Гістологія

Гістологія, наука, що займається вивченням тканин тварин. Тканиною називають групу клітин, подібних за формою, розмірами і функцій і по продуктах своєї життєдіяльності. У всіх рослин і тварин, за винятком самих примітивних, тіло складається з тканин, причому в вищих рослин і тварин у високоорганізованих тканини відрізняються великим різноманітністю структури і складністю своїх продуктів; поєднуючись один з одним, різні тканини утворюють окремі органи тіла.

Гістологія вивчає тканини тварин; дослідження рослинних тканин зазвичай відносять до анатомії рослин. Гістологія іноді називають мікроскопічною анатомією, оскільки вона вивчає будову (морфологію) організму на мікроскопічному рівні (об'єктом гістологічного дослідження служать дуже тонкі тканинні зрізи і окремі клітини). Хоча ця наука перш за все описова, в її завдання також входить інтерпретація тих змін, які відбуваються в тканинах у нормі та патології. Тому гістолог необхідно добре розбиратися в тому, як формуються тканини в процесі ембріонального розвитку, яка їхня здатність до росту в постембріонального період і яким вони піддаються змінам в різних природних і експериментальних умовах, у тому числі в ході свого старіння і загибелі складових їх клітин.

Історія гістології як окремої гілки біології тісно пов'язана зі створенням мікроскопа і його вдосконаленням. М. Мальпігі (1628-1694) називають «батьком мікроскопічної анатомії», а отже гістології. Гістологія збагачувалася спостереженнями і методами дослідження, що проводилися або створювалися багатьма вченими, основні інтереси яких лежали в області зоології або медицини. Про це свідчить гістологічна термінологія, увічнити їх імена в назвах вперше описаних ними структур або створених методів: острівці Лангерганса, ліберкюнови залози, купферови клітини, Мальпігі шар, забарвлення по Максимову, забарвлення по Гимзе і т.п.

В даний час набули поширення методи виготовлення препаратів та їх мікроскопічного дослідження, що дають можливість вивчати окремі клітини. До таких методів належать техніка заморожених зрізів, фазово-контрастна мікроскопія, гістохімічних аналіз, культивування тканин, електронна мікроскопія; остання дозволяє детально вивчати клітинні структури (клітинні мембрани, мітохондрії та ін.) За допомогою скануючого електронного мікроскопа вдалося виявити найцікавішу тривимірну конфігурацію вільних поверхонь клітин і тканин, яку неможливо побачити під звичайним мікроскопом.

Походження тканин. Розвиток зародка з плідного яйця відбувається у вищих тварин в результаті багаторазових клітинних поділів (дроблення); що утворюються при цьому клітини поступово розподіляються по своїх місцях в різних частинах майбутнього зародка. Спочатку ембріональні клітини схожі один на одного, але в міру наростання їх кількості вони починають змінюватися, набуваючи характерні особливості і здатність до виконання тих чи інших специфічних функцій. Цей процес, званий диференціюванням, в кінцевому підсумку призводить до формування різних тканин. Всі тканини будь-якої тварини походять з трьох вихідних зародкових листків: 1) зовнішнього шару, або ектодерми; 2) самого внутрішнього шару, або ентодерми; і 3) середнього шару, або мезодерми. Так, наприклад, м'язи і кров - це похідні мезодерми, вистилка кишкового тракту розвивається з ентодерми, а ектодерма утворює покривні тканини і нервову систему.

Основні типи тканин. Гістологія зазвичай розрізняють у людини і вищих тварин чотири основні тканини: епітеліальну, м'язову, сполучну (включаючи кров) і нервову. В одних тканинах клітини мають приблизно однакову форму і розміри і так щільно прилягають одна до одної, що між ними не залишається або майже на залишається міжклітинної простору, а також вони тканини покривають зовнішню поверхню тіла й вистилають його внутрішні порожнини. У інших тканинах (кісткової, хрящової) клітини розташовані не так щільно і оточені міжклітинним речовиною (матриксом), яке вони продукують. Від клітин нервової тканини (нейронів), що утворюють головний і спинний мозок, відходять довгі відростки, закінчуються дуже далеко від тіла клітини, наприклад у місцях контакту з м'язовими клітинами. Таким чином, кожну тканину можна відрізнити від інших за характеру розташування клітин. Деяким тканин притаманне синцитіальних будову, при якому цитоплазматичні відростки однієї клітини переходять в аналогічні відростки сусідніх клітин; така будова спостерігається в зародковій мезенхіми, пухкої сполучної тканини, ретикулярної тканини, а також може виникнути при деяких захворюваннях.

