междольковие, дугові імеждолевие вени; вони утворюють ниркову вену, що впадає в нижню порожню вену.
Кровопостачання мозкової речовини нирок забезпечується прямими артериолами.
Нирки іннервують сімпатічексіе нейрони трьох нижніх грудних та двох верхніхпоперекових сегментів спинного мозку; парасимпатичні волокна йдуть дониркам від блукаючого нерва. Чувствительная іннервація нирок у складічревного нервів досягає нижніх грудних і верхніх поперекових вузлів.

Опції почек.Основние функції нирок (екскреторна, осморегулірующая,іонорегулірующая та ін) забезпечуються процесами, що лежать в основімочебразованія: ультрафільтрації рідини і розчинених речовин з кровів клкубочках, зворотним всмоктуванням часток цих вешеств в кров і секрецієюдеяких речовин з крові в просвіт канальця. У процесі еволюції нирокфільтраційно-реабсорбційну механізм мочеобразованія все більшепереважає над секреторний. Регулювання більшості виділення іонів уназемних хребетних заснована на зміні рівня реабсорбції іонів.
Характерна особливість еволюції нирок - збільшення обсягу клубочковоїфільтрації, яка у ссавців в 10-100 разів вище, ніж у риб іземноводних; різко зростає інтенсивність реабсорбції речовин клітинамиканальців, оскільки відношення маси нирок до маси тіла майже однаково у цихтварин. Підвищується функція нирок з підтримання стабільності складуречовин, розчинених у сироватці крові. Розвиток осморегулірующей функціїнирок тісно пов'язане з типом азотистого обміну. У ссавців кінцевийпродукт азотистого обміну - сечовина, осмотично високоактивне речовина,для виведення якого необхідно значну кількість води абоздатність осмотично концентрувати сечу. У людини в умовах спокоюблизько 1/4 крові, що викидається в аорту лівим шлуночком серця, надходить униркові артерії. Кровоток в нирках чоловіків становить 1300 мл/хв, у жінокдещо менше. При цьому в клубочках з порожнини капілярів в просвітбоуменовой капсули відбувається ультрафільтрація плазми крові, що забезпечуєутворення так називемой первинної сечі, в якій практично немає білка.
У просвіт канальців надходить близько 120 мл рідини в 1 хвилину. Однак узвичайних умовах близько 119 мл фільтрату надходить назад у кров і лише 1мл у вигляді кінцевої сечі виводиться з організму. Процес ультрафільтраціїрідини обумовлений тим, що гідростатіческре тиск крові в капілярахклубочка вище суми коллоідноосмотіческого тиску білків плазми крові івнутрішньониркового тканинного тиску. Розмір часток, фільтровану з крові,визначається величиною пір в фільтрує мембрані, що, мабуть,залежить від діаметра пір центрального шару базальної мембрани клубочка. Убільшості випадків радіус пір менше 28 A, тому електроліти,низькомолекулярні неелектролітів і вода вільно проникають у просвітнефрона, білки ж практично не проходять у ультрафільтрату. Функціональнезначення окремих ниркових канальців у процесі мочеобразованіянеоднаково. Клітини проксимального сегмента нефрона всмоктують
(реабсорбуються) потрапили в фільтрат глюкозу, амінокислоти, вітаміни,більшу частину електролітів. Стінка цього канальця завжди проникна дляводи; об'єм рідини до кінця проксимального канальця зменшується на 2/3, алеосмотична концентрація рідини залишається тією ж, що і плазми крові.
Клітини проксимального канальця здатні до секреції, тобто виділеннюдеяких органічних кислот (пеніцилін, кардіотраст, парааміногіппуроваякислота, флуоресцеїну тощо) і органічних основ (холін, гуанідинів іін) з околоканальцевой рідини в просвіт канальця. Клітини дистальногосегмента нефрона і збірних трубок беруть участь у реабсорбціїелектролітів проти значного електрохімічного градієнта; деякіречовини (калій, аміак, іони водню) можуть секретуватися в просвітнефрону. Проникність стінок дистальних звивистих канальців і збірнихтрубок для води збільшується під впливом антидіуретичного гормону --вазопресину, що виділяється задньою часткою гіпофіза, внаслідок чого відбуваєтьсявсмоктування води по осмотичного градієнту.

