фракціонування і очищення білків

Березів Т.Т., Коровкин Б.Ф.

Після досягнення повної екстракції білків, тобто перекладу білків у розчинений стан, приступають до розділення -- фракціонування суміші білків на індивідуальні білки. Для цього застосовують різноманітні методи: висолювання, теплову денатурацію, осадження органічними розчинниками, хроматографію, електрофорез, розподіл в двофазних системах, кристалізацію та ін

Розчинення білків у воді пов'язано з гідратацією кожній молекули, що призводить до утворення навколо білкової глобули водних (гідратної) оболонок, що складаються з орієнтованих у певній формі в просторі молекул води. За хімічними і фізичними властивостями вода, що входить до складу гідратної оболонки, відрізняється від чистого розчинника. Зокрема, температура замерзання її становить -40 ° С. У цій воді гірше розчиняються цукру, солі та інші речовини. Розчини білків відрізняються великою нестійкістю, і під дією різноманітних чинників, що порушують гідратацію, білки легко випадають в осад. Тому при додаванні до розчину білка будь-яких водовіднімаючих засобів (спирт, ацетон, концентровані розчини нейтральних солей лужних металів), а також під впливом фізичних факторів (нагрівання, опромінення і ін) спостерігаються дегідратація молекул білка і його випадіння в осад.

висолювання. При додаванні розчинів солей лужних і лужноземельних металів відбувається осадження білків з розчину. Зазвичай білок не втрачає здатність розчинятися у воді знову після видалення солей методами діалізу або гельхроматографіі. Висолювання білків зазвичай користуються в клінічній практиці при аналізі білків сироватки крові та інших біологічних рідин, а також у препаративної ензимології для попереднього осадження і видалення баластних білків або виділення досліджуваного ферменту. Різні білки висаліваются з розчинів при різних концентраціях нейтральних розчинів сульфату амонію. Тому метод знайшов широке застосування в клініці для поділу глобулінів (випадають в осад при 50% насичення) і альбумінів (випадають при 100% насичення).

На величину висолювання білків чинять вплив не тільки природа і концентрація солі, але і рН середовища і температура. Вважають, що головну роль при цьому відіграє валентність іонів. Дія різних іонів прийнято порівнювати не за молярної концентрації солі, а за так званої іонної силі (