Губкообразная
енцефалопатія великої рогатої худоби
Курсова робота
Виконав студент
Ветеринарно-санітарного факультету групи ВII-12 Берлін І.М.
Московський
Державний Університет Прикладної Біотехнології
Москва 2001
I.
Введення
У своїй роботі
я спробував висвітлити одне з захворювань групи трансмісивних (переданих)
губкообразних енцефалопатій - трансмісивних губкообразную енцефалопатію
великої рогатої худоби. Вибір даної теми обумовлений не тільки практичним
інтересом до хвороби тварин і людини, але і вкрай малу вивченістю по
порівнянні з іншими захворюваннями. За час дослідження хвороб групи
трансмісивних губкообразних енцефалопатій (перші захворювання даної групи --
скрепі, було зареєстровано в 1732г.) вчені накопичили чимало досвідчених даних,
але до розгадки природи захворювань людство підійшло лише наприкінці ХХ ст.
II.
Матеріали та методи дослідження
Для своєї курсової
роботи я відбирав офіційні документи, наукові статті та публікації з таких
джерел, як Міністерство сільського господарства і продовольства РФ
(Мінсільгосппрод), Академія сільськогосподарських наук, Російське
агентство новин "Інформнаука" (http://informnaura.ru), Центральна
наукова сільськогосподарська бібліотека. Для пошуку матеріалів в глобальній
інформаційної мережі Internet я використав пошукові системи Апорт!
(http://www.aport.ru), Google (http://www.google.com), базу даних
"Ветеринарне законодавство" (http://www.agrolink.ru/base_gvc/vetzac/start.html),
а також внутрішні пошукові системи сайтів Мінсільгосппроду
(http://www.aris.ru) і журналу Nature (http://www.nature.com).
У своїй роботі
я використав матеріали прес-конференції, організованій 24 січня в
Центральному будинку журналіста агентством "Інформнаука". Тема:
"Губкообразная енцефалопатія великої рогатої худоби, і передача її
людині через м'ясо хворих тварин ".
III.
Матеріали власного дослідження
а)
Історія відкриття пріонів
Багато вірусів, давно і
добре відомі як збудники гострих інфекційних захворювань, здатні при
певних умов викликати в організмі людей і тварин повільний
інфекційний процес. І в світі бактерій, і в світі вірусів до цих пір продовжують
з'являтися нові фігуранти. На їх "чорному" рахунком - хвороба
легіонерів, лихоманка Ебола, лихоманка Марбург, СНІД і, нарешті, "хвороба
скаженої корови ", чиє незвичайне
назва обійшло всі газети світу ...
Наприкінці ХVII століття
голландський торговець сукнами Антоній Ван Левенгук, захоплюючись шліфуванням
збільшувальних стекол, виготовив лінзи з 150-300-кратним збільшенням і випадково
у краплі води вперше побачив новий, невідомий досі світ мікроорганізмів. Однак
пройшло ще чимало часу, перш ніж все збільшуються загони мисливців за
мікробами почали відкривати збудників інфекційних хвороб людини і
тварин.
У самий розпал ери
"великих бактеріологічних відкриттів", в 1892р., російський фізіолог
Дмитро Іванівський доповідає в Санкт-Петербурзі результати своїх досліджень
хвороби тютюну і показує, що збудник тютюнової мозаїки проходить через
бактеріальні фільтри, то є фільтри, які затримують бактерії. Так було
покладено початок нової ери "великих вірусологічних відкриттів".
Як це не здасться
дивним, але нові вірусні хвороби стали відомі вченим не тільки завдяки
відкриттю нових вірусів. Виявити здатність вже відомих вірусів викликати в
різних умовах різні форми інфекційного процесу - від безсимптомного до
клінічно яскраво вираженого.
У березні 1954р. в
Лондонському університеті ісландський професор Бьерн Сігурдсон прочитав цикл
лекцій під загальною назвою "Спостереження за трьома повільними інфекціями
овець ". Ці лекції та їх незвичайну назву мали досить тривалу
передісторію.
У 1933р. ісландські
фермери з метою розвитку на острові каракулеводства закупили в Німеччині велику
партію овець. У Гамбурзі тварин завантажили на корабель і відправили до Ісландії.