Осморегулірующая функція нирок забезпечує сталість концентраціїосмотично активних речовин в крові при різному водному режимі. Принадмірному надходженні води в організм виділяється гіпотонічна сеча, вумовах води утворюється осмотично концентрована сеча. Механізмосмотичного розведення та концентрування сечі був відкритий у 50-60х рр.. 20століття. У нирках ссавців канальці та судини мозкової речовини утворюютьпротівоточно-поворотну розмножувальну систему. У мозковій речовині нирокпаралельно один одному проходять спадні і висхідні відділи петель
Генле, прямі судини, збірні трубки. В результаті активноготранспорту натрію клітинами висхідного відділу петлі Генле солі натріюнакопичуються в мозковій речовині нирок і разом з сечовиною утримуються вцій зоні нирок. Під час руху крові вниз, углиб мозкової речовини,сечовина і солі натрію надходять в судини, а при зворотному русі, докоркової речовини, виходять з них, утримуючись у тканини (принциппротитоку). При дії вазопресину осмотична висока концентраціяхарактерна для всіх рідин (кров, міжклітинна і канальцева рідина)на кожному рівні мозкової речовини нирок, виключаючи вміст висхіднихвідділів петель Генле. Стінки цих канальців щодо водонепроникні,а клітини активно реабсорбуються солі натрію в навколишнє міжклітинну тканина,внаслідок чого осмотична концентрація зменшується. При отстутсвіівазопресину стінка збірних трубок водонепроникна; при діїцього гормону вона стає водопроникної і вода всмоктується з просвітупо осмотичного градієнту в навколишню тканину. У нирці людини сеча можебути в 4-5 разів осмотично концентрованіше крові. У деяких що мешкають впустелях гризунів, що мають особливо тхне внутрішня мозкова речовинанирок, сеча може в 18 разів перевершувати по осмотичного тиску кров.

Вивчено молекулярні механізми абсорбції і секреції речовин клітинаминиркових канальців. При реабсорбції натрій пасивно надходить поелектрохімічного градієнту усередину клітини, рухається по ній до областібазальної плазматичної мембрани і за допомогою що знаходяться в ній "натрієвихнасосів "(Na/K іонообмінних насос, електрогенний Na насос і ін)викидається в позаклітинне рідина. Кожен з цих насосів пригнічуєтьсяспецифічними інгібіторами. Застосування в клініці сечогінних засобів,використовуються, зокрема, при лікуванні набряків, грунтується на тому, що вонивляются на різні елементи системи реабсорціі Na, K, на відміну від Na,клітина нефрона може не тільки реабсорбіровать, а й секретувати. Присекреції K з міжклітинної рідини надходить у клітину через базальнуплазматичну мембрану за рахунок роботи Na/K насоса, а виділяється він упросвіт нефрона через апікальної клітинну мембрану пасивно. Цеобумовлено збільшенням калієвої проникності мембран і високоївнутрішньоклітинної концентрацією K. Реабсорбція різних речовин регулюєтьсянервовими і гормональними чинниками. Всмоктування води зростає під впливомвазопресину, реабсорбція Na збільшується альдостерону і зменшуєтьсянатрійуретичний фактором, всмоктування Ca і фосфатів змінюється підвпливом паратиреоїдного гормону, тірокальціотініна та ін Молекулярнімеханізми регуляції перенесення різних речовин клітиною нефрона неоднакові.
Так, ряд гормонів (наприклад, вазопресин) стимулює внутрішньоклітиннийутворення з АТФ циклічної форми АМФ, яка відтворює ефектгормону. Інші ж гормони (наприклад, альдостерон) впливають нагенетичний апарат клітини, внаслідок чого в рибосомах посилюється синтезбілків, що забезпечують зміна перенесення речовин через клітку канальця.