Багато органів складаються з тканин декількох типів, які можна розпізнати по характерному мікроскопічної будови. Нижче дається опис основних типів тканин, що зустрічаються у всіх хребетних тварин. У безхребетних, за винятком губок і кишковопорожнинних, теж є спеціалізовані тканини, аналогічні епітеліальної, м'язової, сполучної і нервової тканин хребетних.

Епітеліальна тканину. Епітелій може складатися з дуже плоских (лускових), кубічних або ж циліндричних клітин. Іноді він буває багатошаровим, тобто що складається з декількох шарів клітин; такий епітелій утворює, наприклад, зовнішній шар шкіри у людини. У інших частинах тіла, наприклад у шлунково-кишковому тракті, епітелій одношаровий, тобто всі його клітини пов'язані з підлеглою базальної мембраною. У деяких випадках одношаровий епітелій може здаватися багатошаровим: якщо довгі осі його клітин розташовані непаралельність один одному, то складається враження, що клітини знаходяться на різних рівнях, хоча насправді вони лежать на одній і тій ж базальної мембрани. Такий епітелій називають багаторядним. Вільний край епітеліальних клітин буває покритий віями, тобто тонкими волосовидний виростамі протоплазми (такий війкового епітелій вистилає, наприклад, трахею), або ж закінчується «щіткової облямівкою» (епітелій, що вистилає тонкий кишечник); ця облямівка складається з ультрамікроскопічні Цифрові виростів (т.зв. мікроворсинок) на поверхні клітини. Крім захисних функцій епітелій служить живою мембраною, через яку відбувається всмоктування клітинами газів і розчинених речовин і їх виділення назовні. Крім того, епітелій утворює спеціалізовані структури, наприклад залози, що виробляють необхідні організму речовини. Іноді секреторні клітини розсіяні серед інших епітеліальних клітин; прикладом можуть служити келихоподібних клітини, виробляють слиз, в поверхневому шарі шкіри у риб або в вистилки кишечника у ссавців.

М'язова тканину. М'язова тканина відрізняється від інших своєю здатністю до скорочення. Ця властивість обумовлено внутрішньою організацією м'язових клітин, які містять велику кількість субмікроскопіческіх скорочувальних структур. Існує три типи м'язів: скелетні, звані також поперечносмугастих або довільними; гладкі, або мимовільні; серцевий м'яз, що є поперечно, але мимовільної. Гладка м'язова тканина складається з веретеновідних одноядерних клітин. Поперечно м'язи утворені з багатоядерних витягнутих скорочувальних одиниць з характерною поперечної смугастість, тобто чергуванням світлих і темних смуг, перпендикулярних довгої осі. Серцева м'яз складається з одноядерних клітин, з'єднаних кінець в кінець, і має поперечну смугастість; при цьому скоротливі структури сусідніх клітин з'єднані численними анастомозу, утворюючи безперервну мережу.

Сполучна тканину. Існують різні типи сполучної тканини. Найважливіші опорні структури хребетних складаються з сполучної тканини двох типів - кісткової і хрящової. Хрящеві клітини (хондроцити) виділяють навколо себе щільне пружне основна речовина (матрикс). Кісткові клітини (остеокласти) оточені основним речовиною, що містить відкладення солей, головним чином фосфату кальцію. Консистенція кожної з цих тканин визначається зазвичай характером основної речовини. У міру старіння організму вміст мінеральних відкладень в основній речовині кістки зростає, і вона стає більш крихкою. У маленьких дітей основна речовина кістки, а також хряща багато органічними речовинами, завдяки цьому у них звичайно бувають не справжні переломи кісток, а т.зв. надломи (переломи по типу «Зеленої гілки»). Сухожилля складаються з волокнистої сполучної тканини; її волокна утворені з колагену - білка, секретованої фіброцітамі (сухожильних клітинами). Жирова тканина буває розташована в різних частинах тіла; це своєрідний тип сполучної тканини, що складається з клітин, в центрі яких знаходиться велика глобул жиру.