Вівці виглядали абсолютно здоровими. Однак через кілька років у різних
районах острова на різних фермах серед привезених овець почали реєструватися
випадки захворювань, які нерідко носили масовий характер. Хвороба приносила
великі збитки. Фермери були дуже стурбовані, вони ніколи не зустрічалися з
такими хворобами овець. Не зустрічалися з ними і ісландські ветеринари.
Фермери звернулися за
допомогою до Інституту експериментальної патології в місті Рейк'явіку. Довгі
роки, досліджуючи загадкові захворювання, Б. Сігурдсон помітив чотири їх головних
відмінності: незвично тривалий (місяці й роки) інкубаційний період,
повільно прогресуючий характер перебігу, незвичайність ураження органів і
тканин і неминучий смертельний результат. Захворівши, жодна тварина не виживали.
Отже, повільні інфекції
виявлені у овець. Але, можливо, такі незвичайні інфекції тільки в овець і
зустрічаються? Так чи варто про них стільки говорити?
Через три роки в глухих
гірських районах острова Нова Гвінея американець Карлтон Гайдушека описує нове
захворювання серед папуасів-канібалів, відомий тепер у світовій літературі за
назвою "куру". Хвороба характеризується багаторічним (до 30 років!)
інкубаційним періодом, багатомісячним повільно прогресуючим перебігом,
поразкою тільки головного мозку і обов'язковим смертельним результатом. Значить,
повільні інфекції зустрічаються не тільки у тварин, але й у людей! Що ж
є їх причиною? Енергійні пошуки в цьому напрямку незабаром принесли свої
плоди.
У 1960 році Б. Сігурдсон
виявляє, що одну з типових повільних інфекцій овець - висне, викликає ...
вірус, який виявився дуже схожим за багатьма характеристиками з представниками
групи добре відомих онкорновірусов. Це відкриття, звичайно ж,
сприяло зміцненню уявлення про те, що і всі інші повільні
інфекції людини і тварин повинні бути вірусними захворюваннями, і в
Дози
Ефект
впливу
Фізико-хімічне
вплив
NH2OH
0,1-0,5
мM
Стійкий
псорален
10-500
мг/мл
Стійкий
Фенол
100%
Інактивація
SDS
1-10%
Інактивація
Zn2 +
2
мM
Стійкий
Сечовина
3-8
M
Інактивація
Сода
1N
протягом 1 години при 20 ° C
Інактивація
гіпохлорид
натрію
2,5%
протягом 1 години при 20 ° C
Інактивація
Обробка
ферментами
ДНK-аза
A
0,1-100
мг/мл
Стійкий
ДНK-аза
100
мг/мл
Стійкий
протеїназ
K
100
мг/мл
Інактивація
Трипсин
100
мг/мл
Інактивація
Фізичне
вплив
автоклавування
136 ° C
протягом 18 хвилин
Інактивація
Сухий
жар
160 ° C
протягом 24 годин
Інактивація
УФ
Сильні
дози
Стійкий
Пріони стійкі до
кип'ятіння протягом 30-60 хв, висушування до 2 років, заморожування в 3 рази
більше, ніж відомі віруси, хімічній обробці спиртами, формальдегідом,
кислотами, до УФ-опромінення, гамма-випромінення, гідролізу ферментами. Найбільш
ефективні дії опиняються в дозах, які денатурують практично
всі білки. Інакше кажучи, з усього живого пріони гине останнім.
PrP-с входить до складу
зовнішніх клітинних мембран, пов'язаний із зовнішньою поверхнею клітин якорем
гліколіпіду і бере участь у ендоцитозу і катаболізмі клітин. Незважаючи на те, що
самий високий рівень концентрації PrP виявлено у нейронах, його можуть
синтезувати і багато інших клітин організму. Роль нормального пріони-протеїну
(PrP) у здорових індивідуумів ще до кінця невідома. Пріони-протеїн необхідний
для нормальної синаптичної функції. Передбачається, що пріони беруть
участь в міжклітинній впізнаванні і клітинної активації. Деякі вважають, що
їх функцією є придушення вікових процесів і тому пріонові
хвороби схожі за своїми клінічними і морфологічними характеристиками з
геронтологічних захворюваннями.