Важливе значення має нирка як інкреторний (внутрісекреторний) орган.
У клітинах її юкстагломерулярного апарату, розташованого в областісудинного полюса клубочка між приносить і виносить артериолами,відбувається утворення реніну, а можливо і еритропоетину. Секреція ренінузростає при зменшенні ниркового артеріального тиску і зниженнявмісту Na в організмі. У нирках виробляється як еритропоетин, так і,мабуть, речовина, гнітюче утворення еритроцитів; ці речовиниберуть участь у регуляції еритроцитарного складу крові. Встановлено, що внирці синтезуються простагландини, речовини, що змінюють чутливістьниркової клітини до деяких гормонів (наприклад, вазопресин) і знижуєкров'яний тиск.

2. Енергетичні речовини тканин нирки.

Участь нирки в гомеостазі білків, ліпідів і вуглеводів ранішенедооцінювали. Це участь не обмежена здатністю до реабсорбції данихсполук або екскреції їхнього надлишку. У нирці відбувається утворення іруйнування різних пептидних гормонів, які циркулюють в крові, освітаглюкози (глюконеогенез), перетворення амінокислот, наприклад гліцину в серин,необхідний для синтезу фосфатидилсерин, який бере участь в утворенні іобмін плазматичних мембран у різних органах

Енергетичні речовини тканин нирки універсальні для всіх тканинорганізму і представлені білками, вуглеводами (глюкоза, глікоген тощо),ліпідами і основними інтермедіатами і продуктами їх метаболізму (лактат,піруват (рис.2) та ін.)

1.3. Тканинна особливість включення енергетичних речовин в біоенергетику

Складні фізіологічні процеси в ниркової тканини протікають зпостійним споживанням великої кількості енергії, що виділяється приметаболічних реакціях. Не менш 8-10% всього що поглинається в спокоїкисню використовується на окислювальні процеси в нирках. Споживанняенергії на одиницю маси в нирках більше, ніж у будь-якому іншому органі.

У кірковій речовині нирки яскраво виражений аеробний тип обміну речовин. Умозковій речовині переважають анаеробні процеси. Брунька відноситься доорганам, найбільш багатим ферментами. Більшість цих ферментівзустрічається і в інших оргАнахов. Так, ЛДГ, АсАТ, АлАТ, глутаматдегідрогеназашироко представлені як у нирках, так і в інших тканинах. Разом з тимє ферменти, які в значній мірі специфічні для нирковоїтканини. До таких ферментів перш за все відноситься гліцин-амідінотроансфераза
(трансамідіназа). Цей фермент міститься в тканинах нирок і підшлунковоїзалози і практично відсутня в інших тканинах. Гліцин-амідінотрансферазаздійснює перенесення амідіновой групи з L-аргініну на гліцин зосвітою L-орнітіна і глікоціаміна:

L-аргінін + Гліцин L-орнітін + Глікоціамін.

Ця реакція є початковим етапом синтезу креатину. Гліцин -амідінотрансфераза була відкрита ще в 1941 р., але тільки в 1965 р.
У. Хорнер і співавт., А потім С.Р. Мардашев і А.А. Карелін (1967) впершевідзначили діагностичну цінність визначення ферменту в сироватці кровіпри захворюванні нирок. Поява даного ферменту в крові може бутизв'язаний або з ураженням нирок, або з початком або розвинувсянекрозом підшлункової залози.

Найвища активність гліцин-амідінотрансферази в сироватці кровіспостерігається при хронічному пієлонефрит у фазі порушенняазотовиделітельной функції нирок, а далі в порядку спадання слідуютьхронічний нефрит з гіпертензійним і набряково-гіпертензійним синдромами іпомірним порушенням азотовиделітельной здібності, хронічний нефрит зізольованим сечовим синдромом без порушення азотовиделітельной функції,залишкові явища гострого дифузного гломерулонефриту.

Тканина нирок відноситься до типу тканин з високою активністю ізоферментів
ЛДГ1 і ЛДГ2. При вивченні тканинних гомогенат різних верств нироквиявляється чітка диференціація ізоферментних спектрів ЛДГ. У кірковійречовині переважає активність ЛДГ1 і ЛДГ2, а в мозковій - ЛДГ5 і ЛДГ4.
При гострої ниркової недостатності в сироватці крові підвищується активністьанодних ізоферментів ЛДГ, тобто ізоферментів з високою електрофоретичноїрухливістю (ЛДГ1 і ЛДГ2).