Кров. Кров є абсолютно особливий тип сполучної тканини; деякі гістології навіть виділяє її в самостійний тип. Кров хребетних складається з рідкої плазми і формених елементів: червоних кров'яних клітин, або еритроцитів, що містять гемоглобін; різноманітних білих клітин, або лейкоцитів (нейтрофілів, еозинофілів, базофілів, лімфоцитів і моноцитів), і кров'яних платівок, або тромбоцитів. У ссавців зрілі еритроцити, що надходять у кров'яне русло, не містять ядер; у всіх інших хребетних (риб, земноводних, плазунів і птахів) зрілі функціонуючі еритроцити містять ядро. Лейкоцити ділять на дві групи - зернистих (гранулоцити) і незерністих (агранулоціти) - в залежності від наявності або відсутності в їх цитоплазмі гранул; крім того, їх не важко диференціювати, використовуючи фарбування спеціальною сумішшю барвників: гранули еозинофілів набувають при такому фарбуванні яскраво-рожевий колір, цитоплазма моноцитів і лімфоцитів - блакитний відтінок, гранули базофілів - пурпурний відтінок, гранули нейтрофілів - слабкий ліловий відтінок. У кров'яному руслі клітини оточені прозорою рідиною (плазмою), в якій розчинені різні речовини. Кров доставляє кисень у тканини, видаляє з них діоксид вуглецю і продукти метаболізму, переносить поживні речовини і продукти секреції, наприклад гормони, з одних частин організму до інших.

Нервова тканина. Нервова тканина складається з високо спеціалізованих клітин - нейронів, сконцентрованих головним чином у сірій речовині головного і спинного мозку. Довгий відросток нейрона (аксон) тягнеться на великі відстані від того місця, де знаходиться тіло нервової клітини, що містить ядро. Аксони багатьох нейронів утворюють пучки, які ми називаємо нервами. Від нейронів відходять також дендрити - більш короткі відростки, звичайно численні і гіллясті. Багато аксони покриті спеціальним мієлінової оболонкою, яка складається з шваннівською клітин, що містять жироподібні матеріал. Сусідні шваннівською клітини розділені невеликими проміжками, званими перехопленнями Ранвей; вони утворюють характерні поглиблення на аксонів. Нервова тканина оточена опорної тканиною особливого типу, відомої під назвою нейроглії.

Заміщення тканини і регенерація. На протягом усього життя організму постійно відбувається зношування або руйнування окремих клітин, що становить один з аспектів нормальних фізіологічних процесів. Крім того, іноді, наприклад в результаті якоїсь травми, відбувається втрата тієї чи іншої частини тіла, що складається з різних тканин. У таких випадках для організму вкрай важливо відтворити втрачену частину. Однак регенерація можлива лише в певних межах. Деякі щодо просто організовані тварини, наприклад Планар (плоскі хробаки), дощові черв'яки, ракоподібні (краби, омари), морські зірки і голотурії, можуть відновлювати частини тіла, втрачені цілком з яких-небудь причин, у тому числі в результаті мимовільного відкидання (аутотоміі). Щоб відбулася регенерація, недостатньо одного лише утворення нових клітин (проліферації) в збереглися тканинах; новоутворені клітини повинні бути здатні до диференціювання, щоб забезпечити заміну клітин усіх типів, що входили до втрачені структури. У інших тварин, особливо у хребетних, регенерація можлива лише в деяких випадках. Тритон (хвостаті амфібії) здатні регенерувати хвіст і кінцівки. Ссавці позбавлені цієї здатності, а проте і в них після часткового експериментального видалення печінки можна спостерігати в певних умовах відновлення досить значного ділянки печінкової тканини.