Встановлено також, що
клітинний пріонних білок підтримує так звані "ціркадіанние
ритми "(від латинських слів" circa "- близько і" dies "--
день), то є цілодобовий ритм активності і спокою в клітинах, тканинах,
органах і в організмі в цілому. Ті, хто здійснював дальні перельоти (наприклад, з
Москви на Далекий Схід чи у Вашингтон), добре знають: перелетівши з одного
часового поясу в інший, важко увійти в новий ритм. Клітинний пріонних білок
відіграє роль своєрідного заспокоювача, з певною (цілодобовий)
періодичністю гальмуючи активність клітин, тканин і організму в цілому. У цьому
неважко переконатися, якщо штучним чином (такі досліди вже є) знизити
або зовсім позбавити, приміром, мишку, здатності виробляти в організмі
стандартний пріонних білок. Через деякий час, у неї різко скорочується
період сну, а потім тварина і зовсім гине від розвиненої безсоння.
Пріони-протеїн (PrP)
існує в двох формах:
у вигляді нормальної,
неінфекційної форми, яка зустрічається в головному мозку як в нормі, так і у
інфікованих хворих. Ця форма позначається як клітинний пріони-протеїн, або
PrPc;
ізоформа, або PrP-Sc (від
"scrapie" - хвороба овець), яка є патологічною,
інфекційної формою і накопичується в головному мозку тільки у хворих людей і
тварин, які страждають губкообразной трансмісивний енцефалопатією.
Класифікація. У
даний час у людини відомі дві групи захворювань, що викликаються
пріонами:
губкообразние
трансмісивні енцефалопатії;
губкообразний міозит з
пріони-асоційованими включеннями.
Найбільш вивченими на
сьогоднішній день є губкообразние трансмісивні енцефалопатії.
Патогенез
пріонових енцефалопатій.
Виходячи з встановленого
факту, що пріонові хвороби унікальні з генетичної і інфекційної точки
зору, Прюзінер запропонував у 1991р. сучасну концепцію патогенезу
губкообразних трансмісивних енцефалопатій. Суть її полягає в тому, що людина
може бути інфікована пріонами двома способами:
спадкова передача
по Менделя (аутосомно-домінантний тип успадкування). Однак це не prima facie
спадкування, а послідовне через попередню генну аутореплікацію
інфекційного агента
трансмісія
інфекційного агента аліментарним або ятрогенним шляхом.
Пріонові захворювання
є одночасно і інфекційними, і спадковими хворобами. Вони можуть
бути і спорадичними в тому сенсі, що є випадки, в яких не виявляють
ніякого відомого фактора ризику, хоча найбільш імовірно, що інфекція була
придбана одним з двох раніше зазначених способів. Виходячи з сучасних
знань, трансмісія пріонових енцефалопатій визначається трьома факторами: дозою
інфекту, шляхом інфікування, видовим бар'єром.
Доза інфекційного
агента, отримана господарем, залежить від кількості тканини інфекту і його
вірулентної здатності (інфекційний титр). Але необхідно завжди пам'ятати, що
при повторній експозиції обов'язково існує ризик кумулятивного ефекту.
Шлях інфікування
пріонами відіграє важливу роль у розвитку захворювання і має свою певну
ієрархію. За ступенем значущості шляхи інфікування можна розподілити в такій
послідовності:
інтрацеребральні
інтравенозного
інтраперітонеальний
підшкірний
оральний
Як приклад
залежно від дози та шляхи надходження інфекту служать експерименти, які
показали, що доза, необхідна для зараження пріонами мишей при оральному шляху
повинна бути в 200 000 разів вище, ніж при інтрацеребральні.
При попаданні
інфекційного пріонів білка в здоровий організм у ньому починається наступне
(рис.3): в результаті з'єднання однієї молекули інфекційного пріонів білка
(РrРSс) з однією молекулою клітинного (нормального) пріонів білка (РrРС) в
молекулі останнього відбуваються просторові зміни. А саме: дві з
чотирьох спірально завитого структур в молекулі клітинного пріонів білка (А)
витягуються. Саме це просторове зміна призводить до того, що
молекула такого білка стає інфекційної: РrРSс + РrРС = 2 РrРSс і так
далі ...
рис.3. Розмноження
пріонів в клітинах
Таким чином, на відміну
від усіх відомих інфекційних агентів, інфекційний пріонних білок не
синтезується заново, а накопичується виключно за рахунок перетворення
нормального клітинного білка в інфекційний.
Видовий
бар'єр.