Певний інтерес становить також дослідження ізоферментіваланінамінопептідази (ААП). Відомі 5 ізоферментів ААП. На відміну відізоферментів ЛГД ізоферменти ААП визначаються в різних органах не у виглядіповного спектра (5 ізоферментів), а частіше як один ізофермент. Так,ізофермент ААП1 представлений головним чином у тканини печінки, ААП2 - впідшлунковій залозі, ААП3 - в нирках, ААП4 і ААП5 - у різних відділахстінки кишки. При пошкодженні тканини нирок ізофермент ААП3 виявляється вкрові і сечі, що є специфічною ознакою ураження нирковоїтканини.

Через фільтрує мембрану клубочка практично не проходять альбуміни іглобуліни, але вільно фільтруються пептиди. Тим самим у канальціневпинно надходять гормони, змінені білки. Їх розщеплення маєподвійне фізіологічне значення - організм звільняється від фізіологічноактивних речовин, що поліпшує точність регулювання, а в кров повертаютьсяамінокислоти, які використовуються для наступних синтезів. Наявні данівказують на можливість вилучення деяких білків і поліпептидівклітинами нефрона з околоканальцевой рідини та їх подальшого руйнування.

Таким чином, нирка відіграє важливу роль у розщепленні низькомолекулярнихі змінених (у тому числі денатурованих) білків. Це пояснює значеннянирки у відновленні фонду амінокислот для клітин органів і тканин, вшвидкому усуненні з крові фізіологічно активних речовин і збереженнідля організму їх компонентів.

Брунька не тільки споживає глюкозу в процесі обміну, але і володієздатністю до значної її продукції. У звичайних умовах швидкості двохостанніх процесів рівні. Використання глюкози для вироблення енергії внирці становить близько 13% загального споживання кисню ниркою.
Глюконеогенез відбувається в корі нирки, а найбільша активність гліколізухарактерна для мозкової речовини нирки.

Нирка має досить активною системою освіти глюкози, їїна інтенсивність 1 г маси нирки більше, ніж в печінці. При триваломуголодуванні в нирках утворюється половина загальної кількості глюкози,що надходить у кров. Для цього використовуються органічні кислоти, якіперетворюються в глюкозу, яка є нейтральною речовиною, що сприяєодночасно регулювання pH крові. При алкалоз, навпаки, знижений рівеньглюконеогенезу з кислих субстратів. Залежність швидкості і характеруглюконеогенезу від велечіни pH є особливістю вуглеводного обмінунирки в порівнянні з печінкою.

Перетворення різних субстратів в глюкозу, яка надходить до загальногокровотік і доступну для утилізації в різних органах і тканинах,свідчить про те, що нирки притаманна важлива функція, пов'язана зучастю в енергетичному балансі організму.

Брунька виявилася основним органом окислювального катаболізму інозитол.
У ній міоінозітол окислюється в Ксилулоза і потім через ряд стадій углюкозу. У тканинах нирки синтезується фосфатіділінозітол, що єнеобхідним компонентом плазматичних мембран. Синтез глюкуроновою кислотимає велике значення для утворення глікозаміногліканів, змістяких високо в міжклітинної тканини внутрішнього мозкової речовини нирки танастільки істотно для процесу осмотичного розведення та концентруваннясечі.

Участь в обміні ліпідів пов'язано з тим, що вільні жирні кислотивитягуються ниркою з крові і їх окислення забезпечує значноюступеня роботу нирки. Так як вільні жирні кислоти пов'язані в плазмі зальбуміном, то вони не фільтруються, а їх надходження в клітини нефронавідбувається з боку міжклітинної рідини. Ці сполуки окисляються вбільшою мірою в корі нирки, ніж у її мозковій речовині. У нирціутворюються тріацілгліцеріни. Вільні жирні кислоти швидко включаються вфосфоліпіди нирки, які відіграють важливу роль у виконанні різних транспортнихпроцесів. Роль нирки в ліпідному обміні полягає в тому, що в її тканинивільні жирні кислоти включаються до складу тріацілгліцерінов іфосфоліпідів і у вигляді цих сполук надходять в циркуляцію.

2.Експеріментальная частину.

2.1. Методи і матеріал дослідження.

Дослідження тканин нирки проводилися на статевозрілих 7 місячних білихщурах генетичної лінії Вістар жіночої статі (2шт.) та чоловічого (1 шт.)
(табл.1).