Більш глибоке розуміння механізмів регенерації і диференціювання безсумнівно відкриє багато нових можливостей для використання цих процесів в лікувальних цілях. Фундаментальні дослідження вже внесли великий вклад у розвиток методів пересадки шкіри і рогівки. У більшості диференційованих тканин зберігаються клітини, здатні до проліферації і диференціювання, але існують тканини (зокрема, центральна нервова система у людини), які, будучи повністю сформованими, не здатні до регенерації. Приблизно в однорічному віці центральна нервова система людини містить належну їй кількість нервових клітин, і хоча нервові волокна, тобто цитоплазматичні відростки нервових клітин, здатні регенерувати, випадки відновлення клітин головного або спинного мозку, зруйнованих у результаті травми або дегенеративного захворювання, невідомі.

Класичними прикладами заміщення нормальних клітин і тканин в організмі людини є оновлення крові і верхнього шару шкіри. Зовнішній шар шкіри - епідерміс - лежить на щільному сполучнотканинне шарі, т.зв. дермі, забезпеченою дрібними кровоносними судинами, що доставляють їй поживні речовини. Епідерміс складається з багатошарового плоского епітелію. Клітини його верхніх шарів поступово трансформуються, перетворюючись на тонкі прозорі лусочки - процес, званий зроговінням; врешті-решт ці лусочки злущуються. Таке злущування особливо помітно після сильних сонячних опіків шкіри. У земноводних та плазунів скидання ороговілої шару шкіри (линька) відбувається регулярно. Щоденна втрата поверхневих клітин шкіри компенсується за рахунок нових клітин, що надходять з активно зростаючого нижнього шару епідермісу. Розрізняють чотири шару епідермісу: зовнішній роговий шар, під ним - блискучий шар (у якому починається зроговіння, і його клітини при цьому стають прозорими), нижче -- зернистий шар (в його клітинах накопичуються пігментні гранули, що викликає потемніння шкіри, особливо під дією сонячних променів) і, нарешті, найбільш глибокий - зачатковий, або базальний, шар (в ньому протягом всього життя організму відбуваються мітотичний поділу, що дають нові клітини для заміни злущуються).

Клітини крові людини та інших хребетних теж постійно оновлюються. Кожному типу клітин властива більш-менш певна тривалість життя, після закінчення якої вони руйнуються і видаляються з іншими клітинами крові - фагоцитами ( «пожирачами клітин»), спеціально пристосованими для цієї мети. Нові кров'яні клітини (замість зруйнувалися) утворюються в кровотворних органах (у людини і ссавців -- в кістковому мозку). Якщо втрата крові (кровотеча) або руйнування клітин крові під дією хімічних речовин (гемолітичних агентів) наносять клітинним популяціям крові великої шкоди, кровотворні органи починають продукувати більше клітин. При втрати великої кількості еритроцитів, що постачають тканини киснем, клітинам тіла загрожує кисневе голодування, особливо небезпечне для нервової тканини. При недоліку лейкоцитів організм втрачає здатність опиратися інфекціям, а також видаляти з крові руйнуються клітини, що саме по собі веде до подальших ускладнень. У нормальних умовах втрата крові служить достатнім стимулом для мобілізації регенеративних функцій кровотворних органів.

Реакції тканин на аномальні умови. При пошкодженні тканин можлива деяка втрата типової для них структури в як реакція на що виникло порушення.

Механічне пошкодження. При механічному пошкодженні (розрізі або переломі) тканинна реакція спрямована на те, щоб заповнити розрив і возз'єднати краї рани. До місця розриву спрямовуються слабо диференційовані елементи тканин, зокрема фібробласти. Іноді рана буває така велика, що хірургу доводиться вн?? сить в неї шматочки тканини, щоб стимулювати початкові стадії процесу загоєння; для цього використовують уламки або навіть цілі шматки кістки, отримані при ампутації та зберігаються в «банку кісток». У тих випадках, коли шкіра, навколишнє велику рану (наприклад, при опіках), не може забезпечити загоєння, вдаються до пересадки клаптів здорової шкіри, узятих з інших частин тіла. Такі трансплантати в деяких випадках не приживляється, оскільки пересадженою тканини не завжди вдається утворити контакт з тими частинами тіла, на які її переносять, і вона відмирає або відторгається реципієнтом.