Трансмісія пріонових
губкообразних енцефалітів у лабораторних і диких тварин тривалий час
є предметом численних досліджень. Помічено, що при першій
прояві хвороби у певного виду тварин час інкубації дуже тривалий,
тоді як після першого ж пасажу новому господарю в межах цього ж виду, воно
скорочується. У наступних пасажах воно зменшується ще більше до тих пір, поки
не досягне стабільного періоду, характерного для даного виду. Ця
стійкість до пріонних інфекції у різних видів отримала назву
"видовий бар'єр". Встановлено, що для подолання видового бар'єру і
розповсюдження зараження всередині самого виду необхідні дуже високі дози
інфекту. Однак дослідники звернули увагу на той факт, що при однаковій
дозі інфекту трансмісивність підгострих губкообразних енцефалітів в одних
випадках (наприклад, скрепі овець) залежить від джерел агента, а в інших --
відразу, а від виду донора, і від виду реципієнта.
Виявлено, що при
різних способах введення патологічних пріонів через різні
периферійні шляхи, включаючи черевну порожнину, шлунок, інфекційний агент
спочатку з'являється в клітинах лімфоретікулярной системи мигдаликів, тимуса,
лімфатичних вузлів і особливо селезінки. У першу чергу інфект
визначається в B-клітинних зонах.
Автори показали, що
диференційовані B-лімфоцити беруть участь у нейроінвазії пріонів. Це,
на їхню думку, може мати значення для попередження хвороби і використано в
терапевтичних цілях.
При аліментарному
зараженні пріони в Пейєрових бляшках тонкої кишки проникають через клітинні
мембрани у внутрішні структури лімфоїдних клітин, відкіля надалі вони
потрапляють в інші органи імунної системи: лімфовузли, селезінку, мигдалики
ін У цих органах можлива часткова реплікація пріонів. Передбачається, що
дендритні клітини є пермісивними для периферійної репродукції
пріонів. З органів імуногенезу пріони по нервах досягають найближчих аксонів.
В області аксона може відбуватися їх значна реплікація. При досягненні
критичної концентрації пріони просуваються у напрямку до спинного, а потім
головного мозку.
Після підшкірного
зараження гризунів пріони виділяються з селезінки (1-й тиждень після зараження),
з селезінки і лімфатичних вузлів (5-13-й тиждень), з спинного мозку (13-17-я
тиждень) і з головного мозку (17-19-й тиждень). Встановлено, що патологічні
зміни в мозку з'являються на 25-му тижні, а клінічні прояви починають
реєструватися з 34-го тижня. Всі уражені органи містять до 10 млн.
інфекційних одиниць на 1 г, проте в них, за винятком головного мозку, не
виявляється ніяких патологічних змін. За деякими даними, максимум
інфекційності досягається до 40-го дня, тобто задовго до клінічного захворювання
у зовні цілком здорової тварини, коли ще не можна розпізнати хворобу і
вжити заходів з профілактики і лікування. З цієї обставини випливають
труднощі ранньої діагностики і небезпека передачі інфекції з продуктами
харчування.
Експериментально доведено,
що реплікація пріонового агента може відбуватися як в нейронах, так і в
гліальних елементах. Деякі автори вважають, що астроцити та інші гліальні
клітини, можливо, грають ключову роль у патогенезі пріонних інфекції. Це
підтверджується високим рівнем цитокінів на пізній стадії захворювання. До того
ж на лінійних мишах, у яких були інфіковані тільки гліальні клітини,
отримана морфологічна картина губкообразной енцефалопатії.
Інфікованість органів
імуногенезу передбачає перенесення інфекційного агента з кров'ю. Проте ні в
інкубаційному періоді, ні в Преклінічні стадії, ні навіть у розпал хвороби
поки не знаходять біологічних зрушень у периферичній крові.
Після
внутріцеребрального впровадження у тваринний організм пріони-протеїну PrP-Sc, він
починає вибірково накопичуватися в мозку. Є докази
існування транспорту PrPC і PrPSc уздовж аксонів. Більшість клітинних
пріонів протеїну приєднуються до зовнішньої поверхні мембрани клітин якорем
глікопротеїдів після проходження через комплекс Гольджі. Подібно до інших
протеїнів, ізоформа пріони протеїну PrPSc проходить всередину клітини через фісури,
що знаходяться на поверхні клітини. На відміну від клітинної ізоформи
пріони-протеїну PrPSc накопичується в клітці.