Табл.1 Матеріал дослідження
| № п/п | Маса тварини, г | Маса нирки, г |
| 1 | 234,0 (9,8 | 1,05 (0,08 |
| 2 | 249,7 (9,8 | 0,76 (0,08 |
| 3 | 214,9 (9,8 | 0,70 (0,08 |
| Середнє значення | 232,9 | 0,84 |

Метод 1. Визначення глюкози.

Глюкоза визначалася редуктометріческім ферріціанідним методом. Принципметоду полягає в наступному: білки тканини осаджуються гідроксидом кадмію.
Глюкоза, яка міститься в безбілкової фільтраті, окислюється в лужному середовищіферріціанідом калію (червона кров'яна сіль), надлишок якого визначаєтьсяіодометріческі. Утворений ферроціанід калію зв'язується сірчанокислимцинком, який входить до складу "потрійного розчину" [6].

Метод 2. Визначення глікогену.

Стадія 1. Виділення глікогену. Принцип методу полягає в наступному:тканина піддається десмолізу в 30%-м гідроксид калію (замінювати нагідроксид натрію не можна, тому що при цьому утворюються погано розчинні вспирті натрієві мила і сода - це ускладнює подальшу очищення осадуглікогену). З десмолізата глікоген осідає спиртом.

Стадія 2. Обложений глікоген піддається гідролізу, і що утвориласяглюкоза визначається редуктометріческім ферріціанідним методом (метод 1)
[6].

Метод 3. Спільне визначення пірувату та лактату.

Стадія 1. Побудова калібрувального графіка для визначення пірувату.
Складається ряд стандартних розчинів пірувату (включаючи контроль - С = 0).
Будується графік залежності оптичної щільності розчинів від концентраціїпірувату в розчинах.

Стадія 2. Побудова калібрувального графіка для визначення лактату.
Складається ряд стандартних розчинів лактату (включаючи контроль - С = 0).
Будується графік залежності оптичної щільності розчинів від концентраціїлактату в розчинах.

Стадія 3. Визначення кількості пірувату в тканинах ниркиколориметричні методом з 2,4-дінітрофенілгідразіном (по Умбрайту).
Принцип методу полягає в тому, що піруват взаємодіє в кислому середовищі з
2,4-дінітрофенілгідразіном. Що утворюється в результаті реакції 2,4 --дінітрофенілгідразід піровиноградної кислоти на відміну від гідразідовінших кетокислот добре розчинний у толуолі, за допомогою якого йогоекстрагуються з реакційної суміші і створюють лужну середовище, в якому віннабуває коричнево-червоне забарвлення. Визначення проводятьколориметричні.

Стадія 4. Визначення кількості лактату в тканинах нирки методом звикористанням п-оксідіфеніла (по Баркер і Саммерсону). Принцип методу.
Молочна кислота кип'ятінням з конц. сірчаною кислотою перетворюється наацетальдегід, який при конденсації з п-оксідіфенілом утворює 1,1-ді-
(оксідіфеніл)-етан. Цей продукт конденсації в розчині сірчаної кислотиокислюється в продукт фіолетового кольору. Сірчана кислота діє тут якконденсується агент і окислювач. Інтенсивність забарвлення пропорційнакількості ацетальдегіду, а, отже, і кількості лактату. Методдозволяє визначати лактат в кількостях від 0,03 до 0,2 мкмоль (2,7 - 18,0мкг) в пробі.

2.2. Результати та їх обговорення

При проведенні експерименту були отримані наступні результати
(табл. 2):

Табл.2 Зміст метаболітів у тканинах нирки в мг%.
| Метаболіт | Зміст метаболіту |
| | Експериментальне | літературний |
| глюкоза | 27,9 (1,6 | 54 (6 [7] |
| глікоген | 48,1 (2,2 | 50,4 (3,5 [8] |
| лактат | 35,95 | 32,4 (1,8 [9] |
| піруват | 1,93 (0,19 | 2,64 (0,1 [10] |

Наведемо калібрувальні графіки для визначення вмісту пірувату ілактату:

У джерелі [7] вміст глюкози в тканинах нирки визначався про -толуїдиновим методом, суть якого полягає в ферментативномуокисленні глюкози до глюконової кислоти з утворенням перекису водню,яка потім визначалася за допомогою про-толуідіна. Цей метод більшспецифічний для визначення глюкози ніж ферріціанідний, тому що виключаєпрактично всі побічні процеси.