Сторонні об'єкти. Дуже характерна реакція виникає у відповідь на проникнення в тканину чужорідних об'єктів. Якщо, наприклад, куля потрапила в частину тіла, що не має життєво важливого значення, вона незабаром виявляється відгородженій від прилеглих тканин утворився навколо неї відкладенням волокнистої тканини. Аналогічна реакція виникає при проникненні в тканини деяких паразитів. Так, трихинелла (Trichinella spiralis), яка потрапляє в організм людини з погано просмажене зараженої свининою, проникає в м'язи, де волокниста тканина утворює навколо неї капсулу. У легенях туберкульозних хворих навколо скупчень хвороботворних бактерій утворюються туберкульозні горбки, що складаються з концентричних шарів тканини. У цих та інших випадках тканини організму намагаються створити бар'єр між стороннім тілом, будь воно живим або неживим, і власними тканинами організму.

Тиск. Омозолелості виникають при постійному механічному пошкодженні шкіри в результаті тиску на неї. Вони проявляються у вигляді добре знайомих усім мозоль і потовщень шкіри на підошвах ніг, долонях рук і на інших ділянках тіла, які відчувають постійний тиск. Видалення цих потовщень шляхом видалення не допомагає. До тих пір, поки тиск буде продовжуватися, освіта омозолелостей не припиниться, а зрізаючи їх ми лише оголює чутливі нижележащие шари, що може призвести до утворення ранок та розвитку інфекції.

Методи вивчення тканин. Розроблено безліч спеціальних методів виготовлення тканинних препаратів для мікроскопічного дослідження. Існує також особливий метод, званий культурою тканин, що дозволяє спостерігати і досліджувати живі тканини.

Культура тканини. Ізольовані шматочки тканин або органів поміщають в поживні розчини в умовах, виключають можливість зараження мікробами. У цій незвичайній середовищі тканини продовжують зростати, виявляючи багато особливостей (такі, як потреба в поживних речовинах, кисні, визначеному просторі і т.п.), характерні для них в нормальних умовах, тобто коли вони перебувають у живому організмі. Культивовані тканини можуть зберігати і багато хто з своїх структурних і функціональних ознак: фрагменти серцевого м'яза продовжують ритмічно скорочуватися, шкіра зародка продовжує рости і диференціюється в звичайному напрямі. Однак іноді культивування виявляє такі властивості тканини, які у неї в звичайних умовах не виражені і могли б залишитися невідомими. Так, вивчаючи будову клітин аномальних новоутворень (пухлин), не завжди вдається встановити їх приналежність до тієї чи іншої тканини або їх ембріональний походження. Однак при вирощуванні у штучному живильному середовищі вони набувають риси, характерні для клітин певної тканини або органу. Це може виявитися надзвичайно корисним не тільки для правильної ідентифікації пухлини, але і для встановлення органу, в якому вона спочатку виникла. Деякі клітини, наприклад фібробласти (клітини сполучної тканини), дуже легко піддаються культивування, що робить їх цінними експериментальними об'єктами, зокрема в тих випадках, коли необхідний однорідний матеріал для випробування нових лікарських препаратів.

Вирощування тканинної культури вимагає певних навичок і устаткування, проте це найважливіший метод вивчення живих тканин. Крім того, він дозволяє одержати додаткові дані про стан тканин, вивчалися звичайними гістологічними методами.

Мікроскопічні дослідження та гістологічні методи. Навіть поверхневий огляд дозволяє відрізнити одні тканини від інших. М'язову, кісткову, хрящову і нервову тканини, а також кров можна розпізнати неозброєним оком. Проте для детального дослідження необхідно вивчати тканини під мікроскопом при великому збільшенні, що дозволяє побачити окремі клітини і характер їх розподілу. Під мікроскопом можна досліджувати вологі препарати. Приклад такого препарату - мазок крові; для його виготовлення наносять краплю крові на предметне скло і розмазують по ньому в вигляді тонкої плівки. Однак ці методи зазвичай не дозволяють отримати повну картину розподілу клітин, а також ділянок, в яких тканини з'єднуються.