Імуно-електронномікроскопіческіе
дослідження вказують на те, що накопичення PrPSc відбувається в структурах
вторинних лізосом, що містять фігури мієліну, багаті фосфоліпідами. Після
пошкодження лізосом і загибелі клітини пріони заселяють інші клітини.
Внутрішньоклітинний накопичення PrPSc в головному мозку виявляється губкообразной
дистрофією нейронів, загибеллю нервової клітини і реактивним астроцітозним гліозу,
що і визначає нейроморфологію пріонових захворювань.
Патоморфологія
пріонових енцефалопатій.
Нейропатолог пріонових
хвороб людини характеризується 4 класичними мікроскопічними ознаками:
губкообразнимі
змінами
втратою нейронів
астроцітозом
формуванням амілоїдних
бляшок
Макроскопічно у всіх
випадках пріонових енцефалопатій відзначено незначне зменшення маси
головного мозку, в окремих спостереженнях відзначена помірна атрофія звивин,
головним чином у осіб з пролонгованим перебігом захворювання.
Мікроскопічно
пріонових губкообразная енцефалопатія характеризується наявністю безлічі
овальних вакуоль (спонгіоз) від 1 до 50 мікрон в діаметрі в нейропіле сірого
речовини кінцевого мозку. Вакуолі можуть виявлятися в будь-якому шарі кори мозку. Це
можуть бути окремі вакуолі або групи, розділені на ділянки. На парафінових
зрізах вакуолі виглядають оптично порожніми, однак у деяких з них при
забарвленні гематоксиліном і еозином нерідко виявляється дрібна зернистість. Вакуолі
можуть зливатися в мікроцісти (200 мікрон і більше), в результаті чого
істотно спотворюється цитоархітектоніка кори. У цитоплазмі великих нейронів
кори також може виявлятися вакуолізація.
Крім кори
губкообразние зміни нейропіля і вакуолізація цитоплазми нейронів відзначаються
по ходу всіх полів Аммонових рогів, по ходу зубчастої фасції, в області
підкоркових ядер, таламусі і корі мозочка. Залучення в патологічний процес
мозочка є найбільш характерним проявом цієї хвороби, хоча ступінь
спонгіоза в ньому дуже варіабельна. Злиття вакуоль не характерно для
мозжечкові ушкоджень. Спонгіоз частіше представлений мікровакуолямі діаметром
1-50 мікрон, розташованими в молекулярному шарі.
Губкообразние зміни
постійно супроводжуються зменшенням числа нейронів різних відділів кори. У
основному страждають нейрони III-VI шару. В окремих збережених нейронах
наголошується вакуолізація цитоплазми, деякі нейрони зморщені, гіперхромні.
Ступінь випадання нейронів корелює з вираженістю губкообразних змін
і відповідає тривалості захворювання. Описані ознаки поєднуються з
проліферацією клітин астрогліі. У проліферуючих астроцитів виявлені
різні дистрофічні зміни, починаючи з вакуолізація цитоплазми і кінчаючи
появою гладких форм з подальшим клазматодендрозом. Мієлінові волокна кори
залишаються незмінними.
При тривалому перебігу
захворювання найбільш виражені вакуолізація і випадання нейронів, що
супроводжується спонгіозним статусом, з широко поширеною в усіх відділах
грубої вакуолізація, повним колапсом кори головного мозку у вигляді нерегулярно
спотвореного каркаса гліальних тканини з невеликими вкрапленнями збережених
нейронів. Взагалі, чим довше триває перебіг хвороби, тим більш явними будуть
мікроскопічні зміни. У базальних гангліях і таламусі виражена загибель
нейронів може поєднуватися з гліозу і атрофією. У мозочку спостерігаються різкі
дистрофічні зміни аж до загибелі зернистих клітин і клітин Пуркіньє.
Збережені клітини Пуркіньє гіперхромні, набряклі, з явищами тігроліза і
лізисом ядер. Мієлінові волокна, прилеглі до кори та ядерних групам мозочка,
часто варикозно роздуті, з явищами фрагментації. Разом з тим, необхідно
підкреслити, що демієлінізація волокон при всіх формах пріонових хвороб не
спостерігається.