У джерелі [8] для визначення глікогену тканини нирок для дослідженнябрали прижиттєво новокаїнової під місцевою анестезією. Кількість загальногоглікогену визначали за методом Пфлюгер. Кількість істинної глюкозивизначали за методом Нельсона. Ці методи більш специфічні. Цим можнапояснити розбіжність в результатах по глікогену.

У джерелі [10] в основу визначення пірувату покладено ферментативнийметод. Він заснований на непрямому визначенні кількості оксалоацетата,синтезованого в ході ферментативної реакції з пірувату і двоокисувуглецю по окислення НАДН в присутності надлишку малатдегідрогенази. Спад
НАДН реєстрували спектрофотометричних. Цим можна пояснити розбіжністьв результатах по піруват, так як метод більш специфічний. Видкалібрувального графіка дозволяє говорити про систематичну помилку, однак,розбіжність у літературних та експериментальних даних невелика.

У джерелі [9] в основу визначення вмісту лактату покладено метод
Хохорста. Принцип методу. У присутність лактатдегідрогенази лактатпереходить в піруват, причому зв'язування утворюється в ході реакції пірувату згідразин-гліціновим буфером, що сприяє повному окислення лактату.

утворилося кількість НАДН еквімолярних кількості окисленоголактату. Реєстрацію проводили спектрофотометричних.
Висновки

У ході експериментальної роботи були отримані результати, які булизіставлені з літературними даними. На жаль, не вдалося знайти статті,в якій був би використаний ферріціанідний метод (у всіх роботахвикористовувалися різноманітні ферментативні методи), а також не у всіхроботах використовувалися щури - лінії Вістар (в джерелі [7] дослідипроводилися на безпородних щурах обох статей). Тому, літературнідані можуть бути не досить точними по відношенню до даної лінії.
Однак, результати, отримані в дослідах, в основному співпали з літературнимиданими, крім глюкози. Мабуть у досвіді з визначенням глюкози в нирцінайгрубіша була допущена помилка. Але результати можна вважати, на мійпогляд, прийнятними.

Список використаної літератури:

1. Березів Т.Т., Коровкин Б.Ф., Біологічна хімія - М., Медицина,

1998

2. Фізіологія людини/Под ред. Смирнова В.М./- М., Медицина, 2001 р.

3. Загальний курс фізіології людини і тварин/За ред. Ноздрачова А.Д./

- М., Вища школа, 1991 р.

4. Страйер Л., Біохімія, - М., Мир, 1984 р.

5. Біохімія людини, Маррі Р., Греннер Д., Мейес П., Родуелл В., - М.,

Світ, 1993 р.

6. Пандакова В.Н., Цупіло І.А., Лабораторний практикум з обміну речовин, - Донецьк, ДонДУ, 1990 р.

7. Український біохімічний журнал, 1986 р., т. 58, № 6, "гліколізу в нирках щурів в ранній період після ішемії і при введенні інгібіторів кальмодулліна - АМФ і НАД", І. З. Тамарина, Г.В. Лисцова, В.І.

Чумаков.

8. Бюлетень експериментальної біології та медицини, 1979 р., т. 87,

№ 6; "Вимірювання активності ключових ферментів глюконеогенезу в печінці та нирках щурів при дії субекстремальних і екстремальних факторів", Панін Е.

9. Пируват і лактат у тваринному організмі/под ред. Островського/-

Мінськ, 1984 р.

10. Біохімія, т. 35, вип. 1, 1970 р., "Глюконеогенез і гліколіз в нирках щурів нормальних і з аллоксановим діабет", В.С. Ільїн, М.Д.

Балябіна.

11. Велика Радянська Енциклопедія, том 1, 3, 4, 15, 20, 21, М.,
1975

12. Фізіологія нирки, під ред. Ю.В. Наточин, Л., 1972

13. Основи нефрології, під ред. Е.М. Тареева, М., 1972