Живі тканини, витягнуті з тіла, піддаються швидких змін; тим часом будь-яке незначне зміна тканини веде до спотворення картини на гістологічному препараті. Тому дуже важливо відразу після вилучення тканини з організму забезпечити її збереження. Це досягається за допомогою фіксаторів - рідин різного хімічного складу, які дуже швидко вбивають клітини, не спотворюючи деталі їх будови і забезпечуючи збереження тканини в цьому - фіксований - стані. Склад кожного з численних фіксаторів був розроблений в результаті багаторазового експериментування, і тим же способом багаторазових спроб і помилок було встановлено потрібне співвідношення в них різних компонентів.

Після фіксації тканину зазвичай піддають зневоднення. Оскільки швидкий перенесення на спирт високої концентрації привів би до зморщування і деформації клітин, зневоднення виробляють поступово: тканина проводять через ряд судин, що містять спирт в послідовно зростаючої концентрації, аж до 100%. Після цього тканину зазвичай переносять в рідину, добре змішуються з рідким парафіном; найчастіше для цього використовують ксилол або толуол. Після короткочасного витримування в ксилолі тканина здатна поглинати парафін. Просякання ведеться в термостаті, щоб парафін залишався рідким. Всю цю т.зв. проводку виробляють вручну або ж поміщають зразок у спеціальний прилад, який виконує всі операції автоматично. Використовується і більш швидка проводка з використанням розчинників (наприклад, тетрагідрофуран), здатних змішуватися як з водою, так і з парафіном.

Після того, як шматочок тканини повністю просочився парафіном, його поміщають у невелику паперову або металеву форму і додають до неї рідкий парафін, заливаючи їм весь зразок. Коли парафін затвердіє, виходить твердий блок з укладеної в ньому тканиною. Тепер тканину можна нарізати. Зазвичай для цього використовують спеціальний прилад - мікротом. Зразки тканин, взяті під час операції, можна нарізати, попередньо заморозивши, тобто не проводячи обезводнення і заливки в парафін.

Описану вище процедуру доводиться дещо модифікувати, якщо тканина, наприклад кістка, містить тверді включення. Мінеральні компоненти кістки, спершу потрібно видалити; для цього тканину після фіксації обробляють слабкими кислотами - цей процес називають декальцінірованіем. Наявність у блоці кістки, не піддалася декальцінірованію, деформує всю тканину і ушкоджує різальний край ножа мікротому. Можна, однак, розпилявши кістку на дрібні шматочки і обточуючи їх яких-небудь абразивом, отримати шлиф - надзвичайно тонкі зрізи кістки, придатні для вивчення під мікроскопом.

мікротом складається з кількох частин; головні з них - ніж і утримувач. Парафіновий блок прикріплюють до власника, який переміщається щодо краю ножа в горизонтальній площині, а сам ніж при цьому залишається нерухомим. Після того, як отримано один зріз, тримач за допомогою мікрометричні гвинтів просувають вперед на певний відстань, відповідне бажаної товщини зрізу. Товщина зрізів може досягати 20 мкм (0,02 мм) або становити всього 1-2 мкм (0,001-0,002 мм); вона залежить від розмірів клітин у даної тканини і зазвичай коливається від 7 до 10 мкм. Зрізи парафінових блоків з укладеної в них тканиною поміщають на предметне скло. Далі видаляють парафін, розміщуючи скла з зрізами в ксилол. Якщо потрібно зберегти в зрізах жирові компоненти, то для заливки тканини замість парафіну використовують карбовакс - синтетичний полімер, розчинний у воді.

