Методи визначення С-кінцевої амінокислоти

Березів Т.Т., Коровкин Б.Ф.

Для визначення природи С-кінцевої амінокислоти часто використовують ферментативні методи. Обробка поліпептиду карбоксипептидази, яка розриває пептидних зв'язок з того кінця пептиду, де міститься вільна СООН-група, що призводить до звільнення С-кінцевої амінокислоти, природа якої може бути ідентифікована методом хроматографії.

Запропоновано також хімічний метод Акаборі (S. Akabori), який заснований на гідразінолізе поліпептиду:

Гідразин, викликаючи розпад чутливих до нього пептидних зв'язків поліпептиду, реагує з усіма амінокислотами, за винятком С-кінцевої амінокислоти, оскільки її Карбоксильна група не бере участь у освіту пептидного зв'язку. При цьому утворюється суміш аміноацил-гідразину і вільної С-кінцевої амінокислоти. Останню після обробки всієї суміші ДНФБ відокремлюють і ідентифікують хроматографії-но, для чого утворилися дінітрофенілпроізводние аміноацил-гідразину попередньо екстрагуються оцтово-етиловим ефіром.

С-кінцеву амінокислоту ідентифікують також шляхом обробки поліпептиду поновлюючим агентом, наприклад боргідрідом натрію. У простій формі цю процедуру можна представити в наступному вигляді:

Видно, що в зазначених умовах тільки один, а саме З-концевая, амінокислота буде перетворюватися на