Одним з морфологічних
ознак пріонових енцефалопатій є наявність пріони-протеїнових (PrP)
бляшок, які зазвичай видно як округлені еозинофільні структури. Вивчення
структури та топографії PrP бляшок має велике як теоретичне, так і
практичне значення. Кількість, локалізація і навіть мікроскопічні ознаки
бляшок варіюють при різних формах і типах пріонових енцефалопатій. Такі
бляшки характерні для хвороби Куру. Багато авторів їх так і називають
Куру-бляшки. Рідше вони зустрічаються при спорадичній та сімейної хвороби
Крейтцфельда-Якоба, але дуже часто (більше 70%) - за її новою формою. У
одиничних спостереженнях їх описують при сімейної фатальною безсонні.
Дуже часто PrP
амілоїдні бляшки локалізуються в клітинах зернистого шару кори мозочка, але
можуть також розташовуватися в молекулярному шарі і в білій речовині. Вони, як
правило, оточені блідо-рожевим ореолом. Інтенсивність забарвлення бляшок
різна. Можливо, тому їх не завжди вдається виявити. Для цього
використовують стандартні імуногістохімічні методи з PrP антитілами. У
виявлених полімерах протеїну, після забарвлення конго-рот, при поляризаційною
мікроскопії виявляється зелене дв?? йное променезаломлення.
Спинний мозок візуально
практично збережений. Лише інколи відзначають значне зменшення числа
мотонейронів. У жодному з спостережень не було виявлено демієлінізації білого
речовини спинного мозку. Незважаючи на відносно високу концентрацію пріонів,
спостерігалася у периферичних нервах, виражених структурних змін в них
немає.
Клініка всіх форм
пріонових енцефалопатії може бути представлена різноманітною неврологічної
симптоматикою, обумовленої вакуолізація і загибеллю нейронів (основний
механізм дії пріонів на клітинному рівні) практично в будь-якому відділі
сірої речовини мозку, включаючи мозочок. Типовими є:
розлади
чутливої сфери: амнезія різного ступеня, втрата і збочення
чутливості, випадання функцій органів почуттів
порушення в руховій
сфері: атаксія, знерухомлених, атрофія м'язів, у тому числі дихальних, паралічі
порушення психіки:
втрата професійних навиків, депресія, сонливість, агресивність, зниження
інтелекту, аж до повного недоумства
При розвитку клінічних
проявів немає ні ознак запалення, ні біологічних аномалій у крові або в
енцефало-арахноідальной рідини, ні тестів неінвазивних, ні прямих, ні
непрямих, що дозволяють впевнено поставити діагноз. Електроенцефалограма
сумнівна. Клінічний діагноз підтверджується тільки при гістологічному
вивченні центральної нервової системи: спонгіоз з вакуолізація нейронів,
проліферація астроцитів і глії без ознак запалення і демієлінізації.
в)
Губкообразная енцефалопатія ВРХ
Пізнього листопадовим
ввечері 1986р. в особняку міністра сільського господарства, продовольства і
рибальства Великобританії пролунав тривожний телефонний дзвінок:
"Вибачте, сер!
Говорить керівник центральній ветеринарній лабораторії. Я зобов'язаний повідомити
вам, що ми виявили на території Великобританії нове, невідоме раніше
смертельне захворювання корів ".
Так почалася одна з
найбільш трагічних сторінок в історії інфекційної патології серед тварин.
Завдяки засобам масової інформації про невідому досі хвороби корів
дізналася широка публіка.
Мова йде про так
званої "хвороби скаженої корови" (не має, по суті,
ніякого відношення до сказу), яка відіграла видатну роль у розвитку
досліджень пріонів і спричинених ними захворювань людини і тварин.
А починалося все так. Під
всіх країнах світу існують фабрики і заводи з виробництва м'ясо-кісткового борошна
- Продукту, що отримується шляхом подрібнення і особливої обробки м'ясо-кісткового
відходів з боєнь. На початку технологічного ланцюжка розташований величезний (величиною
з невелику кімнату) приймач, що нагадує за формою растор м'ясорубки, де
кістки та інші не йдуть в їжу людини частини туш і скелетів корів і овець
піддаються ретельному розмелювання і подрібнення з подальшою
різноманітної, у тому числі жорсткої термічною обробкою. У кінці цієї
технологічного ланцюжка варто паперовий мішок, куди сиплеться коричневий
порошок - мясок