Після всіх цих процедур препарат готовий для фарбування - дуже важливого етапу виготовлення гістологічних препаратів. У залежно від типу тканини і характеру дослідження застосовують різні методи фарбування. Ці методи, як і методи заливки тканини, вироблялися в ході багаторічних експериментів, однак постійно створюються і нові методи, що пов'язано як з розвитком нових напрямків досліджень, так і з появою нових хімічних речовин та барвників. Барвники є важливим інструментом гістологічного дослідження в силу того, що вони по-різному поглинаються різними тканинами або їх окремими компонентами (клітинними ядрами, цитоплазмою, мембранними структурами). В основі фарбування лежить хімічна спорідненість між складними речовинами, що входять до складу барвників, і певними компонентами клітин і тканин. Барвники застосовують у вигляді водних або спиртових розчинів, залежно від їх розчинності і вибраного методу. Після фарбування препарати промивають у воді або спирті, щоб видалити надлишок барвника; після цього пофарбованими залишаються тільки ті структури, які поглинають даний барвник.

Щоб препарат зберігався протягом досить довгого часу, пофарбований зріз накривають покривним склом, змазаним яких-небудь клейкою речовиною, яке поступово твердне. Для цього використовують канадський бальзам (природна смола) і різні синтетичні середовища. Приготовлені таким чином препарати можна зберігати роками. Для вивчення тканин в електронному мікроскопі, що дозволяє виявити ультраструктури клітин і їх компонентів, застосовують інші методи фіксації (зазвичай з використанням осмієво кислоти і глутаральдегіда) та інші середовища для заливки (зазвичай епоксидні смоли). Спеціальний ультрамікротом зі скляним або алмазним ножем дозволяє отримувати зрізи товщиною менше 1 мкм, а постійні препарати монтують не на предметних стеклах, а на мідних сіточкою. Нещодавно були створені методи, що дозволяють застосовувати ряд звичайних гістологічних процедур фарбування після того, як тканина була піддана фіксації і заливки для електронної мікроскопії.

Для описаного тут трудомісткого процесу необхідний кваліфікований персонал, однак при масовому виробництві мікроскопічних препаратів використовують конвеєрну технологію, при якій багато етапів обезводнення, заливки і навіть фарбування виробляються автоматичними приладами для проводки тканин. У тих випадках, коли необхідно терміново поставити діагноз, зокрема під час хірургічної операції, тканини, отримані при біопсії, швидко фіксують і заморожують. Зрізи таких тканин виготовляють за кілька хвилин, не заливають і відразу фарбують. Досвідчений патоморфології може по загальному характеру розподілу клітин відразу поставити діагноз. Проте для детального дослідження такі зрізи непридатні.

Гістохімія. Деякі методи фарбування дозволяють виявляти в клітинах ті чи інші хімічні речовини. Можливо диференціальне фарбування жирів, глікогену, нуклеїнових кислот, нуклеопротеїнів, визначених ферментів та інших хімічних компонентів клітини. Відомі барвники, інтенсивно фарбують тканини з високою метаболічної активністю. Вклад гістохіміі у вивчення хімічного складу тканин постійно зростає. Підібрано барвники, флуорохроми і ферменти, які можна приєднати до специфічних імуноглобулінів (антитіл) і, спостерігаючи зв'язування цього комплексу в клітці, ідентифікувати клітинні структури. Ця область досліджень становить предмет імуногістохімії. Використання імунологічних маркерів в світлової та електронної мікроскопії сприяє швидкому розширенню наших знань про біології клітини, а також підвищенню точності медичних діагнозів.

«Оптичне фарбування ». Традиційні гістологічні методи фарбування пов'язані з фіксацією, яка вбиває тканини. Методи оптичного фарбування засновані на тому, що клітини і тканини, розрізняються по товщині і хімічним складом, володіють і різними оптичними властивостями. В результаті, використовуючи поляризоване світло, дисперсію, інтерференцію або фазовий контраст, вдається одержувати зображення, на яких окремі деталі будови добре видно завдяки відмінностей в яскравості і (або) забарвленням, тоді як у звичайному світловому мікроскопі такі деталі малоразлічіми. Ці методи дозволяють вивчати як живі, так і фіксовані тканини і виключають появу артефактів, можливих при використанні звичайних гістологічних методів.

Список літератури

Хем А., Кормак Д. Гістологія, тт. 1-5. М., 1982-1983

Для підготовки даної роботи були використані матеріали з сайту http://bio.freehostia.com